Recuento Coliformes

Miluska Loayza
INVESTIGACIN Y RECUENTO DE Enterobacteriaceae LACTOSA + (COLIFORMES)
Las Enterobacteriaceae lactosa-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen un grupo de
bacterias que se definen ms por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios
taxonmicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su
capacidad para fermentar la lactosa con produccin de cido y gas, ms o menos
rpidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubacin
comprendida entre 30-37C.

Fermentacin cido mixta, produce

Oxidasa - Glucosa
Acido y
una mezcla de cidos orgnicos:
gas lctico, actico, frmico y etanol,
CO2 y H2. Prueba del Rojo de Metilo
+.
Fermentacin butanodioica: acetil
metil carbinol o acetona precursor
intermediario del butanodiol. prueba
de Voges Proskauer +

Indol + RM + VP - Citrato -

Reacciones en KIA Pruebas del INViC

Investigacin y recuento de Enterobacterias lactosa +

Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero tambin en otros

ambientes: suelo, plantas, cscara de huevo, etc.

Aunque su especificidad como indicadores no es buena, se suelen usar como ndice

de contaminacin fecal por:

- Su frecuencia en heces.
- Su fcil deteccin en el laboratorio.
- Sus caractersticas semejantes, en algn aspecto, a las de algunos miembros
patgenos de la familia Enterobacteriaceae.

Dentr, de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado
sanitario y, por consiguiente, los que ms interesan en el anlisis microbiolgico de
alimentos.

Se considera a los coliformes fecales como presuntos Escherichia coli. Sus

principales caractersticas son:

- Capacidad para desarrollarse entre 43,5-45,5 C.

- Capacidad para crecer en presencia de sales biliares.
- Facultad para producir indol en agua de peptona.

En general, niveles altos de Enterobacteriaceae lactosa-positivas (coliformes)

indican manipulacin y elaboracin deficientes de los alimentos.
Investigacin y recuento de Enterobacterias lactosa + Caldo lactosado biliado verde
brillante
(Brilliant Green Bile Lactose:
Mtodo en medio lquido B.G.B.L)
Peptona 10 g
Lactosa 10 g
Suspension madre 1:10 TW Bilis de buey 20 g
Verde brillante 0,0133 g
Disolver. Ajustar el pH a 7,4.
Agua destilada Distribuir
1.000 ml en
1 ml 1 ml 1 ml tubos de ensayo con campana Durham a razn
de 10 ml. Esterilizar en autoclave a 121 C 20
minutos.
Lectura: En las tablas del N.M.P. (tres series de tres tubos).
Son positivos los tubos que presentan gas en la campana
Durham

10-1 10-2 10-3

B.G.B.L

Incubacin a 31C durante 24-48h.

+ + + + - - - - -
 Tema 6

Investigacin y recuento de Enterobacterias lactosa +

 Tema 6

Investigacin y recuento de Enterobacterias lactosa +

Agar biliado-rojo neutro-cristal violeta

Suspension madre 1:10 TW (Violet Red Bile Agar: VRBA)

Extracto de levadura 3g
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml Peptona 7g
10 ml Cloruro sdico 5g
Sales biliares 10g
Lactosa 5g
Rojo neutro 0.03g
Cristal violeta 0.02g
Agar 15g
Agua destilada 1000ml
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

1ml

VRBA

- Despus de depositada la siembra, verter, en cada placa

15 ml de agar VRBA atemperado a 45 C.Mezclar, solidificar
Las sales biliares y el cristal violeta del medio inhiben la flora
y aadir una capa de VRBA en la superficie.
Gram+. La fermentacin de la lactosa hace que vire el indicador
-Incubar a 31C durante 24 horas..
rojo neutro a un color rojo prpura. Tambin se produce una
-Observacin y recuento de colonias tpicas: rojo prpura,
precipitacin de las sales biliares.
rodeadas de una zona de precipitacin color violeta
 Tema 7

Investigacin y recuento de Escherichia coli Caldo lactosado biliado verde

brillante
Tubos positivos en B.G.B.L. Agar Levine EMB (Brilliant Green Bile Lactose:
B.G.B.L)
Peptona 10 g Peptona 10 g
Lactosa 10 g Lactosa 10 g
Fosfato dipotsico 2 g Bilis de buey 20 g
Eosina 0,40 g Verde brillante
Disolver. 0,0133
Ajustar el pH g Distribuir
a 7,4.
Azul de metileno 0,065 g Agua destilada 1.000 ml
en tubos de ensayo con campana Durham
Agar 15 g a razn de 10 ml. Esterilizar en
1 ml Agua destilada 1.000 autoclave a 121 C 20 minutos.
ml

10 ml caldo B.G.B.L.
con campana Durham

Incubacin 44,5C, 24-28 h.

Las colonias de E. coli sobre agar Levine miden 2-3 mm de dimetro, son planas o
ligeramente cncavas, con centros oscuros, casi negros, que ocupan las 3/4 partes
Tubos + (gas) de la colonia. Con luz reflejada, se observa un brillo metlico verdoso; a veces,
este brillo metlico no se manifiesta.
I M Vi C
Pruebas confirmativas
Agar Levine Indol + Rojo metilo + VP - Citrato -

Incubacin 37C, 24 h.

Agar PCA
Incubacin 37C, 18-24 h.
 Tema 7

Prueba rpida para Investigacin de E. coli (MUG)

Suspension madre 1:10 TSB E. coli posee, junto con algunas especies
de Salmonella y Shigella, la enzima $-D-
1 ml 1 ml 1 ml
Caldo lauril sulfato (MUG) glucuronidasa, que acta sobre el 4-
Triptosa 20 g metil-umbeliferil-$-D-glucurnico (MUG)
Lactosa 5g y libera 4-metil-umberiferona que emite
Cloruro sdico 5g fluorescencia
Lauril-sulfato sdico 0,10 g azul/verde cuando se ilumina con luz
Fosfato dipotsico 2,75 g ultravioleta.
Fosfato potsico 0,75 g MUG +
10-1 10-2 10-3 L-Triptfano 1g
-D-glucurnico 0,10 g
Agua destilada
Caldo lauril sulfato (MUG) 1000ml

Identificacin de cepas ECEH

E. coli O157:H7
Pruebas confirmativas
MUG - Sorbitol -

Se considera E. coli
- Si se ha producido gas por fermentacin de la
lactosa.
- Si se produce fluorescencia azul/verde por
presencia de la enzima $-D-glucuronidasa.
- Si la reaccin de indol es positiva.
Las cepas de E. coli enterohemorragicas, no dan
fluorescencia cuando se investigan por la tcnica
MUG. No fermentan el sorbitol y dan positiva la
prueba de aglutinacin en latex
Bibliografa

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