Enzimologa

METABOLISMO
CELULAR

Los seres vivos necesitan biomolculas para su

nutricin: Glcidos, Lpidos y Protenas y minerales,
agua y vitaminas .

Una vez digeridos en el tubo digestivo, los nutrientes

son absorbidos hacia la sangre y/o linfa para llegar a
las clulas.

En las clulas son sometidos a muchas reacciones

qumicas denominadas METABOLISMO . Este tiene
dos etapas: EL Catabolismo ( degradacin) y el
Anabolismo ( Sntesis).

En el primero la energa total de las molculas

(ENTALPA) disminuye al producir reacciones de
tipo exergnico (eliminan energa), En el segundo
(anabolismo) la entalpa aumenta al recoger la
energa de las reacciones catablicas necesaria para
sintetizar molculas.

1.Muy especficas
ENZIMAS
2.Son catalizadore
3.Termolbiles.
Definicin
4.No dializables
Catalizadores biolgicos
5. Reciclables
Funcin:
Viabilizan

la actividad de las
clulas, separando o uniendo
molculas para formar nuevos
compuestos.
Naturaleza qumica: en su mayor
parte protenas, excepto un pequeo
grupo de molculas de RNA con

PROTENAS
Clasificacin de protenas
globulares
ESTRUCTURA DE
PROTEINAS

Primaria secundaria
cuaternaria

fibrosa
s
LAS

terciaria

ENZIMAS

PROTEINAS
GLOBULARES
ESTRUCTURA
TERCIARIA

ENZIMAS Y COFACTORES

Muchas de las enzimas actan solas ( parte proteica

pura) son llamadas APOENZIMAS Ej.
Hidrolasas.
Otras enzimas actan obligatoriamente junto a una
molcula llamada COFACTOR y son llamadas

HOLOENZIMAS.

Los cofactores pueden ser de dos clases:

A) Coenzimas
B) Iones metlicos.

COENZIMAS: Son molculas de bajo peso

molecular, derivadas de las vitamina B , son

termoestables (resisten el calor), y son dialiazables
(atraviesan filtros ).
Son de dos clases:a)Transportadoras de electrones
(NAD, FAD, NADP), y b) Las que transportan otros

CATLISIS POR IONES

METLICOS

Son generalmente cationes: Zn++,

Mg++, Mn++, Ca++, Na+, K+,
Cu++, Fe++ etc.
Las enzimas pueden ser :
1. Activadas por iones metlicos:
Si al finalizar la reaccin ambos se
separan.
2. Metaloenzimas: La activacin es
realizada por el in que va
incorporado dentro de la estructura

ESTRUCTURA ENZIMATICA
Holoenzima

Estructura
Enzimtica

Protena
RNA

Apoenzima o
Apoprotena

Cofactor
Coenzima

- Nucleotidos
Grupo Prosttico- Comp. Vit. B

Ribozimas
Anticuerpos

Abzimas

MECANISMO DE ACCION ENZIMTICA

Energa Libre o de Gibbs (Delta G):
Es la energa que se libera o entrega en una reaccin.
Es la diferencia entre la energa total de los reactivos al inicio
de la reaccin y la energa que tienen los Productos al finalizar
la reaccin.

Energa de Activacin: Energa necesaria para iniciar

una reaccin.

ENERGIA DE ACTIVACIN

SISTEMA ENZIMTICO: Componentes

Un sistema enzimtico consta de :
E + S

ENZ-S

P + Enz .

Adems puede tener: Cofactores,

Activadores e Inhibidores.
El Complejo ENZ-S se forma instantes previos antes de
dar el Producto.

COMPONENTES DE LA REACCION
ENZIMATICA

E+S

[ES] [EP] P + E

Sustrato se une al
SITIO ACTIVO
de la enzima

Glucosa

Sitio
cataltico

Fructosa

Enzima
(sacarasa
)

Productos son
liberados
1

Sustrato
(sacarosa)

Enzima disponible con

sitio cataltico vaco

3
Sustrato es
convertido a
productos

Sustrato se une
a la enzima por
encaje inducido

Como funciona una Holoenzima?

Modelo de Accin enzimtica

Energia de activacin sin enzima

Diferencia entre
la energia libre
de S y P

Energia de activacin con

enzima

S
P

Camino de la Reaccin

CINTICA ENZIMTICA
Estudia la velocidad de una reaccin que se determina

midiendo la aparicin de Productos o la desaparicin del S.

V. inicial (Vo): Cuando aun no ha funcionado el 10% del
total de la Enzima disponible.
V.mx: Es el efecto al saturarse la Enzima por el Sustrato.
Estudiada por Leonor Michaellis y Maud Menten.
Concepto de Km: Equivale a la concentracin de Sustrato
que produce la mitad de la V mx.
Cuando el valor de Km es grande, la enzima tiene poca
afinidad por su Sustrato, y a la inversa.
Unidad de Actividad Enzimtica: Cantidad de Enzima Que
causa la transformacin de 1.0 mol de S por Min.
Actividad especfica: N de unidades de Enzima por mg
de protena.
Katal: Cantidad de Enzima que transforma 1 mol de S por
Seg.

FACTORES QUE CONTROLAN LA

ACTIVIDAD DE LA ENZIMA
1) Efecto de Concentracin de Enzima.

MODELOS DE ACCION
ENZIMATICA

Modelo llave-cerradura

Los sustratos se unen perfectamente al sitio activo en la enzima. Son especficos

Modelo del encaje

(acoplamiento) inducido

CLASIFICACION DE
ENZIMAS

1. Oxidoreductasas e2. Transferasas grupo (no agua)

3. Hidrolasas (transferencia al agua)
4. Liasas Adicin de grupos a dobles enlaces o
formacin de dobles enlaces por eliminacin de
grupos
5. Isomerasas transferencia de grupos dentro de la
misma molcula para dar ismeros
6. Ligasas Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y CN por reacciones de condensacin acopladas a
hidrlisis de ATP

Clasificacin de las
enzimas
1. XIDO-REDUCTASAS
(REDOX. Por transferencia de electrones, usan con
frecuencia coenzimas como NADH, FADH2, Lipoato
etc.). Ej. Succinato deshidogenasa, Citocromo
oxidasa. Si una molcula se reduce, tiene que haber
otra que se oxida.

2. TRANSFERASAS
(Transferencia de grupos funcionales) , Ej.
Glucocinasa. grupos aldehidos gupos acilos
grupos glucosilos grupos fosfatos (kinasas)

3. Hidrolasas
la Lactasa.

4. LIASAS
Rompe a los dobles enlaces, por
eliminacion o adicion de grupos. Ej. Citrato
liasa, aldolasa. Entre C y C . Entre C y O.
Entre C y N.

5. ISOMERASAS
Reacciones de isomerizacin. Ej.
Epimerasas, fosfotriosa isomerasa.

6. LIGASAS
Formacin de enlaces C-C. C-S, C-S y CN ,
con aporte de ATP. Ej. Piruvato Carboxilasa.
Entre C y O Entre C y S ; Entre C y N ,
Entre C y C

Factores que afectan la

actividad enzimtica

Factores que afectan las

reacciones catalizadas por
enzimas
1. Temperatura
2. pH
3. Concentraciones
de:

A. Enzima
B. Sustrato
C. Producto
(retroalimentaci
n negativa)

4. Activadores

Cofactores
Modificaciones
covalentes

5. Inhibidores

Competitivos
No competitivos
Enzimas
alostricas

6. Localizacin

20

Sustrato (mmol)

(en un periodo de tiempo

40

Producto

60

Incremento en concentracin de S

80

S
+
E

P
8
7
6
5
4
3
2
1
0

Concentracin constante ES en estado de transicin

Concentracin

ES
Tiempo de Reaccin

EFECTO DE LA TEMPERATURA

Temperatura ptima para una

tpica enzima humana

Temperatura ptima para

enzima de termfila

Actividad

(Bacteria termotolerante)

20

40

Temperatura (C)

Temperatura ptima para dos enzimas

80

100

Efecto del pH
ENZIMA

Fosfatasa alcalina
Lipasa pancretica
Quimotripsina
Tripsina
Catalasa
Carboxipeptidasa
Amilasa salival
Fosfatasa cida
Pepsina

pH

9.5
8.0
8.0
7.9
7.6
7.5
6.8
5.0
1.5

INHIBICION
ENZIMATICA

Tipos

Tipo de inhibidores
COMPETITIVO

Tipo de inhibidores
NO COMPETITIVO

INHIBICION

jemplo de inhibicin
Angiotensingeno
Hipotensin,
hipovolemia

Renina
Angiotensina I

Enzima convertidora X
de Angiotensina, ECA

Captop
ril

Anlog
o del
Angiotensinaestado
II
de
transic
ion
Aumento de la presin arterial

Inhibidores Irreversibles

Los inhibidores irreversibles reaccionan con un

grupo qumico de la enzima, modificndola
covalentemente

A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de

los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de
actuacin
del inhibidor.

Los inhibidores irreversibles son, por lo general,

altamente txicos. Algunos tipos de inhibidores
irreversibles:

(DPF).

1. Reactivos de grupos SH : Yodoacetato.

2. Organofosfricos
: Diisopropilfluorofosfato
3. Ligandos de metales

In CN- que se fija al Fe+

Substratos suicidas
(Inhibidores activados
enzimticamente)

Se trata de molculas que se unen al centro activo de

manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores
competitivos.
- Una vez unidos al centro activo, la enzima
transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que
modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola.
- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor
competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores
irreversibles

Modo de accin de los inhibidores

suicidas
E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el

substrato
o un inhibidor competitivo convencional

2. La accin cataltica de la enzima convierte al

inhibidor I en una especie altamente reactiva
I*

3. I* modifica covalentemente a la enzima,

inactivndola
de forma definitiva al igual que un inhibidor

CONTROL Y REGULACION
ENZIMATICA

Regulacin de la Actividad de las

Enzimas
REGULACIN POR ENZIMAS ALOSTRICAS O
REGULADORES NO COVALENTES

E1
A B

E2
C

E3
D

E4
E15
E ......... ...........

REGULACIN POR RETROALIMENTACIN: (negativa o positiva)

El producto (Z) va inhibir a la primera enzima de la va (E1).
Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste finode la actividad enzimtica

Modificaciones covalentes
Fosforilacin (adicin de un grupo fosfato) puede activar o
inactivar una enzima
Muchos procesos en la clula se controlan mediante la
activacin y desactivacin de las enzimas
Elementos de NO fosoforilado (inactivo) fosforilado es activo
la reaccin

Control de la actividad enzimtica

por MODIFICACION

COVALENTE

Enzimas Alostricas: adoptan

dos conformaciones
interconvertibles
*R es la forma activa a la que se une el sustrato
*T es la forma inactiva
*R y T se encuentran en equilibrio R <==> T

Forma Activa

Forma Inactiva

Modulacion de enzimas
alostricas

Moduladores positivos o activadores: Ej. El

sustrato. Estas molculas se enlazan a una
regin de la enzima distinta al sitio activo.
Estabiliza la forma activa
Moduladores negativos: se llaman inhibidores
alostricos si actan en lugares distintos del
sitio activo de la enzima. Estabiliza la forma
inactiva

Proenzimas (cimogenos)

Sitio de
sntesis

Zimgeno

Enzima
activa

Estma
go

Pepsingeno

Pepsina

Pncrea
s

Quimotripsing
eno

Quimotripsin
a

Pncrea
s

Tripsingeno

Tripsina

Pncrea

Procarboxipept

Carboxipepti

ENZIMAS ESPECIALES

TELOMERASA
Esta enzima
repara los
telmeros de
los
cromosomas
mediante la
adicin de
secuencias
TTAGGG

Ciclo celular normal y el de

las clulas tumorales

Ribozimas

Abzimas

enzimas catalticas artificiales capaz

de ser dirigidas hacia determinado
lugar.
Ej. abzymas contra el cncer

Granzima B

Granzima B
Granzima B y perforina,
son protenas liberadas
por clulas efectoras
(LT citotoxicos), pueden
inducir apoptosis en
clulas blanco formando
poros transmembrana y
el clivaje de efectores
de caspasas, tal como
caspasa-3, aunque la
apoptosis puede
lograrse independiente
de granzima B.

ISOENZIMAS
NADH+H

NAD

Piruvato

Lactato
LDH

LDH-1 tiene 4 monmeros HHHH y est en Corazn.

LDH-5 tiene 4 monmeros MMMM y es del Hgado.

La isozimas de la lactato deshidrogenasa del suero

se demuestran por electroforesis en gel de almidn o
pH 8.6. Ellas emigran a 5 regiones diferentes.

La LDH tiene 5 isozimas (LDH-1, LDH-2, LDH-3,

LDH-4 y LDH-5), la ms positiva electricamente es
la LDH-1 y corresponde a la de 4 monmeros (H=
heart).
La LDH 5 es la que tiene 4 monmeros M =Muscle

Las isozimas LDH SON:

LDH 1 HHHH
LDH - 2 HHHM
LDH 3 HHMM
LDH 4 HMMM
LDH 5 MMMM
hgado.

Localizada en miocardio.

Localizada fundamentalmente en

Isoenzima lactato
deshidrogenasa
( LDH )

I1
I2
I3
I4
I5

Sub unidades

HHHH
HHHM
HHHM
HHMM
MMMM

APLICACIONES DE LAS
ENZIMAS EN LA MEDICINA

Generalidades

Por su alta especificidad y eficacia

cataltica son muy apreciadas para
su aplicacin como agentes
teraputicos. As mismo tienen
valor diagnstico y/o pronstico,
y como reactivos de laboratorio
Pare ello requieren:
un alto grado de pureza, alta
estabilidad a las condiciones de
temperatura y pH fisiolgicos
Baja antigenicidad y accesibilidad

APLICACIONES TERAPEUTICAS
CONVENCIONALES

ENZIMA
ORIGEN
FUNCION
Pancreatina
pncreas bovino
ayuda-digestivo
Pepsina
mucosa estomacal porcina
ayuda-digestivo
Amilasa
Aspergillus sp
ayuda-digestivo
Papaina
Carica papaya
ayuda-digestivo
Celulasa
Aspergillus sp
ayuda-digestivo
Lipasa
pncreas porcino
ayuda-digestivo
Bromelina
Ananas comosus (pia)
antiinflamatorio
Peptidasa
Serratia sp.
antiinflamatorio
Dextranasa
Penicillium funicolosum
tratamiento de
caries
Estreptoquinasa Streptococcus sp.
agente
tromboltico
Uroquinasa
orina
agente tromboltico
Colagenasa
Clostridium hystolyticum
tratamiento
de
quemaduras cutneas
Lisozima
clara de huevo
oftalmologa:
potenciador de
antibiticos

Actuales

Tratamiento de deficiencias metablicas

congnitas: catalasa, para el tratamiento de
acatalasemia; fenilalanina hidroxilasa y fenilalanina
amoniaco liasa (Fenilcetonuria), Galactosa, 1- P
uridil transferasa (Galactosemia)
Eliminacin de metabolitos txicos por
malfuncionamiento de rganos: ureasa y uricasa
en caso de mal funcionamiento renal (para eliminar
urea y cido rico); UDP glucoronil transferasa y
bilirrubina oxidasa (eliminacin de bilirrubina) en
casos de ictericia; anhidrasa carbnica y catalasa
en intercambio gaseoso de O2 y CO2 en
respiradores artificiales
Eliminacin selectiva de nutrientes especficos
de clulas malignas: asparaginasa y glutaminasa
en la eliminacin de L-asparagina y L-glutamina en
el tratamiento de leucemia; carboxipeptidasa;

ALGUNAS
ENZIMAS
CON
VALOR
NOMBRE
ALTERADO EN
Lactato deshidrogenasa (LDH)
Isquemia miocrdica,
DIAGNOSTICO
COMPROBADO
anemia perniciosa
Glutamato deshidrogenasa (GLDH) Ictericia obstructiva,
Tumores hepticos
-Glutamiltransferasa ( GT)
Cirrosis alcohlica, tumores
hepticos
Aspartato aminotransferasa (AST)
Enfermedades hepticas,
isquemia miocardica
Glutamato oxalacetato transaminasa (GOT)
Alanina aminotransferasa (ALT)
Enfermedades hepticas,
isquemia miocardica
Glutamato piruvato transaminasa (GPT)
Creatin quinasa (CPK)
Isquemia miocrdica, lesiones
del Msculo
esqueltico
Lipasa pancretica
Pancreatitis aguda
Colinesterasa (CHE)
Hgado graso, intoxicacin
alcohlica aguda
Fosfatasa alcalina (AP)
Ictericia obstructiva, tumores
Fosfatasa cida (ACP)
Carcinoma de prstata
-Amilasa
Pancreatitis aguda

INFARTO AL
MIOCARDIO

HEPATITISS

LDH

AST (GOT)

AST(GOT)
CK

ALT(GPT)
GT