UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN

BIOQUMICA DIAGNSTICA
LABORATORIO HEMATOLOGA ESPECIAL II

TCNICA REDUCCIN DE NITROAZUL

DE TETRAZOLIO (NBT)
EQUIPO 5
MORELIA MANDUJANO LUIS JAVIER
PREZ VERGARA ANA DELIA
VALADEZ TELLEZ RAL ALEXIS

*Introduccin
Los neutrfilos tienen
una funcin
fundamental en los
mecanismos de
defensa contra los
agentes microbianos.

(Babior, 2000)

Destruccin de
patgenos por
neutrfilos

sistema
enzimtico
NADPH oxidasa

ROS
(Babior, 2002)

Existen diversas tcnicas para

la evaluacin de la actividad
fagoctica.
Su
principio
general consiste en incubar
una
fraccin
rica
en
leucocitos con una suspensin
de partculas inertes o de
microorganismos
para
permitir la fagocitosis, y
luego cuantificarla mediante
la observacin microscpica
de las clulas teidas, en
portaobjetos.
Sin embargo, un problema general de
estos mtodos es la imposibilidad de
diferenciar entre las partculas
fagocitadas y aquellas que solo se han
adherido superficialmente a las
clulas.

*NBT (NITROAZUL DE
TETRAZOLIO)

El NBT es una sal de tretrazolio soluble en agua, de color amarillo,

con frmula C40H30Cl2N10O6 y con peso molecular de 817,674 g/mol.
Est formado por la unin de dos grupostetrazol.

*FUNDAMENTO
El NBT es comnmente utilizado como unindicador redox en las
reacciones, en las que participa normalmente acepta cuatro
electrones y dos protones para pasar a su forma reducida insoluble
el formazn que es de color azul intenso, para medir la capacidad
oxidativa mediante la produccin de anin superxido.

(Babior, 2000)

Este ensayo es una prueba indirecta utilizada para evaluar

desrdenes de la fagocitosis y del sistema bactericida
dependiente del oxgeno, y constituye la prueba esencial para el
diagnstico de la enfermedad granulomatosa crnica,
inmunodeficiencia congnita caracterizada por el defecto de la
capacidad oxidativa.

Usos
La prueba de NBT se utiliza
principalmente para estudiar a
pacientes con enfermedad
granulomatosa crnica (CDG).
Otras aplicaciones:
Distinguir las condiciones febriles
y/o las leucocitosis de infeccin
bacteriana, de
aqullas de origen no bacteriano.
Determinar la respuesta a la
terapia antibitica

Prueba de
NBT
Extrae sangre con
anticoagulante
(heparina)

Metodologa

No
Estimulado
Agregar 0.12 mL de sol NBT mas
0.2mL de sangre heparinizada
Incubar 10min a 37C
Enfriar a Temperatura ambiente
Mezclar de nuevo
Trasferir 75uL a un portaobjetos
Teir con colorante de Wright

Prueba de
NBT
Extrae sangre con
anticoagulante (heparina)
Estimulado

Agregar 0.1mL de sol de NBT +

0.05mL de sangre heparinizada +
5uL de solucin estimulante.

Seguir con metodologa del no

estimulado

Valores
En pacientes
normales se
observa que la gran
mayora (+ 90%)
reducen el NBT,
generando
formazan.

La ausencia de la
reduccin NBT (10%) indica que
existe un defecto
metablico
importante, EGC u
otros trastornos de
los fagocitos.

Consideraciones
1.- Neutrfilos intactos y
membrana intacta
2.- Neutrfilos deben estar
aislados, neutrfilos
acumulados de otros
leucocitos o plaquetas no
deben contarse

Resultado Positivo

3.- Neutrfilo debe ter

depsitos de formazan en
forma discretas, grandes
y/o irregulares
4.- Se debe registrar
positivo de 100 o ms
neutrfilos contados
Resultado Negativo

Existen variantes de esta tcnica donde el precipitado de formazan es

extrado de las clulas, solubilizado y finalmente cuantificado por
espectrofotometra. Bajo esta modalidad, se obvia el recuente
microscopio de las clulas, as como subjetividad de la lecturas de las
clulas .

Por este mtodo se utiliza HCl para detener la reduccin del NBT y
una columna de lana de nylon .
El formazan reaccionara con extracto de dioxano y se lee a 520 nm.

*BIBLIOGRAFA
Babior BM. Phagocytes and oxidative stress. Am J Med. 2000 Jul;109(1):33-44.
Babior BM, Lambeth JD, Nauseef W. The neutrophil NADPH oxidase. Arch
Biochem Biophys. 2002 Jan; 397(2): 342-4.
Barrante A, Montero C. La prueba de reduccin del NBT. Acta Mdica Cost. 19(1)
85-91;
Sigma-Aldrich. Reduccin de Nitroblue Tretazolium (NBT). https://
www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/General_Informa
tion/1/insert_es_840.pdf