AO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO

BIOQUMICA CLNICA

ENZIMOLOGA CLNICA I

UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
TECNOLOGIA MEDICA
ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT.
PATOLOGICA

LIC. CUYUBAMBA PEREZ EDGAR E.

CTMP 8778
 ENZIMOLOGA
CLNICA

Consideraciones Generales
Mtodos Analticos
Clculo de la Actividad
Enzimtica
 Catalizador Protenas-Enzimas
OBJETIVOS DE APRENDIZAJE

- Describir las caractersticas de las reacciones enzimticas.

- Discutir la estructura y la composicin de enzimas,
incluyendo cofactores y las condiciones que afectan a las
reacciones.
- Describir la cintica de enzimas basado en la ecuacin de
Michaelis-Menten.
- Diferenciar los tres tipos de Inhibicin de la enzima.
- Discutir el uso y la utilidad diagnstica de los ensayos
enzimticos.
Todas las reacciones metablicas que ocurren en nuestro
organismo se hayan mediados por enzimas.
En su mayora son de naturaleza proteica
(algunas son ARN).

Catalizadores, capaces de acelerar las reacciones qumicas

en ambos sentidos, sin consumirse en ella,
ni formar parte de los productos.

Tienen gran especificidad de reaccin (por el sustrato),

requieren de ciertos compuestos orgnicos, termoestables
para poder cumplir con su funcin cataltica (coenzimas)
PROTENAS CATALTICASENZIMAS
(ez)
Funciones Biolgicas
Reacciones Qumicas

CATALIZADORES BIOLGICOS (ENZIMAS)

METABOLISMO EFICIENTE
(vas metablicas ordenadas, secuenciales y
ramificadas)

CONDICIONES FISIOLGICAS ( T - pH)

 Distribucin de las enzimas (ez)
en los espacios extra e intracelular
Las ez pueden encontrarse en el citosol o estar fijadas a organelas
Hay ez 100 % citoplasmticas (uniloculadas).
Por ejemplo GPT LDH.
Otras ez un % en las organelas y en el citoplasma (biloculadas)
como la GOT que est 60% en el citoplasma y 40% en mitocondria,
MDH 50 % en citoplasma y 50% en mitocondria.

En las clulas somticas

Las actividades catalticas de las ez se mantienen muy constantes,
Existe un equilibrio entre la sntesis y la degradacin enzimtica
pero llegan al espacio extracelular
pequesimas cantidades de muchas enzimas intracelulares.

Se originan modificaciones del nivel enzimtico en el plasma

de indudable valor que ayudan a realizar un diagnstico.
 PERFIL DE REACCIN
Reacciones no enzimticas.
Reacciones enzimticas.

Principio Bsico:
El sustrato debe adquirir una
energa de activacin
estado de transicin de la reaccin
Posee un nivel de energa mximo
 PRINCIPIO DE
REACCION

Dado que el estado de transicin de la reaccin catalizada

por la enzima tiene una energa menor;
esta puede ocurrir rpidamente.
Perfil de reaccin en las reacciones
enzimticas y no enzimticas
Energa

Energa de
Estado de transicin
activacin en
una reaccin
no enzimtica

Energa de activacin
en una reaccin
Reactivos enzimtica

Complejo ES

Energa disponible a partir

de la reaccin a T
y presin constantes

Productos Complejo EP

Coordenada de reaccin
 REACCIONES
ENZIMATICAS
Factores que afectan a las reacciones enzimticas:
Efecto de la Temperatura.
La estructura tridimensional de una protena implica la
existencia de interacciones dbiles que puede
alterarse a causa de una desnaturalizacin por altas
temperaturas.
Efecto del pH.
Los cambios de pH modifican la carga inica de las
cadenas laterales de aminocidos de las enzimas, y
pueden tener un efecto significativo sobre la actividad
enzimtica y la velocidad de las reacciones.
Factores que afectan a las
reacciones enzimticas
 ACTIVIDAD
ENZIMATICA
Velocidad de una reaccin (v) catalizada bajo
unas condiciones definidas: pH, Tampn, T.
(V): se expresa en forma de velocidad de
conversin del sustrato en producto por minuto
(mol/min).
La actividad cataltica es independiente del
volumen de reaccin (no se afecta por la
dilucin).
Se utiliza el nmero de recambio o turnover de
sustrato por unidad de tiempo.
 ACTIVIDAD
ENZIMATICA
KATAL: La cantidad de actividad enzimtica que
cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en 1
mol de producto por segundo. (1 kat = 1 mol/s).
El katal no es til para expresar la actividad
enzimtica real.
Unidad estndar: unidad internacional que
corresponde a una unidad mayor.
(1UI = 1 umol/min)

- La actividad especifica de una enzima:

(umol/min/mg de protena o UI/mg de protena)
 ACTIVIDAD
ENZIMATICA
 ESTRUCTURA DEL CENTRO
ACTIVO
La especificidad de reaccin y
la especificidad de sustrato
estn determinados por la estructura del sitio activo.
 ESTRUCTURA DEL CENTRO
ACTIVO
El centro activo de la enzima esta formado por el
lugar de fijacin del sustrato
y por el centro cataltico.

Especificidad de reaccin:
reaccin catalizada por la enzima.

Especificidad de sustrato:
depende del tamao, estructura, cargas,
polaridad y carcter hidrfobo de su lugar de fijacin.
 El sustrato debe fijarse al centro activo y preparar
as la catlisis.
La enzimas muy especficas (p. ej. Catalasa,
Ureasa) catalizan un tan slo un tipo de reaccin;
sin embargo, otras tiene una especificidad de
sustrato mas amplia (p. ej. Serina proteasas:
quimiotripsina,, tripsina y elastasa)
 Las isoenzimas son distintas formas moleculares
de una misma enzima que presentan o muestran
especificidad por el mismo sustrato.
Se diferencian en la carga elctrica neta, en el
peso molecular o en ambas simultneamente.
En el suero se determinan para diagnstico de
niveles especficos de isoenzimas de tejidos.
 ISOZIMAS (isoez)
Se utiliza a menudo para referirse a:
Variantes genticas de una enzima.
Protenas genticamente independientes y con escasa
homologa.
Heteropolmeros de dos o mas cadenas polipeptdicas
no unidas con enlaces covalentes.
Enzimas no relacionadas que catalizan reacciones
similares. (enzimas que requieren coenzimas, cofactores)
Formas diferentes de una cadena polipeptdica nica.
(variacin de HC, desaminacin de aa)
 VARIANTES ENZIMTICAS
1) Isoenzimas: variaciones en la molcula de la ez que da
caractersticas fsico-qumicas (distinto pH, Km, diferente accin
de inhibidores y activadores) e inmunolgicas diferentes; de
modo que realizan el mismo tipo de reaccin y actan
sobre el mismo sustrato pero en condiciones distintas.
2) Heteroenzimas: ez de funcin semejante, especfica de las
diversas especies biolgicas (ej. la LDH del hombre y del
conejo).
3) Aloenzimas: variante de ez e isoez condicionadas
genticamente; aparecen en determinados individuos de una
misma especie. La mayora de las aloenzimas no conducen
a las manifestaciones patolgicas. Sirven para caracterizar
el tipo bioqumico de un individuo.
ENZIMAS UTILIZADAS EN EL DIAGNSTICO
CLNICO DE ENFERMEDADES
ENZIMA TEJIDO(S) USO DIAGNOSTICO

AST Corazn, msculo Hepatopata

esqueltico, hgado,
cerebro.
ALT Hgado Hepatopata (ALT > AST)
Amilasa Pncreas, glndulas Pancreatitis aguda,
salivales obstruccin biliar
CK Musculo esqueltico, Distrofia muscular, infarto
corazn, cerebro de miocardio
GGT Hgado Hepatitis, exceso de
alcohol
LDH Corazn, hemates, Linfoma, hepatitis
hgado
Lipasa Pncreas Pancreatitis aguda,
obstruccin biliar
Fosfatasa alcalina Osteoblasto Enfermedad sea,
tumores seos
 FUNDAMENTOS CLNICOS DE LA ENZIMOLOGA

1) Enzimas Plasmoespecficas:
Ez que tienen su lugar de accin en el plasma.
Son sintetizadas en determinados tejidos y vertidas a la sangre donde se
encuentran su sustrato y su coenzima.
Nos interesa sus valores inferiores; porque una disminucin de su actividad
(normalmente alta en suero) indica una alteracin en la sntesis, y como la
mayora son producidas en el hgado esto nos estara indicando una
alteracin de la funcionalidad heptica.
2) Enzimas secretadas o exocitoenzimas
Secretadas por glndulas tejidos muy especializados, su lugar de accin
est alejado, (ej. enzimas digestivas).
Clnicamente, estas ez en sangre estn en baja actividad. Aumentaran sus
niveles en la patologa aguda como la pancreatitis y en casos de patologa
crnica, donde la glndula est hipofuncionante.
3) Enzimas celulares o endocitoenzimas
Tienen su lugar de accin dentro de la misma clula que las sintetiza
Se dividen es 2 grupos: Ubicuas y Organoespecficas.
 FUNDAMENTOS CLNICOS DE LA ENZIMOLOGA

Para la valoracin enzimtica hay que tener en cuenta:

a) Distribucin de las enzimas: conocer la topologa
enzimtica frente a un aumento de una ez para saber que
correlacin clnica tiene.
b) Localizacin de las enzimas dentro de la clula:
entender que tipo de dao sufri la misma.
enzimas citoplasmticas alteracin no es tan severa,
enzimas mitocondriales existen focos necrticos
que permiten el pasaje de las mismas que solamente aparecen en
sangre en casos de necrosis intracelular.
c) Conocer el tiempo de vida media de esa enzima: para
poder interpretar los tiempos de desaparicin de esas
actividades enzimticas aumentadas.
 R S U
S P O
A C I A
GR C I O N
A TE N