C.

AISLAMIENTO DEL PATGENO

1. LAVADO DE TEJIDOS AFECTADOS

a. Partes subterrneas
* Realizar limpieza inicial con abundante agua.
* Alargar el proceso de lavado, para el caso de hongos
sensibles a desinfectantes

b. Partes areas
* Colocar las partes seleccionadas bajo un chorro de agua
corriente y lavar cuidadosamente
* En el caso de reas con ceras o pelos realizar una inmersin
momentnea en alcohol

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3. CORTES
a. Hojas
Cortar el material en cuadrados pequeos, a partir del borde de la
lesin, y que contenga parte enferma y parte sana de la hoja

4. DESINFECCIN
Utilizar para esto
* Alcohol etlico al 70%:
Para desinfeccin superficial de rganos leosos, races
gruesas, frutos, etc
- Sumergir o empapar el rgano a esterilizar, luego flamear,
colocar en lugar asptico (o sobre papel secante esterilizado).
- Si se trata de fruto, pasar un algodn humedecido con alcohol
sobre la lesin cerrada

* Hipoclorito de sodio al 2%: sumergir cortes de tejidos durante 3`

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5. ENJUAGE
- Hipoclorito de sodio:
Enjuagar en esterilidad con A.D.E. 3-4 veces y (opcional)
secar en papel de filtro estriles
- Alcohol: Dejar que el alcohol se evapore

6. USO DE PRODUCTOS ANTIMICROBIANOS

Uso de inhibidores como:
a. cido lctico 25 gotas / L. ---------- en el medio tibio
b. Estreptomicina 200 ppm -------------- en el medio tibio
c. Rosa de bengala 100 300 ppm.----esterilizable
d. PCNB : para hongos secundarios ---------- en el medio tibio
e. Antibiticos de amplio espectro ---------- en el medio tibio

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7. SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO
* Hojas: Colocar los cortes en medio de cultivo (4-5 cortes/ placa)
* Tejido leoso o frutos: Abrir la lesin con cuchillo o bistur
estril (luego de empapar y flamear), exponer parte interna
afectada y sembrar directamente en medio de cultivo

Importante: Medios pobres en hidratos de carbono limitan

multiplicacin de bacterias contaminantes e inducen al
hongo a entrar en fase de esporulacin

8. INCUBACIN
Temperatura ambiente por 5 a mas das, con luz si fuera
necesario

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9. OBSERVACIN
- Debe ser diaria, puede observarse:
a. Un mismo hongo en todos los cortes,
b. Diferentes hongos en cada corte,
c. Ningn hongo
- Correlacionar el (los) hongos aislado (s) con la literatura
- Resembrar en placas o tubo con medio inclinado para su
posterior identificacin y pruebas de patogenicidad (si fuera
necesario)
- Se pueden realizar identificaciones directamente en las
placas:
- Macroscpicamente: Caractersticas de la colonia
- Microscpicamente: Caractersticas de las hifas y de las
estructuras de reproduccin
ESQUEMA
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