UNIVERSIDAD JUREZ DEL ESTADO DE

DURANGO
FACULTAD DE MEDICINA Y NUTRICIN
Divisin de Estudios de Posgrado e
Investigacin
Maestra en Ciencias de la Salud
NIVELES DE EXPRESION DE LA ENZIMA LACTATO DESHIDROGENASA Y EL
FACTOR DE NECROSIS TUMORAL ALFA Y SU ASOCIACIN CON LA PRESENCIA
DE ACIDOSIS LCTICA TIPO B EN PACIENTES CON NEOPLASIAS
HEMATOLGICAS
DIRECTOR DE TESIS
D.C. Edna Madai Mndez Hernndez
CO-DIRECTOR DE TESIS
D.C. Alfredo Tllez Valencia
PRESENTA
Miguel Wong Serrano.

Introduccin
NEOPLASIAS HEMATOLGICAS.
En Mexico

La mortalidad por cncer en Mxico representa el 13% del total de las

muertes, ocupando el tercer lugar con una tasa de 62.8 por cada 100,000
habitantes

Las leucemias ocupan la segunda causa de muerte con una tasa de mortalidad de 2.71 por
cada 100,000 habitantes.

During J, Fielder W, de Wit M, et al. Lactic acidosis and hypoglicemia in a pacient with high grade non-Hodgkin lymphoma and elevated circulating TNF.alpha. Ann
Hematol 1996; 72: 97-99

 Mxico: Leucemia, Linfoma

Hodking, Mieloma mltiple

no

Hodgkin,

Linfoma

Numero de muertes por cncer en 2015 (todas las edades) ambos

sexos

http://globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_cancer.aspx GLOBOCAN 2012 (IARC) 14.10.2015

Neoplasias Hematolgicas
Mutacin

Cambio Gentico
Celula de la
Medula sea
Timo o
sistema linfoide

Transformacin
Maligna

Mutacin
adicionales

Clona
Anormal

During J, Fielder W, de Wit M, et al. Lactic acidosis and hypoglicemia in a pacient with high grade non-Hodgkin lymphoma and elevated circulating TNF.alpha. Ann
Hematol 1996; 72: 97-99

Evolucin
Clonal

METABOLISMO ENERGETICO DE LAS CELULAS.

During J, Fielder W, de Wit M, et al. Lactic acidosis and hypoglicemia in a pacient with high grade non-Hodgkin lymphoma and elevated circulating TNF.alpha. Ann
Hematol 1996; 72: 97-99

ANTECEDENTES
ACIDOSIS LCTICA.
La acidosis lctica, es una complicacin frecuente en las
neoplasias hematolgicas, se define como una condicin
clnica:
pH<7.35
+ Niveles elevados de lactato

During J, Fielder W, de Wit M, et al. Lactic acidosis and hypoglicemia in a pacient with high grade non-Hodgkin lymphoma and elevated circulating TNF.alpha. Ann
Hematol 1996; 72: 97-99

ANTECEDENTES
Tipo A

B1
Acidosis
Lctica

Diabetes.
Falla renal.
Hepatopatas.
Cetoacidosis alcohlica.

Cncer

Tipo B
Tipo D

B2

B3

Ruiz j Ashok K Hart P type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report Review Of Published Cases
Insights into pathogenesis, and Prospects for Therapy the Scientific World Journal 2011 11;1316-1324

ANTECEDENTES
95 % pacientes que desarrollan acidosis
lctica tipo B
con fenotipo Warburg
fallecen !!!!!

GauthierPM;Szerlip HM.Metabolic acidosis in the intensive care Unit.Crit Care Clin 2002 18:289-308

TNF

la produccin de lactato puede incrementarse por accin

paracrina del TNF, esto debido a su capacidad de
desactivar la piruvato deshidrogenasa,

Existen reportes en los que la hiperlactatemia por si misma incrementa la

trascripcin del gen codificante del TNF

During.
Lactate: A Metabolic Key Player in Cancer
Franziska Hirschhaeuser, Ulrike G.A. Sattler, and Wolfgang Mueller-Klieser

TNF

Las acciones locales de

TNF- en las clulas
tumorales parecen ser
dirigidas selectivamente
hacia
A) La reduccin de la actividad
mitocondrial

B) La inhibicin del transporte

de electrones del citocromodependiente, tanto resulta en
una
mayor
produccin
de
lactato.

J. Duiirig W. Fiedler Lactic acidosis and hypoglycemia in a patient with high.grade non-Hodgkin's lymphoma and elevated circulating TNFa Ann Hematol (1996) 72:97-99
Ruiz J, Ashok K., Hart P. Type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report, Review of Published Cases, Insights into Pathogenesis, and Prospects for Therapy. The Scien
Journal. 2011; 11: 13161324

PREGUNTA DE INVESTIGACIN

EXISTE ASOCIACIN ENTRE LOS NIVELES DE EXPRESION DE

LA ENZIMA LACTATO DESHIDROGENASA Y EL FACTOR DE
NECROSIS TUMORAL ALFA CON LA PRESENCIA DE ACIDOSIS
LCTICA TIPO B EN PACIENTES
CON NEOPLASIAS
HEMATOLGICAS ?

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

Efecto Warburg
Factor de mal pronostico y mortalidad
Pertinente elucidar los mecanismos moleculares que permiten
la aparicin de la acidosis lctica tipo B
El poder explicar este mecanismo, podra dar origen a nuevos
blancos teraputicos

ortante estudiar los mecanismos que influyen en la aparicin de acidos

a mejorar la calidad de vida del paciente diagnosticado con alguna neo
o prevenir el desarrollo de esta complicacin y mejorar el pronostico de
Ruiz J ashkook

JUSTIFICACIN.

OBJETIVO GENERAL.
DETERMINAR SI EXISTE ASOCIACIN ENTRE LOS NIVELES
DE EXPRESION DE LA ENZIMA LACTATO DESHIDROGENASA
Y EL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL ALFA CON LA
PRESENCIA DE ACIDOSIS LCTICA TIPO B EN PACIENTES
CON NEOPLASIAS HEMATOLGICAS?

OBJETIVOS ESPECFICOS.

Evaluar los niveles de cido lctico en la poblacin

sujetos con neoplasias hematolgicas para identificar la
presencia de acidosis lctica B.

Cuantificar los niveles plasmticos de TNFa y el perfil

expresin de la enzima lactato deshidrogenasa entre
sujetos con y sin acidosis lctica tipo B

OBJETIVOS ESPECFICOS.

Correlacionar el nivel plasmticos de TNF con la expresin

relativa de la enzima lactato deshidrogenasa

Estimar la fuerza de asociacin entre el nivel plasmtico de

TNF y el perfil de expresin de lactato deshidrogenasa con la
presencia de acidosis lctica tipo B.

MATERIALES Y MTODOS.
Tipo de diseo:

Estudio de casos y controles.

Poblacin de estudio

Pacientes del CECAN SSD

Grupos de estudio:
Definicin de caso:

Definicin de control:

Pacientes diagnosticados con

neoplasias hematolgicas con
acidosis lctica tipo B.

Pacientes diagnosticados con

neoplasias hematolgicas sin
acidosis lctica tipo B.

MATERIAL Y MTODOS

MATERIAL Y MTODOS

MATERIAL Y METODOS

PROCEDIMIENTOS

CUANTIFICACIN RELATIVA DE LA EXPRESIN

DE LOS GENES
LDHA
plataforma del equipo StepOne
kit TaqMan Universal PCR MasterMix. de Applied
Biosystem.
Curvas de calibracin para los genes control y
experimentales con el fin de calcular una
eficiencia de amplificacin entre 90-110% y
establecer una concentracin ideal de cDNA de
trabajo.

CUANTIFICACIN RELATIVA DE LA EXPRESIN

DE LOS GENES

Se realizo una prueba de

expresin al azar en
cinco pacientes 5
muestras de control

Por triplicado, para estimar las

diferencias significativas entre los
grupos y determinar el ptimo ciclo
de la PCR en la que la fluorescencia
dio el mejor ciclo exponencial

Se cuantificar la expresin del gen

de la
b-actina para la
normalizacin de la expresin de los
genes a analizar.

ANALISIS ESTADISTICO

CONSIDERACIONES TICAS.

El protocolo fue evaluado y aprobado por los Comits de tica e

Investigacin de:
Centro Estatal de Cancerologa, SSD
Hospital General 450, SSD

Segn La Ley General de Salud en Materia de Investigacin para la

Salud, se clasifica la investigacin como Investigacin con riesgo
mnimo.
Atiende los principios de la declaracin de Helsinki.

Escrutinio
Escrutinio

Anlisis

Asignacin
Casos 5

51 sujetos

Excluidos
Expediente incompleto 7
No medicin de lactato 8
No mestizos 3
NO desean continuar 20

Incluidos 13
Mujeres :3
Hombres:10

Mujer 1
Hombres 4

Controles 8
Mujer 2
Hombres 6

Anlisis comparativo de las principales caractersticas

gasomtricas y bioqumicas de los grupos de estudio
Casos

Controles

pH

7.46 (7.36 - 7.52)

7.5 (7.45 -7.55)

0.518

pCO2, mm Hg

26.00 (21.8 - 32.0)

24.0 (22.5 - 3.2)

0.758

pO2, mm Hg

43.8 (31.0 - 50.9)

58.5 (30.8 - 95.2)

0.350

HCO3, mEq/L

16.8 (16.4 - 21.2)

19.6 (18.3 - 22.5)

0.265

cido lctico, mmol/L

2.8 1(1.8 - 3.20)

1.16 (0.79 - 1.29)

0.004

Los valores que se muestran como mediana (rango).

Prueba U de Mann Whitney

Caractersticas clnicas y bioqumicas de los grupos de estudio.

Tabla 2. Anlisis comparativo de las principales caractersticas bioqumicas de los grupos de estudio.

Casos

Controles

Creatinina, mg/dl

0.7 (0.4-0.8)

0.7 (0.3-2.0)

0.115

Urea, mg/dl

31.5 (21-66)

21.4 (16-98)

0.271

Glucosa, mg/dl

132 (78-162)

92.5 (84-110)

0.096

Na, mEq/L

137 (116-141)

137 (135.8-141.0)

0.234

Ca, mEq/L

0.76 (0.48-0.89)

0.82 (0.48-0.95)

0.179

Cl, mEq/L

112 (106-118)

119 (108-130)

0.564

K, mEq/L

3.6 (2.6-4.0)

3.0 (2.37-3.79)

0.639

Los valores que se muestran como mediana (rango).

Prueba U de Mann Whitney

Caractersticas clnicas y bioqumicas de los grupos de estudio.

Tabla 3. Anlisis comparativo de las pruebas de funcionamiento heptico de los grupos de estudio.

Casos

Controles

TGO, U/l

19.5 (11-63)

13 (9-14)

0.110

TGP, U/l

23.5 (17-36)

22 (21-39)

0.775

Fosfatasa alcalina, mg/dl

63.5 (60-121)

104 (85-210)

0.100

Albmina, mg/dl

3.3 (2.4-3.7)

3.4 (2.2-43.1)

0.058

Globulina, mg/dl

3.0 (1.9-5.2)

2.8 (2.8-3.6)

0.126

Bilirrubina total, mg/dl

0.8 (0.3-.9)

1.0 (1.0-7.0)

0.073

Bilirrubina directa, mg/dl

0.6 (0.3-0.7)

0.6 (0.3-0.7)

1.000

Bilirrubina indirecta, mg/dL

0.1 (0.0-0.3)

0.3 (0.3-0.7)

1.241

Los valores que se muestran como mediana (rango).

Prueba U de Mann Whitney

Caractersticas clnicas y bioqumicas de los grupos de estudio.

Tabla 4. Anlisis comparativo de variables hematolgicas entre de los grupos de estudio.

Casos

Controles

Leucocitos K/l

2.2 (0.23-7.36)

4.6 (1.21-66.2)

0.039

Eritrocitos, M/l

2.1 (1.81-2.92)

2.5 (2.15.-2.85)

0.776

Monocitos

4.3 (1.0-8.8)

5.7 (1.0-9.6)

0.820

Eosinofilos

1.04 (0.7-1.4)

1.0(0.1-1.0)

0.461

Hemoglobina, g/dl

6.3 (4.3-8.9)

8.3 (6.2-10.7)

0.832

19 (13-26)

24 (18-31)

0.906

VCM

88.9 (86.1-94.9)

93.5 (88.9-95)

0.353

HMC

30.5 (29.6-31.0)

31.4 (31.1-32.5)

0.771

CHCM

34.6 (32.7-36.4)

34 (33.4-35.8)

0.457

55.2 (5.7-320)

28.6 (8-148)

0.207

Hematocrito, %

Plaquetas, K/ l

Los valores que se muestran son mediana (rango). xPrueba U de Mann Whitney

Niveles Plasmaticos de TNF

p 0.727

Controles

Casos

Curva Estandarizada

Curva Estandarizada

Curva Estandarizada

Quiantificacion Relativa

Quiantificacion Relativa

Conclusiones preliminares
No se observan diferencias significativas en los
parmetros bioqumicos, gasomtricos ni
hematolgicos entre los grupos de estudio, con
excepcin del nivel de lactato (variable
dependiente)
Los niveles de TNFa se comportaron de manera
similar en ambos grupos de estudio

Conclusiones preliminares
Con respecto a la expresin de la enzima lactato
deshidrogenasa, es necesario completar los
experimentos para definir si observa un patrn
diferencial entre los grupos de estudio.

CRONOGRAMA
Fecha

Feb - Jun
2014

Redaccin y
revisin de
protocolo

Aprendizaje
de tcnicas
de laboratorio

Agosto
-Dic 2014

Feb - Jun
2015

AgostoDic 2015

Toma de
muestras

Procesamient
o de
muestras

Anlisis de
muestras

Anlisis
estadstico

Resultados