Adn

Estructura y replicacin
del material gentico
Dr. Antonio Barbadilla
Tema 6: Estructura y replicacin del

material gentico
Objetivos tema 6:
Estructura y replicacin del material
gentico
Debern
Debern quedar
quedar bien
bien claros
claros los
los siguientes
siguientes puntos:
puntos:
Cmo
se descubri
descubri la
la naturaleza
naturaleza qumica
qumica del
del
Cmo se
material
material hereditario
hereditario
La
composicin qumica
qumica de
de los
los cidos
cidos nucleicos
nucleicos
La composicin
La
estructura 3D
3D del
del DNA:
DNA: naturaleza
naturaleza
La estructura
complementaria
complementaria yy antiparalela
antiparalela de
de la
la doble
doble cadena
cadena
del
del cido
cido desoxirribonucleico
desoxirribonucleico (DNA)
(DNA)
La
extraordinaria capacidad
capacidad explicativa
explicativa del
del
La extraordinaria
modelo
modelo del
del DNA
DNA de
de la
la funcin
funcin biolgica
biolgica
fundamental
fundamental de
de esta
esta molcula
molcula
La
La replicacin
replicacin semiconservativa
semiconservativa
Enzimologa
de la
la replicacin
replicacin
Enzimologa de

material gentico
La transformacin bacteriana en
Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)
Rugosa
Muerte por neumona
Cepa resistente
Lisa
No muere
3
Tema 6: Estructura
Muere y replicacin del
material gentico
Cul es el Principio transformante?
Principio
Rugosa
Lisa

material gentico
Colin MacLeod
El elemento transformante
es el DNA (1944)
Maclyn McCarty
Oswald
Avery
Ver animacin
experimento
tranformacin
bacteriana

Slo DNA produce transformacin
material gentico
Experimento de Alfred Hershey y Martha

Chase con fagos (1952)
Bacterifago T4
El DNA es el
material
infeccioso

material gentico
Componentes de los cidos nucleicos

adenina
timina
guanina
citosina

material gentico
Reglas de Chargaff
1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

A+G=C+T
2.
A=T
3.
G=C

material gentico
1953. Ao culminante:
J. Watson y F. Crick resuelven la
estructura tridimensional del DNA
(Nature 171: 737-738)
Watson y yo hemos
encontrado el
secreto de la vida

material gentico
1953. Ao culminante:
Dos lneas de evidencia:

Reglas de Chargaff
Fotografas de difraccin de rayos X
10

material gentico
10
Significado reglas de Chargaff
11
Complementariedad de
las
basesy replicacin del
Tema
6: Estructura
material gentico
11
Difraccin de rayos X
Hemoglobina
Linus Pauling
12

material gentico
12
Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA
Rosalind E.
Franklin
13
Crick del
Tema 6: Estructura y replicacin
material gentico
13
Modelo en metal
del DNA
J. Watson y F. Crick
Concluyen: La estructura del DNA es una
doble hlice, formada por cadenas orientadas

en direcciones opuestas (antiparalelas). La
estructura se mantiene gracias a enlaces de
hidrgeno entre las bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia
el interior de 14las
material gentico
14 cadenas
15
La estructura se mantiene gracias

a enlaces de hidrgeno entre las
bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el
interior
de las cadenas
Tema 6: Estructura
y replicacin
del
15
Doble hlice, formada

por cadenas orientadas
en direcciones opuestas
(antiparalelas).
material gentico
Desnaturalizacin del DNA

Separacin de las dos hebras por calor
Una mayor proporcin G-C tiene una mayor
temperatura de desnaturalizacin (fusin)
Porcentaje G + C
100
80
60
40
20
70
80
90
100 110
Temperatura de fusin (desnaturalizacin)

16
material gentico
16
17
Hlices levgiras y dextrgiras

material gentico
17
18
DNA-B dextrgira
material gentico
18
Ver
Ver artculo
artculo
Nature
Nature
1953
1953
19

material gentico
19
20

material gentico
20
La estructura del DNA suministra una

explicacin
asombrosamente
simple del fenmeno de la herencia
La estructura explica:
La naturaleza de la secuencia lineal de los genes
(informacin digital cuaternaria en secuencias
unidimensionales de monmeros A,T,G,C)
El mecanismo de replicacin exacta de los
genes
La naturaleza qumica de las mutaciones
Por qu la mutacin, la recombinacin y la
expresin gnica son fenmenos separables a
nivel molecular
21
21
material gentico
Esencial a la relacin
ntima entre estructura
molecular y funcin
gentica del DNA es el
concepto de molde
La complementariedad de las
bases nitrogenadas permite que
la secuencia de una cadena
sencilla de DNA acte como un
molde para la formacin de una
copia complementaria de DNA
(replicacin) o de mRNA
(transcripcin)
22

material gentico
22
Y ahora las declaraciones de Watson y

Crick sobre el ADN. Esto es para m la
prueba verdadera de la existencia de Dios
Salvador Dal
Antes pensbamos que nuestro futuro

estaba en las estrellas. Ahora sabemos que
est en nuestros genes.
James Watson
23

material gentico
23
Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
24

material gentico
24
J. Watson
Una estructura
tan bonita tena,
por fuerza, que
existir
25

material gentico
J. Watson
25
El DNA
contiene informacin
digital cuaternaria en
secuencias unidimensionales
de monmeros A,T,G,C
(cristal
aperidico)
26

material gentico
26
Hay grandeza en esta concepcin de la

vida,... que mientras este planeta ha ido
girando segn la constante ley de la
Hay
grandeza
esta
concepciny de
gravitacin,
seen
han
desarrollado
se la
estn
vida,... que mientras
este
ha ido
desarrollando,
a partir
deplaneta
una molcula
girando segn
la constante
ley de
helicoidal
asombrosa,
infinidad
delaformas
gravitacin,
han desarrollado
y se estn
cada
vez mssebellas
y maravillosas
desarrollando, a partir de
un comienzo
Charles
Darwintan
sencillo, infinidad de formas cada vez ms
bellas y maravillosas
Charles Darwin
27

material gentico
27
28

material gentico
28
Replicacin del DNA
29

material gentico
29
25 de Abril 1953
It has not escaped our notice that the

specific pairing we have postulated
immediately suggests a possible
copying mechanism for the genetic
material.
30

material gentico
30
Posibles modelos de replicacin
31

material gentico
31
Replicacin del DNA

Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicacin es semiconservativa
Mathew Meselson
Frank Stahl
32

material gentico
32
33

material gentico
33
Replicacin del DNA
Enzimas que sintetizan (replican) el DNA

E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y repara)
DNA polimerasa II y III (funcin principal en
la sntesis)
Aade bases en ambas cadenas en la
direccin 5 3
Requiere un 3 OH final
Eucariotas
5 polimerasas
y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3 5
exonucleotdica. Sustituye bases mal emparejadas
(10-5) por correctas (10-7); mecanismos de reparacin
adicionales la reducen hasta 10-10
34

material gentico
34
Las polimerasas
conocidas aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5 3
35

material gentico
35
36

material gentico
36
Por qu no hay una enzima que

polimerice en la direccin 3-> 5?
No funcionara la correccin de errores por
falta de un trifosfato que suministre la
energa de enlace covalente azcar-fosfato
37

material gentico
37
Adicin 53
38

material gentico
38
OH
PP
OH
OH
3
PP
+ H2O
P
39
OH
OH
PP
OH

material gentico
39
Adicin 35
(hipottica)
40

material gentico
40
OH
P
P
OH
+ H2O
P
PP
OH
PP
P PP
OH
P
PP
41
P
PP
OH
OH
Adicin 35
(hipottica)

material gentico
41
Correccin de errores
42

material gentico
42
OH
PP
POH
OH
3
PP
+ H2O
P
43
OH
OH
Adicin 53

material gentico
43
OH
P
P
PP
44
POH
OH
Adicin 35
(hipottica)

material gentico
44
Replicacin del DNA (2)

Replicacin: continua (cadena adelantada, cebador
slo inicio) y discontinua (cadena retrasada)
Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3 OH.
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena huecos
(gap)
Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)
45

material gentico
45
46

material gentico
46
47

material gentico
47
Polimerasa III
Polimerasa I
48

material gentico
48
Por qu el cebador es RNA?
El cebador es ms proclive al error, por

lo que debera eliminarse y el RNA
puede detectarse y eliminarse
fcilmente por la DNApol I
49

material gentico
49

El replisoma: complejo enzimtico de la
replicacin que coordina la sntesis de las
dos cadenas, maquinaria molecular
Dmero de la DNA pol III (ncleos
catalticos)
Primosoma: formado por dos enzimas
Primasa
Helicasa (desenrolla el DNA)
Protena de unin a cadena sencilla, ssb
(Unin Y, estabiliza el DNA de cadena
sencilla)
Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena)
y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA
ligasa -> Relajacin del superenrollamiento
50
50
material gentico
El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria
51

material gentico
51
52

material gentico
52

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva
53

material gentico
53
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material gentico
54
Topoisomerasas
55

material gentico
55

Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en
eucariotas
La replicacin es bidireccional
Horquilla
replicacin
56

material gentico
56
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de

replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional
57

material gentico
57
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de

replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada
unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es
bidireccional
58

material gentico
58
Links de inters
Watson-Crick original paper (1953 Nature)
Trabajos estelares del descubrimiento de la doble h
lice
DNA: el secreto de la vida (Animacin)
Celebracin 50 aniversario descubrimiento de la dobl
e hlice en la UAB
DNA Structure
The Search for DNA - The Birth of Molecular Biolog
y
59
Image Library of Biological Macromolecules - DNA

DNA berkeley
DNA Learning Center
Beginner's guide to Molecular Biology
Glosario de Gentica molecular
DNA Replication
Animacin de la replicacin
material gentico
59

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del material gentico

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Tema 6: Estructura y replicacin del

Muerte por neumona

Dr. Antonio Barbadilla

Cul es el Principio transformante?

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Tema 6: Estructura y replicacin del

Experimento de Alfred Hershey y Martha

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Componentes de los cidos nucleicos

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1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

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Dos lneas de evidencia:

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Significado reglas de Chargaff

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

doble hlice, formada por cadenas orientadas

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

La estructura se mantiene gracias

Doble hlice, formada

Desnaturalizacin del DNA

Dr. Antonio Barbadilla

Temperatura de fusin (desnaturalizacin)

Dr. Antonio Barbadilla

Hlices levgiras y dextrgiras

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

La estructura del DNA suministra una

Dr. Antonio Barbadilla

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicacin del

Y ahora las declaraciones de Watson y

Antes pensbamos que nuestro futuro

Tema 6: Estructura y replicacin del

Tema 6: Estructura y replicacin del

Tema 6: Estructura y replicacin del

Tema 6: Estructura y replicacin del

Hay grandeza en esta concepcin de la

Tema 6: Estructura y replicacin del

Dr. Antonio Barbadilla

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Replicacin del DNA

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Posibles modelos de replicacin