Tema 7 Enzimas

DEFINICIN

LAS ENZIMAS son protenas que se comportan como

catalizadores muy potentes y eficaces de las reacciones
qumicas de los sistemas biolgicos.

La CATLISIS ENZIMTICA es esencial para los sistemas vivos.

La mayora de las R.Q. ocurriran muy lento en condiciones biolgicamente

significativas.

Hace posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar reacciones que sin
catalizador requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o pH.

Las biomolculas son muy estables a pH neutro, temperatura suave y ambiente

acuoso

Caractersticas

Como catalizadores, los enzimas actan en pequea

cantidad y se recuperan indefinidamente.

No llevan a cabo reacciones que sean energticamente

desfavorables, sino que solamente aceleran las que
espontneamente podran producirse.

Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima

cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre
un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.

Estructura

La actividad cataltica
depende de la integridad
de
su
conformacin
proteica nativa

Si se desnaturaliza o
disocia en subunidades
pierde su actividad.

Estructuras 1, 2, 3 y 4
son esenciales

Estructura
apoenzima + grupo prosttico

= holoenzima

Estructura

Localizacin
Histoenzimologa

por

Diagnsticos enfermedades

Catalizadores
en
sntesis
industrial

reacciones metablicas
y su regulacin
Estructuras
y
mecanismos de accin

Extractos se usa para

Estudios de :

Se pueden extraer sin

perder
actividad
biol{ogica

Distribucin intracelular
de las enzimas

Clasificacin
1. Oxido-reductasas
( Reacciones de oxidoreduccin).

2. Transferasas
(Transferencia de grupos
funcionales)

Si una molcula se reduce, tiene que haber otra

que se oxide

grupos aldehdos
grupos acilos
grupos glucsidos
grupos fosfatos (kinasas)

Clasificacin

3. Hidrolasas
(Reacciones de
hidrlisis)

4. Liasas
(Adicin a los dobles
enlaces)

Transforman polmetros en monmeros.

Actan sobre:
enlace ster
enlace glucosdico
enlace peptdico
enlace C-N

Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N

Clasificacin
5. Isomerasas
(Reacciones de isomerizacisn)

6. Ligasas
(Formacin de enlaces, con
aporte de ATP)

Entre C y O
Entre C y S
Entre C y N
Entre C y C

Velocidades de las reacciones qumicas efecto

de los catalizadores

Velocidades de reaccin y orden de reaccin

Reacciones de 1 Orden
Para la reaccin irreversible:

Integrando

[A]/[A] 0 = e -(k-1t)

k1 [s-1]

donde [A]0 = concentracin inicial de A cuando t = 0.

Graficando

Los procesos bioqumicos son reversibles

[A]

k1
k--1

[B]

Donde k1 y k-1 son ctts de v de 1 directa e inversa

En equilibrio

Velocidades de las reacciones qumicas efecto

de los catalizadores

Reacciones de 2 Orden

2A

k2

Donde k2 es ctt de v de 2 orden [(mol/L)-1 s-1]

Los esquemas de reacciones complejas se simplifican con un paso limitante
de la velocidad

Estados de transicin y Barreras de reaccin

Qu determina la velocidad de una reaccin?

Barrera energtica
Estado de transicin

Estados de transicin y Barreras de reaccin

Qu hace un catalizador?

Cmo funcionan

a)

Los enzimas disminuyen la energa de activacin

de las reacciones
Reaccin

Energa de activacin
(Kcal*mol-1)

el perxido de hidrgeno se descompone en:

H2 O + O2
H2 O2

18

b) el hierro cataltico (Fe) realiza la reaccin

13

H2O2

H2 O + O2

c) el platino cataltico (Pt) realiza la reaccin :

H2O2

H2 O + O2

d) la catalasa una enzima heptica la realiza

H2O2

12

H2O + O2

Qu hace un catalizador?

Cmo reduce el
catalizador la barrera
energtica?

Reduccin de entropa
Desolvatacin
Se compensa tensin o
distorsin del sustrato
Consigue alineamiento
entre grupos funcionales
cataliticos del E y el S

Cmo actan las enzimas como catalizadores?

Sitio Activo

1.- El enzima y su sustrato

2.- Unin al centro activo

3.- Formacin de productos

Cmo actan las enzimas como

catalizadores?

Hiptesis de la Cerradura y la llave (E. Fischer, 1894)

Cmo actan las enzimas como catalizadores?

Hiptesis del Ajuste Inducido (Daniel Koshland,

1958)

1.
2.
3.
4.
5.

E Induce al S a configuracin aproximada al Edo.

Transicin
UNE S
REDUCE Ea
IMPULSA Catalisis
LIBERA P
SE REGENERA

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Cintica de Michaelis-Menten

1 etapa se forma el complejo enzima-sustrato.

2 etapa, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin

del producto, liberando el enzima libre:
V1 = k1 [E] [S]
V-1 = k-1 [ES]
k1
K -1

k2
Paso lento

V2 = k2 [ES]

Cintica de la Catlisis Enzimtica

V2 = k2 [ES]

Podra Expresarse V como funcin de [E]t y [S]

Asumiendo que E y S estan en equilibrio cuando k2<< k-1
Ks ctte de disociacin

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Pero E, S y ES no estn en equilibrio pues ES se conviente en P Continuamente
Modelo de Briggs Haldane: Estado Estacionario

Entonces

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Ecuacin de Michaelis - Menten

KM es caracterstica de
cada reaccin
Tiene unidades de
concentracin
Cuando KM >> [S] se
alcanza Vmax

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Para reacciones de pasos mltiples:

K2 es un caso particular la Kcat

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Significado de KM, Kcat, Kcat/KM

KM

Cuando k2 << k-1 Entonces KM k-1/k1 = K

Afinidad de la enzima por el sustrato

KM = [S] cuando V = Vmax

Es una medida de la [S] necesaria para catlisis eficaz

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Significado de KM, Kcat, Kcat/KM

Kcat [segundos-1]

Medida directa de la produccin cataltica en

condiciones {optimas (enzima saturada)

Tiempo necesario para cambiar S en P

Nmero de recambio (N molc de S recamb por seg)

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Significado de KM, Kcat, Kcat/KM

Kcat/ KM

Cuando [S] << KM Entonces [E]t << [E]

Medida directa de eficiencia y especifidad de la

enzima

Permite comparar eficiencia de una enzima con

diferentes sustratos

Valor mximo entre 108 y 109 (mol/L)-1 s-1

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Representacin doble inversa o de Lineweaver-Burk

Cintica de la Catlisis Enzimtica

Representacin de Eadie- Hofstee

Factores que afectan la velocidad de reaccin

Efecto de la variacin de la concentracin del

sustrato

En condiciones de
concentracin de E,
pH y temperatura
constante se observa
que

Factores que afectan la velocidad de reaccin

Efecto de la variacin de la concentracin de la

enzima

En
condiciones
de
concentracin de S hasta
la saturacin, pH y
temperatura constante se
observa que

Factores que afectan la velocidad de reaccin

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica, Q10.

Factores que afectan la velocidad de reaccin

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables
(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos

Cintica Enzimtica

Reacciones en que intervienen dos o ms

sustratos

Unin aleatria de los sustratos

La fosforilacin de la glucosa con ATP, catalizada con hexokinase,

con tendencia a unirse a la glucosa en primer lugar.

Cintica Enzimtica

Reacciones en que intervienen dos o ms

sustratos

Unin ordenada de los sustratos

Se observa en oxidaciones de sustratos con la coenzima

nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+).

Cintica Enzimtica

Reacciones en que intervienen dos o ms

sustratos

Mecanismo ping-pong

La ruptura de una cadena polipetdica con una serina

proteasa, tal como la trypsina o chymotrypsina.

Cintica Enzimtica

Anlisis cintico en el estado estacionario de las reacciones

bisustrato

Cintica Enzimtica

Mecanismos de Inhibicin

Cintica Enzimtica

Mecanismos de Inhibicin

Inhibidor competitivo

Inhibidor no competitivo

Cintica Enzimtica

Mecanismos de Inhibicin Reversibles

Inhibicin competitiva

Cintica Enzimtica

Mecanismos de Inhibicin Reversibles

Inhibicin no competitiva

Cintica Enzimtica

Mecanismos de Inhibicin Reversibles

Inhibicin incompetitiva

Cintica Enzimtica

Mecanismos
de
Inhibicin Irreversibles

Anlogos del estado de

transicin
Marcadores de afinidad
Inhibidores suicidas

Activador alostrico: favorece

la unin del sustrato

Inhibidor alostrico: impide la

unin del sustrato

Elementos de la
reaccin

El enzima no fosforilado es
inactivo

El enzima fosforilado es
activo