RECUPERACION

ANTIGENICA
Giancarlo Del
Carpio

EQUIPO BASICO

Estufa

EQUIPO BASICO
Bao de

Mara

EQUIPO BASICO

Microscopio

EQUIPO BASICO
Medidor de

ph.

EQUIPO BASICO
Refrigeradora

exclusiva para IHQ

EQUIPO BASICO
Bascula

analtica

REACTIVOS BASICOS
Descripcin.
PBS para Lavar
TRIS - 7.6
Recuperador antignico
Hidrxido de sodio
Alcohol acido
Acetona
Xilano

Hematoxilina de Mayer

Amoniaco (Toxico)

Carbonato de litio
Peroxido de Hidrogeno (toxico)
DAB (carcinognico)

TECNICA DE IHQ
Para un proceso tcnico de Inmunohistoqumica

IHQ se requiere de la solicitud debidamente rotulada

por el medico.

LAMINAS CON ADHESIVO

Se clasifican en:
Cargadas
Xilanizadas
y preparadas en el
(comerciales laboratorio
de IHQ)
y de Poly-l-lisina
Nota:
Se rotulan las laminas con el numero de
biopsia, anticuerpos a marcar y control
positivo.

Controles positivos
Importancia:
Calidad de elaboracin de
tcnica.
Confirmacin de diagnostico.
Respaldo legal

CORTE
Procedimiento

Enfriar los bloques y cortar el microtomo (de tres a

en cinco micras).
Se utiliza cuchilla descartable.
Cuidar que el corte sea liso y no presente
pliegues.
Se utiliza el bao de flotacin a 45
grados centgrados de temperatura.
Secar en la estufa por 30 minutos a 60
grados centgrados.

MICROTOMO

ESTUFA

RECUPERACION ANTIGENICA
Se dividen

en:
Enzimtica
No
Enzimtica
Enzimtica:
La temperatura optima y el tiempo de
incubacin depender del tiempo en que los
tejidos hayan sido sometidos al tipo de fijador
del antigeno buscado.

CONTINUACION RECUPERACION ANTIGENICA

No Enzimtica:
Horno microondas.
Su uso es un mtodo muy
eficiente para el
tratamiento de la
recuperacin antignica.
Se recomienda
estandarizar la cantidad
de solucin a usar, el
numero de laminas a
tratar y el tiempo de
procesamiento; la
potencia ideal del horno
ser aquella que haga
ebullir la solucin despus
de 2 a 3 minutos y que a

CONTINUACION RECUPERACION ANTIGENICA (No Enzimtica)

Vaporera.
Tambin representa una
buena alternativa y se
puede combinar con el
uso de microondas.
Bao de Mara.
tiene varias ventajas en
general es accesible en
cualquier laboratorio, fcil
de utilizar y produce
buenos resultados.

SOLUCIONES AMORTIGUADORAS O
TAMPON
Estas soluciones cumplen una funcin

muy importante en las tcnicas de IHQ ya

que son el medio en el cual se desarrolla
el reconocimiento del antigeno por los
anticuerpos as que debe de parecerse
mucho a las condiciones normales que
tiene en el organismo vivo (ph.7.3 a 7.4).

RECUPERACION ANTIGENICA EN
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS O TAMPON
(ph. 7.6)
Se calienta el Bao de Mara a 98-99

grados
centgrados con la solucin recuperadora
(Citrato de sodio con ph. 6.0 o recuperador
antignico.)
Se colocan las laminas de 45 minutos a
una hora y se dejan enfriar por 20 minutos.
Colocar en PBS

BLOQUEO DE LA PEROXIDASA
ENDOGENA

Colocar las laminas en solucin de

peroxide de hidrogeno al 3%
durante una hora (sirve para
eliminar el exceso de sangre)

rpidamente
Lavar
destilada

con

agua

Marcadores
EPITELIALES:
Citoqueratina
Ag de membrana epitelial
Ag carcinoembrionario

LINFOCITOS:
CD 45 (Ag comn leucocitario)
CD 20 (L26 Linfocitos B)
CD 68

Marcadores
MESENQUIMALES:
Vimentina
Desmina
Actina

Nota: Leer instructivo.

Preparacin de Anticuerpos
Primarios

Colocar en PBS
Preparar

anticuerpos
primarios

DILUCIONES
1:20------1 parte de anticuerpo y 19 partes de diluyente
1:100----1 parte de anticuerpo y 99 partes de diluyente
1:500----1 parte de anticuerpo y 499 partes de diluyente
1:1000---1 parte de anticuerpo y 999 partes de
diluyente

INCUBACION

alrededor
Limpiar
del tejido el exceso
de PBS

INCUBACION

Colocar el

anticuerpo
primario

INCUBACION
Incubar con el anticuerpo primario en una

cmara hmeda cuidando de que el nivel de

agua sea adecuado y que este no se
derrame tapar bien y evitar corriente de aire y
luz mantener 45 minutos o durante toda la
noche.

Autostainer plus

INCUBACION
Lavar con

PBS
Incubar con

el
anticuerpo
secundario
durante
45 minutos

INCUBACION
Lavar con PBS
Incubar con el

complejo
AB durante 45 minutos
Lavar con
PBS
Revelar con DAB

Revelado
Incubar el tiempo necesario para que el

color marrn aparezca, detener la accin

reveladora con agua del chorro

Revelado
Revisar en el

microscopio
la reaccin

Contraste
Lavar con agua
Contrastar con hematoxilina de Mayer

los citoplasmticos con verde brillante los

nucleares
Secar en la estufa y montar

Finalizacin del Proceso