CROMATOGRAFIA

Descubierta en Rusia en el ao de
1903 por el botnico Michael Tswett
quien separ pigmentos de plantas
en columnas de xido de calcio
utilizo el trmino Cromatografa
(COLOR-GRFICO) derivado del
griego color-cromo y escrito-grfico

CROMATOGRAFIA
CROMATOGRAFIA
DE GASES

CROMATOGRAFIA
LIQUIDA

NOMENCLATURA
La nomenclatura en Cromatografa fue
estandarizada por la
ASTM : AMERICAN SOCIETY FOR
TESTING AND MATERIALS y la
IUPAC : INTERNATIONAL UNION OF PURE
AND APPLIED CHEMISTRY

DEFINICION DE CROMATOGRAFIA
SEGN IUPAC LA CROMATOGRAFA
ES UN MTODO FSICO DE
SEPARACIN EN EL CUAL LOS
COMPONENTE A SER SEPARADOS
SON DISTRUIBUIDOS ENTRE
DOS FASES UNA DE ELLAS ES
ESTACIONARIA, MIENTRAS LA OTRA SE
MUEVE EN UNA DIRECCION DEFINIDA.
LA FASE ESTACIONARIA PUEDE SER UN SLIDO, UN LQUIDO
RETENIDO SOBRE UN SLIDO Y PUEDE ESTAR EXTENDIDA
COMO UNA CAPA O DISTRIBUIDA COMO UNA PELCULA, ETC.
LA FASE MVIL PUEDE SER LQUIDA O GASEOSA.

CROMATOGRAFIA - MODALIDADES
POR LA NATURALEZA DE LA FASE MOVIL

Fase Mvil
- Gas
- Lquido
(*) Cromatografa Lquida
- Capa Fina
- HPLC
- Columna Abierta

Cromatografa
- C. Gaseosa
- C. Lquida (*)

FASE MOVIL
MUESTRA
A+B+C
FASE
ESTACIONARIA

MOVIMIENTO
DE LA FASE MOVIL

SEPARACION
CROMATOGRAFICA
SEPARACION
DE
COMPONENTES

CROMATOGRAMA,
CONCENTRACION,
PERFIL DE BANDA
C
B
A

COMPONENTES
ELUIDOS
DETECTOR

SEPARACION CROMATOGRAFICA

Representacin simplificada de una

columna con partculas uniformes

SEPARACION CROMATOGRAFICA

COCENTRACION

FASE MOVIL

DETECTOR
INICIO
COLUMNA

MODELACION DE
VAN DEEMTER

PARTICULAS FASE
ESTACIONARIA

FASE MOVIL

PERFIL DE
CONCENTRACION DE
BANDA

H=A+B/u+Cu

INTERACCION ANALITO <> FASE

ESTACIONARIA

DIFUSION HACIA DELANTE Y

HACIA ATRS EN LA FASE
MOVIL

FASE MOVIL
BANDA DEL ANALITO

u = L / tm

FASE MOVIL

u: velocidad lineal
FASE
ESTACIONARIA

MOVIMIENTO
SOBRE FASE
ESTACIONARIA

ANALITO RETENIDO SOBRE FASE

ESTACIONARIA
ANALITO MOVIENDOSE FUERA DE FASE
ESTACIONARIA

DESCRIPCION DEL METODO

- La mezcla a separar ser llevada a travs de la columna
mediante el gas inerte
- Los componentes se repartirn entre el gas y un solvente
no voltil (Fase Estacionaria), depositado sobre un slido inerte
(soporte)
- La selectividad del solvente retarda la elucin de los
componentes segn el coeficiente de reparto de cada uno hasta
formar las bandas separadas
- Conforme a estas bandas salgan de la columna, sern graficadas
en funcin del tiempo mediante el detector.

PARTES DE UN SISTEMA
CROMATOGRAFICO
- GAS DE ARRASTRE
- COLUMNA
- INYECTOR
- DETECTORES

PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO

MEDIDOR
DE POMPAS
DE JABON

REGISTRADOR

JERINGA
REGULADOR
DE PRESION
A DOS NIVELES

DIVISOR
DE FLUJO
ROTAMETRO

DETECTOR

ELECTROMETRO
O
PUENTE

INYECTOR

A/D

CONTROLADOR
DEL FLUJO

COLUMNA
BOTELLA
DE GAS
PORTADOR

SISTEMA
PARA EL
TRATAMIENTO
DE DATOS

HORNO TERMOSTATIZADO PARA LA COLUMNA

GAS DE ARRASTRE
- Inerte
- Difusin Gaseosa mnima
- Fcil obtencin
- Alta pureza, libre de humedad
- Compatible con el detector
Los ms comunes son el Helio, Nitrgeno
e hidrgeno.

PROPIEDADES DE LOS GASES DE ARRASTRE

GASES DE ARRASTRE Y VELOCIDAD LINEAL

COLUMNAS
Es la parte ms importante de un Cromatgrafo,
donde se realiza la separacin de los componentes.
TIPOS DE COLUMNAS
- COLUMNAS EMPACADAS.- pueden ser hechas de
vidrio o metal (acero inoxidable), de 2 a 6 mm. De
dimetro interno y de 1 a 3 metros de longitud.
- COLUMNAS CAPILARES.- Son de slice fundida de
0,2 a 0,7 mm. de dimetro interno y de 10 a 100
metros de largo.

COLUMNA EMPACADA

Columna empacada, grado de tortuosidad depende

del empaque de la columna

SECCION TRANSVERSAL DE COLUMNAS

Pelcula
delgada

Pelcula gruesa

Fase
Estacionara,
particulas
Capa de
copolimero
(PLOT)

Soporte y fase
estacionaria

SEPARACION CROMATOGRAFICA

Volumen de fase mvil

Volumen de fase estacionaria

SEPARACION
CROMATOGRAFICA

SANGRADO DE COLUMNA

LIMITE
ISOTERMICO
LIMITE DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA

SEAL DEL
DETECTOR

INYECTORES
- Es el dispositivo por donde ingresa la
muestra a ser analizada.
- Existen diferentes tipos, segn sea la
muestra : Lquida, Gaseosa o Slida.
- La tcnica ms sencilla consiste en
introducir la muestra disuelta en un
solvente.

INYECTOR CAPILAR UNIVERSAL

INYECTOR CONVENCIONAL
CALIENTE, VAPORIZACIN INSTANTNEA
Jeringa

Zona
caliente

Condensacin de
componentes de alto
punto de ebullicin
Instantnea
Evaporacin
(Expansin)

Columna
Venteo con
divisin

Septa

Purga de septa
Gas de srrastre
O-ring

Venteo de split

INYECTOR
Liner de cuarzo

SPLIT/SPLITLESS

Punto de Split
(punta de
columna)

Columna
Capilar

Tuerca de conexin
1/16

LINERS Y EMPAQUE EN INYECTOR SPLIT/SPLITLESS

Empaque
Splitless

Empaque
Split

Porcin gruesa

Porcin gruesa

O-ring

O-ring

Lana de Vidrio
ligeramente
empacada

Lana de vidrio
ligeramente
empacada
Lana de vidrio
fuertemente
empacada

Hendidura

Hendidura

4 mm D I
Wide Bore Liner

2 mm D.I

4 mm D I

Narrow Bore Liner

Wide Bore Liner

EFECTO DE LA VELOCIDAD DE
INYECCION SOBRE EL AREA
Split Mode (fast)

Split Mode (norm)

Ab so lu te Area (10^3)

2000
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
C11

C14

C17

C24

C28

Carbon Number

C32

C36

C40

C44

INYECTOR
COL EMPACADAS

Ingreso de gas

INYECTOR
ON COLUMN

PROGRAMACION DE TEMPERATURA
Se denomina as, al cambio controlado de la
temperatura de la columna durante el anlisis.
* Esta programacin es la extensin lgica del mtodo
Isotrmico para superar las limitaciones de la tcnica
de temperatura constante.
* Para separar muestras complejas , con un rango
amplio de puntos de ebullicin.
* Para mejorar, simplificar o acelerar la separacin.

PROGRAMACION DE TEMPERATURA

1
4

ISOTERMICA
A 45OC

2
3
5

10

20

30

PROGRAMACION DE TEMPERATURA

X4

ISOTERMICA
A 145OC
6

7
8

10

20

30

PROGRAMACION DE TEMPERATURA
PROGRAMACION
DE 30OC A 180OC

1 2

10

20

30

TIEMPO MINIMO
30O

60O

90O

120O

150 O

180O

DETECTORES
El propsito del detector es de monitorear el gas
carrier que emerge de la columna que genera una
seal en respuesta a variaciones en su composicin
debido a los componentes eludos.
CARACTERISTICAS QUE INDICAN SU UTILIDAD :
* Sensibilidad
* Respuesta
* Tiempo de respuesta
* Rango lineal

RELACION SEAL A RUIDO

SEAL DEL
DETECTOR

Seal del
detector
producida por
molculas
eluyentes

Seal, S
Ruido,N
Oscilacin
lnea base

Deriva
Lnea base

TIEMPO DE CORRIDA
(Horas)

DETECTORES
Sensibilidad.- Mnima concentracin de analito que
produce una seal en el detector de por lo menos
dos veces el nivel de ruido llamado background
Respuesta.- Es la magnitud de respuesta de la seal
producida por una unidad de concentracin de
analito en el gas carrier, o cantidad de un analito
medido como rea de pico

DETECTORES
Tiempo de respuesta.- Capacidad de producir una
seal instantneamente a las variaciones de
concentracin en el gas carrier que emerge de la
columna cromatogrfica.
Rango lineal.- El rango de concentracin del analito
sobre el cual es detector responde con la misma
sensibilidad.

LIMITES DE DETECCION

rea de pico

5% de
desviacin

Rango lineal

TIPO DE DETECTORES
Al estudiar los detectores conviene hacer una
distincin de acuerdo con el tipo de sustancias
capaces de detectar:
Segn la especificidad de sus respuesta :
Detectores universales
Detectores especficos
Segn su forma de deteccin:
Detectores destructivos y no destructivos

TIPO DE DETECTORES
Detectores universales
Aquellos capaces de detectar cualquier sustancia de
un modo lineal y cuya respuesta especfica es
independiente de la naturaleza de la sustancia a
detectar
Detectores especficos
Dan una respuesta aceptable para un grupo ms o
menos amplio de sustancias de acuerdo a su
naturaleza qumica, Ejm. ECD, MS, etc.

TIPO DE DETECTORES
Detectores destructivos
Cuando la sustancia analizada queda modificada
qumicamente.
Ejm. Ionizacin de llama
Detectores no destructivos
Capaces de detectar la sustancia sin modificarla
qumicamente.
Ejm. Conductividad Trmica

TIPO DE DETECTORES
* DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA (FID)
* DETECTOR CAPTURA DE ELECTRONES (ECD)
* DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TERMICA (TCD)
* DETECTOR NITROGENO-FOSFORO (NPD)
* DETECTOR FOTOMETRICO DE LLAMA (FPD)
* DETECTOR DE FOTOIONIZACION (PID)
* DETECTOR DE MASAS (MS)

LIMITES DE DETECCION

MDA: Cantidad mnima detectable

LDR: Rango dinmico lineal

DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA

Es el detector universal de la cromatografa de
Gases y es usado con propsitos generales y de
rutina. Se le puede atribuir:
* Alta sensibilidad para todo los compuestos
orgnicos
* Mnima y casi nula respecto al agua, dixido de
carbono, e impurezas del gas de arrastre y entrega
seal cero cuando el analto no esta presente.
* Una lnea base estable
* Buena linealidad

DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA

Al Amplificador

DETECTOR

Colector
Jet

FID

Ingreso de Aire

Ingreso de
Hidrogeno
Extensin del Jet

Tuerca de conexin de la
columna

DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TERMICA
Es el detector universal de la cromatografa de Gases mide
cambios en la conductividad trmica del gas de arrastre causada
por la presencia de sustancias que eluyen de la columna. El
mayor uso es el anlisis de gases y control de procesos.
* La ventaja respecto al FID radica en su capacidad de detectar
gases como CS2, COS, H2S, SO2, CO, NO, NO2 y CO2.
La propiedad de un material de transmitir calor cuando esta
sometida a variaciones de temperatura es conocida como
conductividad trmica
Filamento de tungsteno-renio* sometido a una corriente elctrica
constante y a una temperatura constante pierde calor debido al
cambio en el flujo masa del gas de arrastre.
Algunos compuestos dan picos +, otros dan picos Factor de respuesta depende de la temperatura y la linealidad es
baja

DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TERMICA

DETECTOR
TCD

DETECTOR DE CAPTURA DE
ELECTRONES
Es un detector especfico de la cromatografa de Gases y es
usado para el anlisis de trazas de contaminantes ambientales,
pesticidas y herbicidas clorados
* Alta sensibilidad a compuestos que contengan elementos
electronegativos
* Dos electrodos, celda cilndrica de Ni63 y electrodo colector,
alta energa beta choca con gas de arrastre ( produce electrones
coleccionados por colector)
* Molculas con afinidad por electrones reducen corriente
Oxgeno, agua o sangrado de columna absorben electrones (-)
Mxima temperatura 450C (Ni 63)
Orden de respuesta a los halgenos F<Cl<Br<I

DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES

Colector
(Ando)

Al Amplificador

DETECTOR
ECD

Fuente (Ni 63)

Gas Make-Up

Conexin de
Columna

DETECTOR NPD
Es un detector especifico de la cromatografa de Gases y es
usado para el anlisis de trazas de contaminantes ambientales,
pesticidas y herbicidas nitrogenados y fosforados
* Alta sensibilidad a compuestos que contengan nitrgeno y
fsforo
Bolita de rubi insertada en un filamento de platino, es calentada
elctricamente en presencia de hidrogeno y aire, produce una
fase gaseosa altamente ionizante.
Flujo de hidrogeno y y corriente de calentamiento, crticos
* Evitar en lo posible usar solventes halogenados o para sililacin
Evitar columnas con fase liquida que contengan N o P
Si se tuvieran que usar solventes halogenados o para sililacin,
apagar la corriente mientras eluyen

DETECTOR NPD

DETECTOR
NPD

DETECTOR FOTOMETRICO DE LLAMA

Es un detector especfico de la cromatografa de Gases y es
usado para el anlisis de trazas de compuestos azufrados y
fosforados
* Basado en la formacin de especies quimiluminicentes en una
flama rica en hidrgeno, se mide la intensidad de la emisin.
Se coloca un filtro pasa banda antes del fotomultiplicador, 394
nm para azufre y 526 nm para fsforo
Ms flujo de hidrgeno ms sensible, exceso llama inestable
Rango de temperatura 150 a 275 C
Respuesta al fsforo es lineal.
Para el azufre, a raiz cuadrada de la respuesta es proporcional a
la concentracin de azufre

DETECTOR FPD

DETECTOR
FPD

FACTORES A CONSIDERAR CUANDO SE

ESPECIFICA UN SISTEMA
* Anotar el rango del punto de ebullicin y
caractersticas de la fase vapor de los componentes
* Identificar las caractersticas polares o no polares
de los componentes en la mezcla y sus grupos
funcionales
* Seleccin de la fase estacionaria, ancho de la
pelcula, para dar el requerimiento de
selectividad
y factor de separacin.

la

FACTORES A CONSIDERAR CUANDO SE

ESPECIFICA UN SISTEMA
* Optimizar la velocidad del gas de arrastre (anlisis
rpidos, mnimo tiempo muerto).
* Optimizar la temperatura o seleccionar la mejor
temperatura para un anlisis isotrmico.
* El Helio deber ser el gas de arrastre.
* Probar el sistema con una mezcla de estndares
o una mezcla que incluya compuestos de diferente
carcter polar y punto de ebullicin.

SISTEMA DE TOMA Y PROCESAMIENTO

DE DATOS
El resultado del ensayo
cromatogrfico es :
- La obtencin de fracciones
separadas de los
componentes de la muestra.
- Obtencin de un grfico
o cromatograma
Este registro y la eventual manipulacin se obtienen
a partir de la seal proveniente del detector por
medio de un sistema de toma y procesamiento
de datos.

SISTEMA DE TOMA Y PROCESAMIENTO

DE DATOS
En este sistema se puede
considerar:

REGISTRADOR GRAFICO :

Convierte la seal en un
grfico del tipo x-y
INTEGRADOR :

Permite obtener un registro

grfico (cromatograma) y
procesamiento de datos

SISTEMA DE TOMA Y PROCESAMIENTO

:
DE COMPUTADORA
DATOS
El registro grfico del
cromatograma
Clculos y manipulacin de datos
Almacenamiento de ensayos
Generacin de reportes
Manejo de varios Cromatogramas.
Se requiere de una Interfase analgica-digital que convierta
la seal analgica entregada por el detector.

PROCESAMIENTO DE DATOS
ANALOG
DETECTOR
SIGNAL
DETECTOR

AMPLIFIER

COMPUTING INTEGRATOR
ANALOG TO
DIGITAL
CONVERTER

GC/HPLC
CHROMATOGRAPH

RECORDER

COMPUTER
SYSTEM AND
CHROMATOGRAPHY
ALGORITHMS IN

ROM

KEYBOARD
FUNCTION
SELECTION

PRINTOUT
WRETYRUITIYOPUPPIO+++
+FSGDGFH G HH J DFGHHHH
GGHJH,MKDFGAJGJGJHKHHLJL
LNNNNNNNNNNNNJJKK{H
GGTTHHHHHGGGNMMGGGG
GGGGGHMMJM B
NMMMFFFFFFFFFFFFFFV
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTT
TTTT TTTTTTTTTTT
SDFFGRTHKKILO IKIOOLOO
JKKIUKUYJKIKJTIIL

CROMATOGRAMA
BGN
1.726

3.779 UNDECANE
5.026 1-OCTANOL
5.496 DECANE

7.951 DIMETHYL PHENOL

8.711 DIME ANALINE
9.336 TRIDECANE
BEND
METHOD 1

MODIFIED

CALCULATION

EXT STD

REPORTE DE CROMATOGRAMA

NOMENCLATURA Y CALCULO
La nomenclatura en Cromatografa fue
estandarizada por la
ASTM : AMERICAN SOCIETY FOR
TESTING AND MATERIALS y la
IUPAC : INTERNATIONAL UNION OF PURE
AND APPLIED CHEMISTRY

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
CROMATOGRAMA
LINEA BASE
TIEMPO DE RETENCION (TR)
ANCHO DE PICOS
FACTOR DE CAPACIDAD (K)
FACTOR DE SEPARACION ()
RESOLUCION DE PICO (R)

DEFINICIONES YCROMATOGRAMA
RELACIONES
BASICAS
CROMATOGRAMA

Segn IUPAC es un grfico u otra representacin

de la respuesta del detector, concentracin del
efluente u otra cantidad usada como medida de la
concentracin del efluente , versus el volumen del
efluente o tiempo
Idealmente el pico tiene distribucin normal
gausiana.
El Cromatograma comienza en el momento que
la solucin en ensayo es inyectada.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
LINEA DE BASE

Es la porcin del cromatograma donde slo se aprecia

la elucin de la fase mvil, sin seal debida al soluto

LINEA DE BASE

TIEMPO

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
TIEMPO DE RETENCION (TR)

Es el tiempo que un soluto permanece en la

columna.
Se mide desde el punto de inyeccin al mximo
del pico.
Es caracterstico del soluto para una columna y
condiciones de operacin dadas.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
TIEMPO MUERTO (TO, TM)

Es el tiempo requerido para eluir un componente no

retenido.
Es el tiempo que cualquier componente esta en la
fase mvil.
Se utiliza para medir el volumen vaco de la columna.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
TIEMPO DE RETENCION CORREGIDO (TR)

Mide el tiempo que el componente realmente

est en la fase estacionaria.

Tr = tr - to

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
ANCHO EN LA BASE (Wb)

Es la porcin de la lnea base intersectada por las

tangentes a los lados del pico
Es necesario para calcular la resolucin y el
nmero de platos tericos.
Se puede tomar en varias posiciones, las ms
comunes a: 60,7%, 50%, y en la base del pico.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
PLATO TEORICO (N)

Es un equilibrio del soluto entre la fase mvil y estacionaria.

SE CALCULA CON :

N = 16

tr
Wb

2
= 5.54

tr

W1/2

DONDE : tr y Wb o W1/2 deben

expresarse en las mismas

unidades - VOLUMEN, TIEMPO, DISTANCIA-, ya que N es
adimensional.
UNA BUENA COLUMNA TIENE UN NUMERO ALTO DE PLATOS TEORICOS

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO TEORICO
(H, AEPT, HETP)

Es la longitud de columna -L- requerida para un plato

terico.

H=

Donde : H y L se expresan usualmente en mm.

Una H pequea significa ms platos por unidad de
longitud y por lo tanto mayor eficiencia.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
COEFICIENTE DE REPARTO (K)

Es una propiedad fsica fundamental.

Es caracterstico del soluto en una fase estacionaria.
Depende de la temperatura y es una medida de las
interacciones soluto-fase estacionaria.

K=

Conc. del soluto en f. estac.

Conc. del soluto en f. movil

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
RAZON DE FASES ()

Es el cociente de los volmenes de fase

mvil y estacionaria en la columna.

Volumen de fase mvil

Volumen de fase estac.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
FACTOR DE CAPACIDAD, RAZON DE CAPACIDAD - k-

La razn entre la masa de soluto en fase estacionaria

y la masa de soluto en fase mvil en condiciones de
equilibrio. Es la relacin entre el tiempo que un
soluto permanece en la fase estacionaria y la fase
mvil.

k =

tr

to

Est relacionada con el coeficiente de reparto :

k = K /

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
RESOLUCION - R -

Es una medida cuantitativa del grado de separacin

entre dos picos. una resolucin de 1.5 es una
separacin a la lnea base.

R=

2 (tr2 - tr1)
( Wb1 + Wb2)

Donde los tiempos de retencin y los anchos de los

picos se expresan en las mismas unidades.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
SELECTIVIDAD -( )O FACTOR DE SEPARACION

Mide las diferencias relativas en las fuerzas

de interaccin de dos solutos con la fase estacionaria.
Un valor mayor de significa una columna mas selectiva
y por lo tanto una mejor resolucin

tr2
tr1

k2
k1

k2
k1

( 1)

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
ECUACIN DE LA RESOLUCION:

R=

-1

1 + k

TIEMPO DE ANALISIS Y RESOLUCION

tr =16 R

-1

(1+k)3

k2

ANALISIS CUALITATIVO
* Permite la identificacin de un compuesto.
* Compara el tiempo de retencin del analito
en la muestra, con respecto al tiempo de
retencin del estndar.
* Confirmacin con otra columna de diferente
polaridad.

ANALISIS CUANTITATIVO
* Se obtiene con exactitud la cuantificacin de un
analito en la muestra con respecto a un estndar
de concentracin conocida.
* Se puede calcular la concentracin de un analito
con diferentes mtodos :
- Normalizacin Interna
- Estndar Externo
- Estndar Interno
- Estndar Agregado

ANALISIS CUANTITATIVO
* NORMALIZACION INTERNA :
Ai
Pi=

100
Ai

- Donde :
Pi es el porcentaje del componente i en la
mezcla
Ai es el rea del componente i, y

ANALISIS CUANTITATIVO
* ESTANDAR EXTERNO :
Am CS
P=

D100
AS

- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Am y AS son las reas de la muestra y estndar
CS es la concentracin del estndar y D
factor de dilucin

es un

ANALISIS CUANTITATIVO
* ESTANDAR INTERNO :
Rm CS
P=

D100
RS

- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Rm y RS son las relaciones de rea del analito
a estndar interno en la muestra y
D es un factor de dilucin

ANALISIS CUANTITATIVO
* ESTANDAR AGREGADO :
Am CS
P=
D100
AmS - Am
- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Am y AmS son las reas del analito en la muestra
tal cual la muestra a la que se le ha
agregado estndar respectivamente.
CS es la concentracin del estndar y D es un factor
de dilucin

SYSTEM SUITABILITY TESTS (SST)

PRUEBAS DE CONFORMIDAD DEL SISTEMA

Esto involucra una comparacin de cromatograma de la

muestra vs. el cromatograma del standard
(forma, ancho de pico, resolucin de lnea de base)
Estos parmetros pueden ser calculados
experimentalmente para suministrar el reporte de prueba
de conformidad del sistema cuantitativo; incluye :
- Nmero de platos teoricos
- Factor de capacidad
- Factor de separacin
- Resolucin
- Factor de cola
- Desviacin standard relativa o precisin

NUMERO DE PLATOS TEORICOS

t

INICIO

Picos de Soluto
no retenido

Wh

TIEMPO
n = 5.545 (1/Wh)2 BP or

n = 16 (1/Wb)2 USP

Wb

FACTOR DE CAPACIDAD, K
tR
tM

INICIO

Picos de Soluto
no retenido

TIEMPO

tM = Tiempo de retencin del pico no retenido

tR = Tiempo de retencin del pico de inters

FACTOR DE SEPARACION (Retencin Relativa)

tA
tB
B

INICIO

tM

KA

= K
B

KB

= Factor de capacidad para B

KA = Factor de capacidad para A

Wb1

Wb2

RESOLUCION DE PICO, R
Va
Vb

INICIO

Wh

RS = 2

(VRa- VRb)
(Wa+ Wb)

TIEMPO

USP

(VRb- VRb)
RS = 1.18 (W +W ) BP
ha
hb

Wb1

Wb2

FACTOR DE COLA, T

PICO
FRONTAL

COLA
DE PICO

T=

W
2f

W 0.05
f

0.05h

ALTURA MAXIMA
DE=PICO
W
Ancho a 5% de la altura del Pico

f = Distancia entre el mximo y el borde de entrada del pico

DESVIACION STANDARD RELATIVA

O PRECISION
Esto involucra la reproducibilidad de un nmero
de rplicas de inyecciones (6) de una solucin
analtica
La USP requiere para un mtodo especifico que :
- si la desviacin standard relativa es
menor a 2%, se requiere 5 rplicas de
inyecciones
- si la desviacin standard relativa es
mayor a 2% , se requiere 6 rplicas de
inyecciones

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
ACONDICIONAMIENTO DE LA COLUMNA.- Proceso de calentamiento de
la columna en presencia del flujo de gas portador que elimina las impurezas
voltiles de la fase estacionaria y da lugar a una lnea de base estable.
ADSORCION.- Proceso que ocurre en la superficie de un lquido o slido
como resultado de las fuerzas de atraccin entre el adsorbente y el soluto.
Estas fuerzas pueden ser fsicas, o qumicamente dbiles.
ANALISIS.- Investigacin completa de una muestra mediante separacin e
identificacin de los componentes por cromatografa de gases y medidas
cuantitativas.
ANALISIS EN BLANCO.- Anlisis sin inyectar muestra.
ANODO.- Electrodo cargado positivamente en cualquier circuito elctrico
hacia el cual son atradas los iones y partculas cargadas negativamente.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
COLA.- Cuando el pico no es simtrico o gaussiano y la parte final se
ensancha.
COLUMNA CAPILAR ( WCOT- columna capilar de paredes
impregnadas) .- Columna de pequeo dimetro interno cuya pared
interior est cubierta con fase lquida.
DERIVA DE LA LINEA BASE.- Cualquier cambio regular que ocurre en
la seal de lnea base del detector, normalmente debido a los cambios
en la temperatura de la columna y/o el flujo de gas.
DETECTORES.- Dispositivo que responde a los componentes de la
muestra mediante la produccin de una seal elctrica que puede
medirse y utilizarse para cuantificar la cantidad de cada uno de los
componentes presentes.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
ENSANCHAMIENTO DE BANDA.- Proceso que ocurre en un
cromatgrafo de gases mediante el cual el ancho de un pico de un
componente va aumentando lentamente a medida que aumenta el
tiempo que permanece en la columna.
FASE ESTACIONARIA.- Parte del adsorbente slido o lquido de la
columna que retiene los componentes cuando se disuelven o adsorben
en l.
FASE LIQUIDA.- Material que se encuentra en el interior de la columna,
responsable de la separacin de os componentes debido a la particin
de estos entre la Fase Mvil (Gas Portador) y la fase estacionaria (Fase
Lquida)
FASE MOVIL.- El gas que transporta el soluto (muestra) a lo largo y
ancho de la columna. Este gas portador es inerte y normalmente se
utiliza helio, nitrgeno o hidrgeno.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
GAS PORTADOR (Carrier Gas).- Fase mvil del sistema de
separacin. Gas inerte que transporta la muestra desde el inyector
hasta el detector, a travs de la columna. Este gas suele ser helio,
hidrgeno o nitrgeno.
JERINGAS.- Dispositivos de precisin utilizados para introducir la
muestra en el cromatgrafo. Existen jeringas tanto de gases, como de
lquidos.
LIMITE DE DETECCION.- Cantidad ms pequea de muestra que
puede detectarse en el detector utilizado. Normalmente se define como
la seal que es mayor que dos veces el ruido de fondo. Tambin
llamada Mnima Cantidad Detectable.
LINEA BASE.- Seal del detector que se recoge en un registrador o
integrador, cuando slo pasa el gas portador a travs de l.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
LINEALIDAD.- Cuantitativamente todos los detectores dan lugar a una
respuesta lineal con respecto a la concentracin del soluto dentro de un
rango definido.
PARTICION.- Solubilidad diferencial de una sustancia en dos fases
diferentes. En el caso de la Cromatografa gas-lquido los componentes de
la muestra alcanzan un equilibrio entre la fase gas (mvil) y la fase lquida
(estacionaria). Cada componente tiene un coeficiente de particin diferente
que da lugar a la separacin en la columna.
PICOS FANTASMA.- Picos que nos se deben a componentes de la
muestra, por ejemplo, picos producidos por impurezas del gas portador,
septum o componentes de anlisis previos.
PICO NO RETENIDO.- Compuesto que no se retiene en esa columna. El
tiempo que tarda un compuesto no retenido en atravesar la columna es el
mismo tiempo que tardara el gas portador en atravesarla.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
PROGRAMACION DE TEMPERATURA.- Tcnica comnmente utilizada
con objeto de aumentar la velocidad de elucin de los componentes. La
muestra se inyecta a una temperatura dada que aumenta a una velocidad
definida en C/min.
RESOLUCION.- Grado de separacin entre dos picos.
RUIDO.- Fluctuaciones de la seal de fondo. Esta respuesta depende de la
columna instalada, la pureza del gas portador, componentes electrnicos,
etc. la sensibilidad de cualquier detector se define segn la relacin sealruido.
SANGRADO (Bleed) .- Evaporacin de la fase estacionaria de la columna.
SEPTUM.- Material de goma de silicona localizado en el inyector y a travs
del cual se realiza la inyeccin. Cuando la aguja retrocede, la silicona se
cierra y no permite que se escapen el gas o la muestra.

GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
SISTEMA DE INYECCION.- Dispositivo mediante el cual se introduce la
muestra en la columna a travs de un septum.
SUB-AMBIENTE.- Por debajo de la temperatura ambiente. El horno
enfra por debajo de la temperatura ambiente con el uso de nitrgeno
lquido o nieve carbnica.
TIEMPO DE RETENCION.- Intervalo de tiempo desde el punto de
inyeccin hasta la aparicin del mximo del pico.
VELOCIDAD DE FLUJO.- Velocidad de flujo del gas portador en
mililitros por minuto.

Referencia : Denney, R.C. A Dictionary of Cromatography