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Instituto de Ciencias Forenses y Periciales del

Estado de Puebla.

Toxicologa
Espectrofotometra
Dr. Carolina Garca Solrzano

Alumnas:
Guadalupe Alarcn Flores
Cindy Alor
Jimnez
Arely Guadalupe Hernndez
Aguilar.

ESPECTROFOTOMETRA
mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
biolgicas.

Medida de la cantidad de energa radiante absorbida por


las molculas d una muestra en funcin de las longitudes
de onda especificas

un

instrumento denominado espectrofotmetro;


permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.

espectrofotmetro

un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o

transmitida por una solucin que


desconocida de soluto, y una que
conocida de la misma sustancia.

contiene
contiene

una
una

cantidad
cantidad

Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no visible.


Tipos de lmparas:

Lmparas de
filamento de
tungsteno: se
utilizan para
longitudes de
onda del
espectro
visible y el
ultravioleta
prximo. Son
fuentes de un
espectro
continuo de
energa
radiante entre
360 -950 nm.

Lmparas de
filamento de
haluros de
tungsteno: son
de mayor
duracin y
emiten energa
radiante de
mayor
intensidad.

Lmparas de
hidrgeno y
deuterio:
producen un
espectro
continuo en la
regin
ultravioleta
entre 220360nm

Lmparas de
vapores de
mercurio:
emiten un
espectro
discontinuo o
espectro de
lneas que se
utilizan para
calibracin

Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y


evitar que la luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.

Monocromadores: pueden ser:


Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el
paso de la luz. Ej. de vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para
trabajar en el ultravioleta lejano.
Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a
distancias iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie
metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un pequeo prisma.

Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin. Puede


ser de distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares, redondas). Se
obtienen mejores resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se utilizan
cubetas redondas se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la
misma posicin. Suelen estar fabricadas en vidrio o en plstico.

Detector: puede ser de dos tipos:

Fotoclulas o clulas fotovoltaicas: es una lmina de cobre sobre la


que se extiende una capa de Selenio o de xido de Cobre. A esto se le
conoce como semiconductor. Sobre el semiconductor hay una
capa de
metal transparente que sirve de electrodo. La luz incide sobre el
selenio
ste desprende electrones, que pasan a la placa
cobre y
positiva sobre el Selenio. El conjunto se conecta a un ampermetro que
seala el paso de corriente.

Fototubos multiplicadores: es un tubo que contiene un ctodo que emite


electrones de forma proporcional a la energa que incide sobre l.
Tiene un nodo que recoge los electrones y la corriente se multiplica
varias veces al chocar los electrones sobre sucesivos nodos que van
teniendo un voltaje superior al precedente. La seal se amplifica en
cientos o miles de veces.

Medidor: son
sistemas de lectura de la energa elctrica que recoge el
detector y que puede ser lectura directa o puede ser amplificadores de seal
como en el caso del fototubo multiplicador. Los actuales aparatos incorporan
lectura digital y clculos automticos de concentraciones con relacin a las
curvas de calibracin.

Espectrofotometr
a por absorcin
atmica.

Principio
Se
basa
en
la
absorcin de radiacin
de la longitud de onda
apropiada por tomos
no excitados presentes
en la flama.

Tcnica capaz de detectar y determinar

cuantitativamente la mayora de los elementos del


sistema peridico.

Es un equipo que analiza la presencia de elementos

cationes metlicos en una muestra solucin

La muestra es
irradiada por la luz
de lmparas de ctodo
hueco especficas
para el metal que se
desea investigar.

Esta tcnica permite


determinar diversos
elementos en un
amplio rango de
concentraciones.

la luz absorbida es
detectada y
convertida en
expresin
cuantitativa de la
presencia del metal

Para la combustin de
la muestra se
requiere de gases
como el acetileno y
el xido nitroso.

Aplicaciones.
Estudio morfolgico de tejidos vegetales, animales y humanos,

incluyendo pelos, semen, hojas, etc.


Anlisis de metales y minerales en un compuesto.
Determinacin de calcio, potasio, magnesio, cobre y zinc en

suero sanguneo.
Investigacin de mercurio en alimentos.

Determinacin de venenos metlicos.

Anlisis de monxido de carbono en cadveres recuperados de una

zona de incendio.
Anlisis cualitativo y cuantitativo de muestras de drogas.
Dosaje de drogas en sangre, orina y muestras biolgicas

ESPECTROSCOPIA POR EMISIN


PTICA

PRINCIPIO
PRINCIPIO
Una
Una
descarga
descarga
elctrica
elctrica
es
es
generada
generada entre
entre
un
un electrodo
electrodo yy la
la
muestra,
muestra,
vaporizando
vaporizando el
el
material
material de
de la
la
superficie.
superficie.

los
los
espectros
espectros
permiten
permiten
determinaciones
determinaciones
de
de
elementos
elementos
metalicos
metalicos
en
en
distintos
distintos tipos
tipos de
de
muestras,
muestras, como
como
metales
metales
yy
aleaciones,
aleaciones,
suelos,
suelos,
minerales
minerales
yy
rocas.
rocas.

Hay
Hay dos
dos tipos
tipos de
de
fuente
fuente
de
de
excitacin,
excitacin, una
una
de
de
arco
arco
(cualitativa)
(cualitativa)
yy
una
una de
de chispa
chispa
(cuantitativa).
(cuantitativa).

la
la excitacin
excitacin de
de
la
la muestra
muestra se
se
produce
produce en
en el
el
pequeo
pequeo espacio
espacio
entre
entre un
un par
par de
de
electrodos,
electrodos,
el
el
paso
paso
de
de
la
la
electricidad
electricidad por
por
este
este proporciona
proporciona
la
la energa
energa para
para
producir
producir
el
el
estado
estado
inico
inico
electrnico
electrnico
excitado.
excitado.

Fuente de
excitacin de
Arco

Consiste en una
una
descarga
elctrica de 1 a
35
amperios
entre un par de
de
electrodos,
la
fuente
suministradora
de
corriente
continua de 1050
V
es
simplemente un
rectificador y un
filtro,
los
electrodos
suelen ser de
grafito.

la temperatura
alcanzada con el
arco es alta, por
lo
cual
se
pueden excitar
un gran nmero
de
elementos,
adems,
de
contar con poca
reproducibilidad,
es decir,
decir, sus
resultados
resultados son
cualitativos.

la
la excitacin
excitacin de
de la
la muestra
muestra con
con esta
esta fuente
fuente se
se produce
produce por
por

Fuente de
excitacin de
Chispa

por
por
medio
medio
de
de
esta
esta
fuente,
fuente,
los
los de
analisis
analisis
pueden
pueden
ser
bombardeo
bombardeo
de
de electrones,
electrones,
en
en
lugar
lugar
de
ser
ser trmica,
trmica,
como
comoser
en
en
no
es una
fuente
muy
sensible,
pero
sielel
caso
caso de
de
Arco;
los
los electrodos
electrodos se
se mantienen
mantienen relativamente
relativamente fros
fros yy
rpidos
rpidos
yyArco;
precisos.
precisos.

estable
y muestra
reproducible,
lo pequea.
que la hace
la
la cantidad
cantidad de
de
muestra
vaporizada
vaporizada es
es muy
muy
pequea.
adecuada para anlisis cuantitativos.

Espectrofotomet
ra UV-visible-IR

Principio.
Se basa en la absorcin o transmisin de radiacin
de la longitud de onda apropiada por las molculas
del material

Utiliza

la radiacin del espectro electromagntico


cuya longitud de onda est comprendida entre los 100
y los 800 nm.

La luz UV-visible es slo una pequea parte del

espectro electromagntico.

Fundamentos.
Para

que la radiacin electromagntica incidente,


interaccione con la materia tiene que tener una
del mismo tamao o menor

La espectrofotometra UV-Vis se basa en el anlisis

de la cantidad de radiacin electromagntica que


puede absorber o transmitir una muestra en funcin
de la cantidad de sustancia presente.

Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el


ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.

En esta regin del espectro electromagntico, las molculas


se someten a transiciones electrnicas.

la absorbancia de una solucin


es directamente proporcional a
la concentracin de la
solucin

puede usarse para determinar


la concentracin de una
solucin

Las muestras suelen ser colocadas en una


clula transparente

Se pueden usar tubos de ensayo como cubetas

El cristal y la mayora de los plsticos


absorben en el UV, lo que limita su
utilidad para longitudes de onda visibles.

Aplicaciones

Deteccin y
confirmacin de drogas
de abuso en orina,
saliva , cabello y
sangre.

Anlisis de muestras
clnicas relacionadas
con un control de
exposicin laboral
(exposicin a metales
pesados, disolventes,
etc).

Anlisis de alcohol
en sangre y orina.

Anlisis de muestras
clnicas para determinar
numerosos parmetros
como cidos orgnicos,
metales,
carboxihemoglobinas,
serotoninas,
catecolaminas y sus
metabolitos, etc.

Bioanlisis para la
industria farmacutica
(bioequivalencias,
estudios de deplecin de
frmacos, etc).

Monitorizacin de
frmacos
(antidepresivos
tricclicos,
benzodiacepinas, etc).

Espectrofotometra
infrarroja

La regin IR del espectro electromagntico se

encuentra entre 12800-10 cm-1.

infrarrojo cercano (NIR), infrarrojo medio

(MIR) e infrarrojo lejano (FIR).

La gran mayora de las aplicaciones analticas


clsicas de la espectroscopia infrarroja se
basan en el empleo del infrarrojo medio (4000600 cm-1) y el infrarrojo cercano.

Una de las grandes


ventajas de la
espectroscopia IR es
su versatilidad.

Es utilizado para el
anlisis de
compuestos
orgnicos,
inorgnicos u
organometlicos.

Requiere una mnima


o nula preparacin
de la muestra y
ofrece un anlisis
cuantitativo sin
consumir o destruir
la muestra.

Fundamentos
El espectro
La interaccin
Esta
vibracional de
de la
alteracin
una molcula
radiacin
guarda
se considera el espectro IR
infrarroja con relacin con
una propiedad se puede usar
la materia
cambios en el fsica nica y como huella
provoca en
estado
por tanto
dactilar
sta alguna
vibracional de caracterstica
alteracin.
las molculas.
de sta
molcula.

Aplicaciones
Deteccin y
confirmacin de
drogas de abuso en
orina, saliva ,
cabello y sangre.

Anlisis de alcohol
en sangre y orina.

Bioanlisis para la
industria farmacutica
(bioequivalencias,
estudios de deplecin de
frmacos, etc).

Anlisis de muestras
clnicas relacionadas
con un control de
exposicin laboral
(exposicin a metales
pesados, disolventes,
etc).

Anlisis de muestras
clnicas para determinar
numerosos parmetros
como cidos orgnicos,
metales,
carboxihemoglobinas,
serotoninas,
catecolaminas y sus
metabolitos, etc.

Monitorizacin de
frmacos
(antidepresivos
tricclicos,
benzodiacepinas,
etc).

Espectrofotometr
a de emisin por
plasma

Principio.
El plasma es formado por una mezcla gaseosa de
tomos y iones de argn.

Cuando
se
inyecta
la
mezcla,
se
produce
atomizacin, y la muestra es sometida a una
temperatura de aproximadamente 10000 k

Fundamentos

Es posible determinar de forma cuantitativa la mayora de los

elementos de la tabla peridica

Se parte de muestras en disolucin acuosa.


La muestra, es transportada por medio de una bomba peristltica

hasta el sistema nebulizador donde es transformada en aerosol


gracias a la accin de gas argn.

Dicho aerosol es conducido a la zona de ionizacin que consiste en


un plasma generado al someter un flujo de gas argn a la accin de
un campo magntico oscilante inducido por una corriente de alta
frecuencia.

En el interior del plasma se pueden llegar a alcanzar temperaturas


de hasta 10000 K.

En estas condiciones, los tomos presentes en la muestra

son ionizados/excitados.

Al volver a su estado fundamental, estos iones o tomos


excitados emiten radiaciones de una longitud de onda que
es caracterstica de cada elemento.

Esta radiacin pasa a travs de un sistema ptico que


separa la radiacin segn su longitud onda.

A continuacin un detector mide la intensidad de cada una

de las radiaciones relacionando sta con la concentracin


de cada elemento en la muestra.

ESPECTROFOTOMETRA DE
RAYOS X
PRINCIPIO
PRINCIPIO
Los
Los rayos
rayos X
X son
son
generados
generados
por
por
la
la
propia
propia muestra;
muestra; el
el
anlisis
anlisis se
se realiza
realiza
midiendo
midiendo la
la longitud
longitud
de
de onda
onda ee intensidad
intensidad
de
de
los
los
rayos
rayos
producidos.
producidos.

Tpicamente
Tpicamente
el
el
mtodo
mtodo para
para generar
generar
los
los rayos
rayos X
X en
en la
la
muestra
muestra es
es por
por usar
usar
otros
otros rayos
rayos X
X para
para
excita
excita aa la
la muestra.
muestra.

La
La energa
energa disponible
disponible
en
en este
este proceso
proceso de
de
excitacin
excitacin se
se emite
emite
como
como
radiacin
radiacin
(fluorescencia)
(fluorescencia)
oo
quitar
quitar
otros
otros
electrones
electrones
menos
menos
enlazados
enlazados del
del tomo
tomo
(efecto
(efecto Auger).
Auger).

La
La
absorcin
absorcin
oo
frecuencias
frecuencias
de
de
emisin
emisin
(energas)
(energas)
son
son caractersticas
caractersticas en
en
cada
cada
atomo
atomo
oo
muestra.
muestra.
Adems,
Adems,
para
para
un
un
tomo
tomo
especfico
especfico
se
se
producen
producen
pequeas
pequeas
variaciones
variaciones
de
de
frecuencia
frecuencia (energa)
(energa)
que
que
son
son
caractersticas
caractersticas
del
del
enlace
enlace qumico.
qumico.

Los rayos X intensos y


de longitud de onda
sintonizable
son
tpicamente
generados
con
sincrotrones

En un material, los
rayos X pueden sufrir
una
prdida
de
energa
en
comparacin con el
haz de luz que entra.

Dependiendo de la
energa o longitud de
onda
emitida
se
podrn
realizar
estudios cuantitativos
o
cualitativos
y
aportan informacin
acerca
de
la
estructura
y
composicin de la
materia

es muy util cuando se


posee poca muestra,
tambin se usa para
detectar metales en
tejidos humanos o
piedras en vesicula.

Aplicaciones en
toxicologa.
Determinacin de elementos txicos en
orina, sangre, heces, leche materna,
tejidos.

Determinacin de metales y contaminantes


en aguas potables.

Resumen

Ventajas y
desventajas

ANLISIS QUMICO INSTRUMENTAL


TCNICA
ESPECTROSCOPIA POR
EMISIN PTICA.
(Chispa/arco)

PRINCIPIO

VENTAJA

Una descarga elctrica es Rapidez de anlisis


generada
entre
un Rapidez
en
electrodo y la muestra,
preparacin
de
vaporizando el material de
muestra.
Bajo
la superficie.
costo
combustibles.
Puede ser un ensayo
destructivo.

DESVENTAJA
Slo muestras slidas.
la Es difcil el anlisis de
la
muestras
pequeas,
heterogneas o de forma
de
complicada.
no

ESPECTROFOTOMETRA UVVISIBLE-IR

Puede
Se basa en la absorcin o S un mtodo sencillo
analizarse
transmisin de radiacin de Es econmico
cualquier
material
la
longitud
de
onda Existen
muchos
inorgnico.
No es muy sensible
apropiada por las molculas
espectros
Se
del material
documentados
requiere
gran
Confiable
en
las
cantidad de muestra.
concentraciones

ESPECTROFOTOMETRA
POR ABSORCIN ATMICA.

Se basa en la absorcin de Es un mtodo de una Suele ser difcil analizar


radiacin de la longitud de
exactitud alta.
ciertos elemento.
onda apropiada por tomos Es menos costos que La preparacin de la
no excitados presentes en
otros
mtodos
de
muestra es lenta.
la flama.
anlisis.

ESPECTROFOTOMETRA DE
EMISIN POR PLASMA

El plasma es formado por una La atomizacin ocurre en un Levado consumo de gas


Espectro complejo.
mezcla gaseosa de tomos y
medio inerte
iones de argn. Cuando se
inyecta la mezcla, se produce
atomizacin, y la muestra es
sometida a una temperatura de
aproximadamente 10000 k

ESPECTROFOTOMETRA DE
RAYOS X

Costo del equipo


Los rayos X son generados por Rapidez de anlisis
la propia muestra; el anlisis se No es necesario disolver la Implementacin de seguridad
realiza midiendo la longitud de
muestra.
radiolgica.
onda e intensidad de los rayos No importa la forma en que La preparacin de la muestra
producidos.
se encuentre el elemento.
es laboriosa.
Tpicamente el mtodo para
generar los rayos X en la
muestra es por usar otros rayos
X para excita a la muestra.

COMBUSTIN

La un contenida en un crisol de
cermica es fundida en una
atmsfera de oxgeno en un
horno de alta frecuencia. Los
gases de reaccin CO2 y SO2
producidos por la combustin
son medidos por detectores
altamente sensitivos en IR. La
seal es convertida en
concentracin y ajustada a por
ciento en peso.

Simple
Bajo costo
Confiablidad a
concentraciones extremas
(muy altas y muy bajas)
Rpido
Puede analizarse cualquier
material inorgnico, sin
importar la base.

Es muy sensible a las


condiciones de la muestra.
Slo es confiable a
concentraciones extremas.

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