HONGOS

(MÉTODO DE COLORACIÓN DE PAS )

Conjunto de seres vivos que incluyen desde

organismos unicelulares a organismo
pluricelulares macroscópicos. Están
formados por células eucarióticas con una
pared rígida y se caracterizan por ser
móviles , presentan nutrición heterótrofa por
absorción y reproducción sexual y asexual.
Los hongos unicelulares: Microorganismo
poseen forma redondeada (Levaduras o
conidias). La mayoría de los hongos son
pluricelulares: están formados por
hifas :Células cilíndricas alargadas,
linealmente largos, filamentosos,
tabicadas.
Las hifas: Formas micelios visibles
macroscópicamente, algunos hongos
microscópicos pueden causar diversas
enfermedades :micosis.
Células fúngicas microscópicas : Se
visualizan en forma directa en fluidos o
por Coloraciones Histoquímica y
Especiales en tejidos.
ESTRUCTURA CELULAR :

Células fúngicas : Eucarióticas poseen

núcleo, RE, AG, las mitocondrias y un
citoesqueleto, ribosomas
(citoplasma ), membrana celular,
pared rígida (Recubierta constituida
por polisacáridos).
PARED CELULAR: CAPAS O ESTRATOS:

1.- QUITINA,2.- CELULOSA: Estructuras a

morfas (Glucanos, mánanos), tiene
proteínas asociadas a los polisacáridos y
lípidos.

La pared celular : Exoesqueleto rígido

que protege a la célula, algunos órganos
unicelulares producen capsulas
(Polisacáridos mucilaginosos).
MORFOLOGÍA :

1.- HONGOS UNICELULARES:

Células aisladas ovales : 3 -10 um de
diámetro (levaduras).
2.- HONGOS PLURICELULARES:
Células alargadas- cilíndricas: 3-12 um
de diámetro lineales, filamentosas,
ramificadas y tabicadas(hifas).
CLASIFICACIÓN:

1.- MORFOLOGIA:
- Filamentosas :Hifas.
- Redondeadas: Conidias
- Esporas: Ovaladas o redondas
- Filamentos con esporas
2.- SEGÚN LA ENFERMEDAD QUE
PRODUCE:

A) MICOSIS SUPERFICIAL: Piel, pelo, uñas. Ejm;

Malassezia furfur , Nocardia, Minutissima,
Nocardia minutissima, Nocardia tenuis,
Cladosporium wornecku, Trichophyton.

B) MICOSIS PROFUNDA O SISTEMICA: Ubicado

en los tejidos profundos. Ejm:
Actinomices, Nocardia asteroides, Histoplasma
capsulatum.
 METODOS DE COLORACION MAS
USADOS PARA LA DETERMINACION
DE HONGOS:

1.- METODO DE COLORACION DE PAS

2.- METODO DE COLORACION DE GROCOTT

3.- METODO DE COLORACION DE GRIDLEY.

4.- METODO DE COLORACION DE GIEMSA.

5.- METODO DE COLORACION DE GRAM.

 ACIDO PERYODICO DE SCHIFF
(PAS)

I.- OBJETIVO: DEMOSTRAR la presencia de

HONGOS en CORTES DE TEJIDOS
HISTOLOGICOS.

II.- FIJACIÓN: Formalina neutra al 10%,

estabilizada.

III.- MICROTOMIA: En parafina. 4-6 micrones.

 IV.- SOLUCIONES:
1.- SOLUCIÓN ACIDO PERYODICO 0.5%

Acido peryódico ………………………0.5 g

Agua destilada ………………….. .100.0 ml

2.- SOLUCIÓN DE ACIDO CLORHÍDRICO 1N

Acido clorhídrico, g. esp. 1.19……………..83.5 ml

Agua destilada ……………………….916.5 ml
3.- REACTIVO SCHIFF DE COLEMAN

Fucsina básica………………………..……... 1.0 g

Agua destilada, calentar a 60 °C………….200.0 ml
Llevarlo a punto de ebullición.
Dejarlo enfriar y luego agregar
Metabisulfito de potasio ……………………………
2.0 g
Acido clorhídrico 1N………………………………..10.0 ml
Dejarlo aclarar durante 24 horas y luego agregar
Carbón activado………………………………........ 0.5 g

Agitar durante 1 minuto, luego filtrarlo a través

de papel de filtro grueso. Repetir la filtración
hasta que la solución aparezca incolora.
Mantener en la refrigeradora.
4.- SOLUCIÓN DE HEMATOXILINA DE MAYER
(C. 9)
O SOLUCIÓN DE HEMATOXILINA DE HARRIS
(C. 9)

V.- PROCEDIMIENTO:

1.- Desparafinizar e hidratar hasta llegar al

agua destilada.
2.- Oxidar en la solución de ACIDO
PERYODICO durante 5 minutos.
3.- Enjuagar en agua destilada.
4.- Colocar en el REACTIVO DE SCHIFF DE
COLEMAN durante 15 minutos.
5.- Lavar con agua tibia durante 10
minutos.
.
.
6.- Contrastar con la solución de
HEMATOXILINA DE MAYER durante 15
minutos, o la solución de
HEMATOXILINA de HARRIS durante 6
minutos.
7.- Lavar con agua corriente durante 15
minutos.

8.- Deshidratar y aclarar a través de

alcohol etílico al 95%.
alcohol; etílico
absoluto y xilol. 2 cambios. 2
minutos cada uno.
9.- Montar con bálsamo de Canadá
o un medio resinoso.
VI.- RESULTADOS:
Hongos……………………………………Rojo a púrpura
Núcleos…………………………………..Azul
Glucógeno. mucina y algunas
Membranas básales………….....Rojo a púrpura
Hongos color rojo a púrpura, núcleos azules
 METODO DE COLORACION DE
GROCOTT

I.- OBJETIVO: DEMOSTRAR la presencia

de HONGOS en CORTES DE TEJIDOS
HISTOLOGICOS.

II.- FIJACIÓN: Formol al 10%.

III.-MICROTOMÍA: Cortar secciones de

parafina de 5 micrómetros de grosor.
IV.-SOLUCIONES:

1.- SOLUCION DE ACIDO CROMICO AL 5%

Ácido crómico………………………………5,0 g
Agua destilada…………………………100,0 ml

2.-SOLUCION DE NITRATO DE PLATA AL 5%

Nitrato de plata…….…………………….5,0 g
Agua destilada c.s.p……………….100,0 ml

3.-SOLUCION DE METENAMINE AL 3%
Hexametilenotetramino………..….3,0 g
Agua destilada…..………………..100,0 ml
 4.- SOLUCION DE BORAX AL 5%
Bórax………………………………..5,0 g
Agua destilada……..………100,0 ml

5.- SOLUCION STOCK DE NITRATO DE

PLATA-METANAMINE:

Solución de nitrato de plata al 5%...5,0 ml

Solución de metenamine al
3%.....100,0 ml
Se forma un precipitado blanco, pero
inmediatamente agitar para disolverlo.
6.-SOLUCION DE TRABAJO DE NITARTO DE
PLATAMETENAMINE:
Solución de bórax al 5%..............2,0 ml
Agua destilada……………………………..25,0 ml
Combinar y añadir Solución stock de nitrato
de platametanamine………….……25,0 ml

7.- SOLUCION DE DISULFITO DE SODIO AL 1%

Disulfito de sodio……..……………………1,0 g
Agua destilada……………………………100,0 mL

8.-CLORURO DE ORO AL 0,1%

Solución de cloruro de oro 1 %.....10,0 mL
Agua destilada………………….…..………90,0 ml
Esta solución puede ser usada
repetidamente.
9.- SOLUCIO DE TIOSULFATO DE SODIO AL 2%
Tiosulfato de sodio……………………… 2,0 g
Agua destilada...........................100,0 ml

10.- SOLUCION STOCK DE LIGHT GREEN SF

YELLOWISH:
Light Green sf yellowish (C.l. 42095)… 0,2 g
Agua destilada………………………….……….100,0 ml
Ácido acético glacial……………………………..0,2 ml

11.- SOLUCION DE TRABAJO DE LIGHT GREEN SF

YELLOWISH
Solución stock de light green sf yellowish.10,0 ml
Agua destilada…………………………………………50,0 ml
V.- PROCEDIMIENTO:

1. Desparafinar e hidratar hasta agua

destilada. Las láminas previamente
coloreadas con otros colorantes
pueden ser usados removiendo el
cubreobjetos en xilol y corriendo a
través de alcoholes hasta agua.
2. Oxidar en SOLUCION DE ACIDO
CROMICO AL 5% por una hora.
3. Lavar en agua corriente por pocos
segundos.
4. Enjuagar en DISULFITO DE SODIO AL
1% por 1 minuto para remover
cualquier residuo de ácido crómico.
Lavar en agua corriente por 5 a 10
minutos.
5. Lavar con 3 ó 4 cambios de agua
destilada.
6. Colocar en SOLUCION DE TRABAJO DE
NITRATO DE PLATA-METENAMINE en la
estufa a 58 a 60 °C por 30 a 60 minutos
hasta que los tejidos se tornen de color
marrón amarillento. Usar pinzas cubiertas
con parafina para poder remover las
láminas de esta solución. Lavar en agua
destilada y chequear bajo el microscopio.
Los hongos pueden estar marrón oscuro
en este estado.
7. Enjuagar en seis cambios de agua
destilada.
8. Dar tono en SOLUCION DE CLORURO DE
ORO 0,1% por 2 a 5 minutos.
9. Enjuagar en agua destilada.
10. Remover la plata no reducida con
SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO AL
2% por 2 a 5 minutos. Lavar en agua
corriente.
11. Contrastar con SOLUCION DE TRABAJO
DE LIGHT GREEN SF YELLOWISH por
30 a 45 segundos.
12. Lavar en agua corriente. Deshidratar,
aclarar y montar en bálsamo de
Canadá.
VI.- RESULTADOS:
Los hongos………………. Negro la
mucina………………………... gris oscuro y el
fondo……………………………… verde pálido.
 HONGOS – TECNICA DE COLORACIÓN
NOMBRE DESCRIPCIÓN COLORACIÓN
Actinomices sp Filamentos ramificados, Grocott
delicados, <1 micrón de Gram-positivo
diámetro Giemsa-PAS
Nocardia asteroides Organismos largos, Grocott
filamentosos, 0.5 a 0.1 Gram-positivo
micrón de diámetro, que Giemsa
se ramifican en ángulo
recto

Histoplasma Pequeños, formas Grocott

Capsulatum ovoides esferuladas, Gridley Fungus
de 2-4 micrones de
diámetro
Blastomycetes Esporas redondas y Grocott
ovaladas con paredes Gridley fungus
gruesas.
Criptococcus Esporas con paredes Mucicarmin
neoformans delgadas de 2 a 20 Gram positivo
micrones de diámetro Azul de Alcian,
Grocott, Gridley
Fungus Hierro coloidal
HIFAS DE
 COLORACION HISTOQUIMICA - ESPECIALES
METODO DE OBJETIVO O RESULTADOS
COLORACION PROPOSITO
PAS Hongos Hongos = Rojo a
purpura
Núcleos = Azules
GROCOTT Hongos Hongos = Negro
Mucina = Gris oscuro
Fondo = Verde pálido

GRIDLEY Hongos (Micelio y Micelio = Purpura

conidia) intenso
Conidia = Rojo intenso
a purpura
Fondo = Amarillo

FITE Nocardia (Hongos) Nocardia = Rojo

purpura
Fondo = Azul pálido
 COLORACION ESPECIALES
METODO DE OBJETIVO O RESULTADOS
COLORACION PROPOSITO
GIEMSA Hongos Hongos = Azul
Citoplasma = Rosa
Núcleo = Azul
GRAM Hongos (Nocardia, Hongos = Azul
actinomicetes)
H-E Hongos (micelio) Hongos = Rojo
purpura
WEIGERT Hongos (micelio) Hongos = Negro o
marrón

AZUL DE Hongos (micelio Hongos = Azul

TOLUIDINA
 Paciente A.A. Corte histopatológico de tejido cerebral (Hematoxilina
eosina, 250 X). Se aprecia reblandecimiento cerebral incipiente, zonas
hemorrágicas y abundantes MICELIOS ANCHOS, NO TABICADOS,
ramificados en ángulos rectos y agudos, típicos de hongos del género
Mucor.
 Paciente A.A. Corte histopatológico de la carótida interna (coloración de
Weigert para fibras elásticas y de Grocott para hongos, 250 X). En color
negro, puede identificarse la capa elástica interna y en gris oscuro se
observan abundantes MICELIOS del tipo Mucor. En el campo superior
izquierdo, se aprecia parte del trombo con algunos micelios
 Coloración con azul de Toluidina. Se aprecian racimos de
estructuras fúngicas de forma redonda (esporoblastos) en estroma
medio y profundo.