MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS
Conocer los medios
de cultivo

Aplicar fisiologa al
cultivo de
microorganismos
en el laboratorio

Recordar tcnicas
de tincin en
microbiologa

Identificar medio
de cultivo mtodo
de siembra

Principios de cultivo
microbiolgico

Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las

bacterias presentes en una muestra clnica.

Determinar qu bacterias entre las que se

desarrollan tienen ms probabilidades de ser las
causantes de la infeccin y cuales son sus posibles
contaminantes o colonizadores.

Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias

de importancia clnica para permitir su
identificacin y su caracterizacin.

CULTIVO PURO

CULTIVO MIXTO
CULTIVO CONTAMINADO

DEFINICIN
Sustrato slido, lquido o semislido que contiene
todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y
desarrollo de los grmenes.
Fuentes de energa, carbono, nitrgeno, fsforo,
azufre y varios minerales.
pH
Luz
Temperatura
Esterilidad absoluta (salvo excepciones)
Recipientes adecuados

Es importante destacar que la transicin exitosa de un microorganismo in

vivo a un ambiente in vitro va a depender de:
Disponibilidad de nutrientes esenciales
Condiciones ambientales adecuadas
pH
Temperatura
Oxgeno y CO2
Presin
Luz

SLIDOS
LQUIDOS

SEMISLIDOS

Clasificacin de los medios de

cultivo segn consistencia

MEDIOS SLIDOS

semislido

Caldo nutritivo
Caldos de enriquecimiento
Caldos revitalizadores

Enriquecimiento

Nutritivo

Selectivo y
diferencial

Clasificacin de los medios

de cultivo segn utilizacin

MEDIOS NUTRITIVOS

Contienen nutrientes que favorecen el

desarrollo de la mayora de los
microorganismos sin requerimientos
especiales de cultivo.

No promueven el crecimiento de ningn

agente en particular

MEDIOS DE
ENRIQUECIMIENTO
Contienen nutrientes especficos
requeridos para el crecimiento de
patgenos que pueden estar presentes
solo o con otras especies de bacterias en
la muestra de un paciente
Se utilizan para favorecer el desarrollo
de un patgeno determinado a partir de
una mezcla de microorganismos
mediante el uso de especificidad de
nutrientes

En general, son medios lquidos

MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o ms agentes que inhiben el

crecimiento de los microorganismos que no se
quieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, sales

biliares, alcoholes, cidos y antibiticos

MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que las

colonias de una especie o un tipo bacteriano exhiban
ciertas caractersticas metablicas o de cultivo que
puedan utilizarse para diferenciarlas de otras
bacterias que crecen en el mismo agar

MEDIOS ESPECIALES

MEDIOS CROMGENOS
MEDIOS DE TRANSPORTE
MEDIOS DE CONSERVACIN

Sustancias cromognicas:
- Son productos qumicos de sntesis que son incoloros
cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que son
hidrolizados por enzimas microbianas especficas.
- Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se
libera el compuesto cromognico, que adquiere un color
intenso.
- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatgenos), se pone
en evidencia la actividad enzimtica de la B- glucoronidasa
o B- galactosidasa de las bacterias formndose colonias de
diferentes colonias segn la especie.
- Identificacin presuntiva, haciendo innecesaria la
realizacin de pruebas bioqumicas.

Medios para bacterias no exigentes

- agar
- extracto de carne
- peptona
- NACL
- leche descremada (congelar cepas)

NORMATIVA ISP, entregar

CONTROL DE CALIDAD
El Control de Calidad en la preparacin y evaluacin
de los medios de cultivo es considerado como una
esencial y buena prctica de laboratorio, necesaria para
mantener el nivel y la ejecucin de cualquier tcnica
microbiolgica.

Proceso continuo que se extiende desde las materias

primas ; a travs del productor hasta el producto final
utilizado en los diferentes departamentos de anlisis y
diagnstico microbiolgico.

 Recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters

(Productividad)
Inhibicin o suspensin de los microorganismos no
deseados.
(Selectividad)
Propiedades bioqumicas (diferenciales y
diagnsticas)
Propiedades fsicas (por ejemplo, pH, Volumen)
Sea estril .... etc.
El Jefe inmediato responsable del rea
* Deber analizar mensualmente los resultados de las pruebas
realizadas por el responsable del departamento de control de calidad
* Evaluar el cumplimiento de objetivos a travs de los resultados

CRITERIOS DE EVALUACIN DE LA CALIDAD

DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.
Se evala utilizando criterios objetivos del medio respecto a:
La recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters
La inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados tiene que ser
cuantitativa
Los atributos ( por ejemplo: Propiedades fsicas y bioqumicas)
Rajadura del plato o envase
Variaciones en el volumen del medio
Hemlisis
Cristales en el medio
Presencia de burbujas
Presencia de cogulos
Cambio de color normal
Contaminacin
Falla en la inhibicin de microorganismos saprofitos
Esterilidad

PRUEBAS FUNCIONAMIENTO
Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea
recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones
(ATCC) de varios gneros y especies de acuerdo al
medio de cultivo a analizar.
El control del funcionamiento consistir en
comprobar:
capacidad del medio de recuperar un bajo
nmero de los microorganismos ms sensibles
para los que ha sido preparado.
capacidad de inhibir un alto nmero de los
microorganismos que deben ser inhibidos en
caso de los medios selectivos y
diferenciar los microorganismos para los que ha
sido diseado en caso de los medios diferenciales.

RECONSTRUCCIN DEL MEDIO DE

CULTIVO
DESHIDRATADO
Cumplir con las instrucciones de preparacin del medio de cultivo

indicado en la etiqueta del envase

Cumplir con los procedimientos tcnicos de frmulas enviadas por

el cliente
Utilizar agua destilada de calidad
Determinar el pH del M de C
Esterilizacin del medio de cultivo
Procedimiento escrito
Control de esterilidad del Medio de Cultivo

AGAR INFUSION DE CARNE

MEDIO DE LOWENSTEIN
JENSEN

AGAR SANGRE

ERRORES EN LA PREPARACIN
Apelmazamiento del producto deshidratado
DEFECTO
El envase no fue cerrado correctamente despus de su
uso.
El envase permaneci abierto por largo rato.
Apelmazamiento del
El producto sobrepas la fecha de vencimiento.
Producto deshidratado

El valor de pH no coincide con el indicado

No fue empleada agua destilada
El medio fue sobrecalentado durante su preparacin
El Ph no fue determinado correctamente
medio
estaba
vencido.
El El
valor
de pH
no coincide

Con el indicado

Aparicin de turbiedad o precipitados:

El medio preparado perdi agua por evaporacin
El medio se calent en exceso
El medio no se calent lo suficiente.
No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:

El medio fue sobrecalentado durante su preparacin.
El pH no fue ajustado correctamente.
El recipiente empleado estaba sucio.
Los azcares contenidos en el medio se caramelizaron

El gel se obtiene ms blando que lo caracterstico

para el medio:
No fue garantizada la disolucin total del agar durante la
preparacin del medio.
No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se aadi
agua en exceso.

El crecimiento de los microorganismos es pobre:

El medio fue sobrecalentado
El valor del pH no fue ajustado correctamente.
La adicin de suplementos al medio se efectu a excesiva
temperatura.
El medio no fue mezclado correctamente.

El crecimiento de los microorganismos es atpico:

Quedaron

residuos de sustancias inhibidoras del

crecimiento no deseables, en los recipientes donde se
prepar o distribuy el medio.
El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.
El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.

ES, POR LO TANTO, MUY

IMPORTANTE QUE EL TECNICO O
QUIMICO SEA QUIEN SUPERVISE Y
CONTROLE TODOS LOS FACTORES
NECESARIOS EN LA PREPARACIN Y
CONSERVACIN DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO, PARA AS LOGRAR AISLAR
E IDENTIFICAR CON EXCELENCIA
LOS DISTINTOS AGENTES
MICROBIANOS.

MTODOS DE
SIEMBRA Y
AISLAMIENTO

SIEMBRA
Sembrar

o inocular es introducir
artificialmente una porcin de muestra
(inculo) en un medio adecuado, con el fin
de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicacin. Una vez
sembrado, el medio de cultivo se incuba a
una temperatura adecuada para el
crecimiento (37C).

Las reglas fundamentales para efectuar la

siembra exigen:

Se efecte en un medio aspticamente

Los medios de cultivo y el instrumental a utilizar
estn estriles.
Se manipule lo necesario.
Se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser
posible utilizando un mechero.

MEDIO SOLIDO EN CAJA DE PETRI

Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa o caja de Petri

y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este
mtodo se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por
inmersin. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de
medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.).
Este mtodo se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaeroflicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inculo.
Con ayuda de una esptula de y se extiende el inculo hasta su absorcin
total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para
microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estra: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido y se deja solidificar.

MEDIO SOLIDO EN TUBO DE

ENSAYE

El medio de cultivo se vierte en tubo y se coloca

inclinado para que gelifique de esta manera.

Microbiologa, Prescotts

Microbiologa, Prescotts

Los mtodos de siembra se utilizan

para
inocular
por
distintos
mtodos sobre un medio de cultivo
apropiado una muestra que
contenga bacterias con el fin de
reproducirlas para aumentar el
nmero de individuos de la
poblacin y formar colonias en el
caso de medios slidos.

Siembra por
aislamiento

TCNICAS DE SIEMBRA
I. Siembra con rastrillo
II. Siembra con asa de cultivo
- Diseminacin en superficie
- Agotamiento en superficie
- Tubos en superficie
- Tubos en profundidad o picada
III. Siembra con trula

Figura 12: Siembra con rastrillo

Manual de microbiologa 2011, U. Mayor

Siembra de diseminacin en
superficie
Manual de microbiologa 2011, U
Mayor

Siembra semi-cuantitativa de
agotamiento en superficie.
Manual de microbiologa 2011, U Mayor

Siembra de tubo en superficie.

Manual de microbiologa 2011, U Mayor

Siembra por picadura.

Manual de microbiologa 2011, U Mayor

CONTEO BACTERIANO

En caja de Petri: Arroja el total de clulas viables

en el cual forma colonias.

Por turbiedad: Las bacterias se multiplican,

torna un tono turbio. (espectrofotmetro)

LECTURA DE LAS PLACAS CUANDO

SE REPRODUCEN LAS BACTERIAS

La identificacin presuntiva o preliminar de una

bacteria se basa en la morfologa colonial, para ello
se forma en cuenta las siguientes caractersticas:

Elevacin:Plana, bajo convexa, convexa rugosa,

crateriforme y convexa y cncava.
Bordes:liso, dentado, ondulado, lobulado, cremado,
ciliado y ramosa (mas comn liso).
Superficie:Lisa y Rugosa
Forma:Circular, ondulada y obulada.

Tamao:puntiforme, pequea, mediana y

grande.
Transmisin de la luz:opaca o translucida.
Reflexin de la luz:Mate y Brillante.
Aspecto:Hmedo y Seco.
Consistencia:Butirosa (brillante, hmeda y
translucida), Mucoide (como moco), Vitrea (opaca,
seco) y seca (si es dura).
Pigmento:Color (rojas, verdes, etc.) y olor.