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Expressão gênica 1
Objetivos da regulação da expressão gênica em
bactérias e em organismos multicelulares
Expressão gênica 3
Estrutura Gênica e Definição de Termos
Expressão gênica 6
Diferenças na Iniciação da Transcrição
em Eucariotos e Bactérias
• Em eucariotos as proteínas reguladoras da expressão
gênica (repressores e ativadores) podem influenciar a
iniciação da transcrição, mesmo quando estão ligadas ao
DNA a milhares de pares de nucleotídeos distante do
promotor. Em bactérias os genes são freqüentemente
controlados por uma única seqüência regulatória,
tipicamente localizada próxima ao promotor.
• A iniciação da transcrição em eucariotos deve levar em
consideração a compactação do DNA nos nucleossomos
e as formas mais compactas da estrutura da cromatina.
Expressão gênica 7
As Três RNA-Polimerases das
Células Eucarióticas
• RNA-polimerase I - transcreve os genes para rRNA.
• RNA-polimerase II - transcreve todos os genes que
codificam proteínas, mais alguns genes que
codificam pequenos RNAs (p.ex., aqueles presentes
nos “spliceosomes”).
• RNA-polimerase III – transcreve os genes de tRNAs,
rRNA 5S e genes para pequenos RNAs estruturais.
Expressão gênica 8
Fatores Gerais de Transcrição
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Formação do Complexo de Iniciação
da Transcrição
• TFIID liga-se a região TATA, possibilitando a
ligação de TFIIB.
• Isso é seguido pela ligação de TFIIF e RNA-
polimerase II.
• TFIIE, TFIIH e TFIIJ então se juntam ao
complexo.
• TFIIH usa ATP para fosforilar a RNA-
polimerase II, mudando a sua conformação de
forma que a RNA-polimerase é liberada do
complexo e é capaz de iniciar a transcrição.
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Etapas na formação do complexo de
iniciação da transcrição em eucariotos
Estrutura tridimensional da Proteína que se liga
a TATA (TATA-Binding Protein TBP)
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Complexo TBP-DNA
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Complexo TBP-TFIIA-DNA
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Complexo TBP-TFIIA-TFIIB-DNA
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Os Fatores Transcricionais Seletivos
Aumentam a Atividade do Promotor
• Os promotores isoladamente são geralmente ineficientes.
Fatores de transcrição seletivos que se ligam à região
“upstream” e a “enhancers” aumentam a iniciação.
• Em alguns casos, proteínas adicionais (mediadores,
coativadores) são requeridos para estimular a transcrição.
• Proteínas que se ligam a seqüências de “enhancer” devem
atuar de forma semehante àquelas que se ligam próximas
ao promotor. O DNA entre o “enhancer” e o promotor forma
uma alça para permitir que as proteínas ativadoras ligadas
ao “enhancer” façam contato com as proteínas ligadas ao
promotor.
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Domínios Funcionais dos Fatores
Transcricionais Seletivos
• Domínio de ligação ao DNA - liga a proteína no sítio de
ligação do DNA.
• Seqüências de localização nuclear – requeridas para
transporte para dentro do núcleo.
• Domínio de ativação transcricional - realiza o contato
com os fatores gerais de transcrição.
• Região de dimerização – requerido para formar homo- ou
heterodímeros com outras proteínas.
• Domínio de ligação de ligante – necessário para ligação
de composto que pode funcionar como ativador do fator.
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Motivos de Ligação a DNA nos Fatores de Transcrição
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Os processos de iniciação, alongamento,
processamento e terminação da transcrição são
acoplados em eucariotos
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Acoplamento das
maquinarias envolvidas
na transcrição, capping,
splicing e poliadenilação
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Influência da Estrutura da Cromatina na
Transcrição em Eucariotos
• A maior parte do DNA em uma célula eucariótica está
complexada nos nucleossomos e a estrutura espiralada
dificulta o acesso de fatores de transcrição e RNA-
polimerase.
• A iniciação da transcrição depende da remoção dos
nucleossomos da região promotora do gene.
– Durante a síntese de DNA, quando os nucleossomos são
substituídos, poderia haver competição entre as histonas e os
fatores de transcrição (p.ex. TFIID) pelos sítos promotores.
– A ligação e dirupção dos nucleossomos por ativadores.
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Disrupção e Reorganização do Nucleossomo
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Regiões Controladoras de Lócus (Locus
Control Regions, LCRs)
• Regiões controladoras de lócus (LCRs) são seqüências de
DNA essenciais para o estabelecimento de uma
configuração “aberta” da cromatina.
• Elas são capazes de inibir a repressão normal da transcrição
sobre áreas relativamente grandes contendo vários genes.
Um dos mais bem estudados é o LCR que controla a
expressão tecido- específica da família de β-globin.
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Expressão gênica 30
Correlações entre a Metilação do Promotor
e Inatividade Gênica
• Em células sangüíneas vermelhas de humanos e galinhas, o
DNA envolvido na síntese de globina está completamente
(ou quase completamente) não-metilado.
• O gene de ovalbumina de galinha ñão está metilado nas
células do oviduto, mas metilado nos outros tecidos.
• Nos somitos de camundongo, a demetilação de um
“enhancer” de MyoD precede a transcrição de MyoD e é
essencial para a especificação dessas células como
precursoras de músculo.
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