USO DAS

TCNICAS
DE BIOLOGIA
MOLECULAR
NA
GENTICA
FORENSE
Alunas: Cauana, Luana e Tuane R.
Disciplina: Biologia Molecular
3 fase Farmcia

INTRODUO

Primeiro mtodo de utilizao de anlise de DNA para identificar

indivduos foi desenvolvido por Alec Jeffreys.

No incio, havia muitas dvidas quanto a reprodutividade. Mas a

anlise do DNA a nvel forense, tornou-se a identificao humana, e
investigao criminal mais fcil.

As primeiras tcnicas forenses de identificao humana eram

convenientes apenas para anlise de DNA de evidencias biolgicas
que continham clulas nucleadas.

INTRODUO

As aplicaes da Biologia Molecular no laboratrio criminal

centralizam-se, em grande parte, na capacidade da anlise do DNA
em identificar um indivduo, atravs de itens recuperados no local
do crime.

INTRODUO
Existe quatro vantagens sobre a tipagem molecular do DNA:
Possibilidade de sua extrao de qualquer fonte de material
biolgico;
O DNA possui um alto potencial discriminatrio;
Alta estabilidade qumica mesmo aps um longo perodo de tempo;
H possibilidade de separ-lo da clula espermtica, de qualquer
outro DNA.

INTRODUO

O nmero de tribunais que tem aceito evidncias baseadas no DNA

cresce a cada dia.

Entende-se que a genotipagem forense se presta, no ncleo

principal de sua finalidade, a estabelecer as correspondentes
vnculos genticos entre amostras.

INFORMAO GENTICA
cidos
nucleicos

Armazenam
informaes
genticas de cada
indivduo

Descobertos em
1869 por Friedrich
Miescher

KOSSEL sculo XX:

DNA (cido
desoxirribonucleico)
RNA ( cido
ribonucleico)

DNA

DNA
DNA GENMICO:

Molcula linear;
Abriga os genes, depositrios
das informaes genticas
responsveis pelas atividades
da clula.
DNA MITOCONDRIAL:

Estrutura circular;
Resistncia a digesto
enzimtica;
Excepcional no estudo de
tecidos antigos e at
arqueolgicos, como ossos,
dentes e cabelos.

ASPECTOS GERAIS DA ANLISE

DO DNA FORENSE
Maior Revoluo cientfica na
esfera forense desde o
reconhecimento das impresses
digitais.
VANTAGENS:
Estabilidade qumica do DNA;
Sua ocorrncia em todas as
clulas nucleadas do
organismo humano.

ASPECTOS GERAIS DA
ANLISE DO DNA FORENSE
Primeiro caso de identificao criminal atravs do DNA:
Estupro e homicdio de adolescentes no condado de Leicester,
Inglaterra, em 1986.

ASPECTOS GERAIS DA
ANLISE DO DNA FORENSE

O sucesso da tipagem de DNA

depende basicamente da
qualidade e quantidade de
DNA extrado das diversas
fontes.

Deve-se ter ateno em

relao contaminao das
evidncias criminais que
contenham material gentico.

FUNDAMENTOS DA BIOLOGIA
MOLECULAR

A Biologia Molecular investiga as interaes entre os diversos

sistemas celulares, incluindo a relao entre DNA, RNA e sntese
proteica.

METODOLOGIA APLICADA A
IDENTIFICAO HUMANA
O processo envolvendo a biologia molecular na forense inclui:
1) coleta de amostras;
2) extrao, purificao e quantificao do DNA de todas as
amostras;
3) anlise dos loci;
4) visualizao dos fragmentos e caracterizao (com o uso da
Eletroforese);
5) interpretao e anlise comparativa dos resultados.

COLETA DE AMOSTRAS PARA

ANLISE FORENSE
Realizada logo aps a identificao possvel pelos mdicoslegistas, odonto-legistas e papiloscopistas;
A escolha do tipo de amostra a ser coletada depende da
conservao da amostra;
O DNA pode ser coletado da maioria dos espcimes biolgicos,
pois uma molcula estvel em ambiente seco e frio;
O material biolgico recuperado na cena do crime pode sofrer
alteraes ambientais que podero ocasionar quebras e alteraes
da cadeia de nucleotdeos;
O armazenamento do material biolgico mido em sacos plsticos
deve ser de no mximo 2 horas ou, quando possvel, permitir que
seque antes do acondicionamento final.

EXTRAO DO DNA FORENSE

O DNA pode ser extrado de amostras de:
Sangue,
Esfregaos bucais,
Saliva,
Osso,
Dente,
Tecidos e rgos,
Fios de cabelos,
Smen.

EXTRAO DO DNA FORENSE

Aps a coleta do material biolgico, o DNA da amostra dever ser
separado de outras substncias celulares, como:
Protenas celulares,
Contaminaes qumicas
Contaminaes microbiolgicas
* Podem diminuir o poder discriminatrio das anlises utilizando o
DNA.

EXTRAO DO DNA FORENSE

A maioria dos procedimentos de extrao de DNA compreende a lise
celular, seguida da remoo das protenas celulares precipitadas e por
fim a precipitao do DNA com sua final eleio.

EXTRAO DO DNA
FORENSE
Mtodos:
Extrao orgnica: Consiste na remoo dos resduos de protenas
do DNA atravs da combinao de dois solventes orgnicos
diferentes: Fenol e Clorofrmio.
Vantagens:
Baixo custo e um alto grau de pureza do DNA a ser investigado.
Desvantagens:
Demora em sua execuo;
Mtodo altamente txico.

EXTRAO DO DNA FORENSE

Lise celular

Desnaturao ou inativao de PTN

PROTENASE K

Solventes orgnicos

Separa-se o DNA das macromolculas

Etanol

DNA precipitado

EXTRAO DO DNA
FORENSE
A resina magntica outro mtodo de extrao de DNA muito
utilizado na gentica forense, sendo as mais utilizadas a DNA
IQTM, da Promega e a ChargeSwitcha, da Invitrogen.

TCNICA DE EXTRAO DIFERENCIAL

PARA CRIMES SEXUAIS
Consiste em uma variao da extrao orgnica.
Divide em duas a etapa de lise celular: a primeira mais branda,
e a segunda, mais robusta.

QUANTIFICAO DO DNA
O excesso de DNA ou a sua limitao pode resultar em
amplificaes inespecfficas ou em no amplificaes.
Sondas especficas para o DNA humano.
Quantificao de DNA por PCR em tempo real:
marcadores com fluorescncia.

REAO DE AMPLIFICAO
PELA POLIMERASE - PCR

MARCADORES MOLECULARES

Polimorfismo de nucleotdeo nico: variao na sequncia de DNA;

Microssatlites ;

Minissatlites;

ELETROFORESE

Metodologia utilizada para a

separao, isolamento, anlise
e manipulao dos cidos
nuclicos.

Incluso ou excluso de
paternidade

Incluso de suspeitos de um
crime

GIS DE POLIACRILAMIDA OU GIS DE

AGAROSE x ELETROFORES CAPILAR

A eletroforese capilar permite que grandes quantidades de

amostras sejam analisadas, alm de necessitar de poucas
quantidades da mesma e ser realizada em menos de 1 hora,
enquanto que para quela realizada com gis de poliacrilamida
necessita-se muitas horas. Sua desvantagem o custo inicial para
a compra dos equipamentos.

INTERPRETAO DOS
RESULTADOS DO EXAME DE
DNA
Inicia-se a anlise dos
resultados comparando os
fragmentos de DNA
amplificados em caso de
paternidade; de amostras
encontradas na cena do crime,
em corpos ou vtimas.

CONCLUSO

A anlise de DNA promete grandes progressos da cincia forense,

fornecendo aos investigadores uma grande chance de excluir
suspeitos que no esto relacionados a cena do crime.

Mtodos baseados na PCR so imediatos, requerem uma pequena

quantidade de material, podem fornecer identificao no ambgua
de alelos individuais.

As anlises de DNA progrediram a ponto de no colocar em dvida

a qualidade dos dados. No futuro, espera-se que as tcnicas sejam
aprimoradas, e que novos e melhores mtodos para anlise sejam
desenvolvidos.