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c) Adicionar a tripsina
d) Esperar a tripsina reagir
N cls/mL= n cls
contadas/4 x diluio da
cmara X diluio amostra
N cls /mL=n cls
contadas/4 x 104 X 10
l) Preparar suspenso 0,5 X105 clulas por mL
-200 l/ poo X 96 poos = 19,2 mL
- Contagem de clulas: 5 X 105 clulas/mL
-Nmero de clulas necessrias:
0,5 X105 clulas 1000l
X - 19200l
X= 9,6 X105 clulas
- Quantos l da suspenso celular ter 9,6 X105 clulas?
TRATAMENTO
Doxorrubicina (100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,125 g/mL)
1000L
1000L
3,125g/mL 6,25g/mL
H
24h
TRATAMENTO
O que vocs vo fazer!!!
Preparar Retirar o Lavar os
soluo meio poos 2X
MTT com PBS
Adicionar
5 DMSO
2h
Estabilizao
da cor 5 540 nm
Preparo da soluo de MTT (0,5mg/mL)
a) Preparo da soluo estoque a 5mg/mL
- Pesar 5mg de MTT
- Solubilizar em 1,0 mL de PBS estril.
b) Preparo da soluo de uso (0,5mg/mL)
CV=CV
5mg/mL X V = 0,5mg/mL X 10 mL
V= 1mL da soluo estoque
+ 9 mL de meio completo
Adicionar
5 DMSO
2h
Estabilizao
da cor 5 540 nm
Clculos
Descontar o branco !
Considerar o controle como 100% de
Fazer a mdia da
clulas viveis e fazer regra de trs para
absorbncia
determinar a viabilidade celular das
amostras