Hernandez Jesus

Martinez Darsly
Ibarra Stephanie
Matheus Georgia
 Cromatografa
Definicin

Elementos a tomar en cuenta en una cromatografa

Absorbentes
Disolventes
Factor de retencin
Localizacin de las muestras separadas
Mtodos fsicos
Mtodos Qumicos
Muestras Patrones
 Tcnicas Cromatografas
Cromatografa en Capa Fina
Cromatografa Por Afinidad
 Definicin

Tcnica Separacin

Basada

Diferentes Muevan los

velocidades Solutos

Disueltos en un Fase estacionaria

Disolvente Fase Mvil

Eluente
 Definicin
Fase estacionaria Fase mvil

Slida Lquida o gaseosa

Lquido adsorbido Lquida o gaseosa

 Fase estacionaria: slido o lquido fijado a un slido
Fase mvil: fludo (lquido o gas) que arrastra la muestra a travs de
la fase estacionaria

Los distintos componentes de la mezcla interaccionan de

manera diferente con las dos fases establecindose un reparto
entre ambas

Se establece un equilibrio entre partculas adsorbidas y desorbidas

= [molculas adsorbidas]
[mol. adsorbidas] + [mol. desorbidas]
coeficiente de reparto
 Son sustancias solidas; qumicamente inertes que tienen la propiedad de fijar
dbilmente en su superficie, una gran variedad de compuestos; normalmente
representa la fase estacionaria. Entre los absorbentes mas usados tenemos los
siguientes:
1) Gel de Slice
2) Almina
3) Polvo de celulosa
4) Polvo de diatomeas
5) Oxido de Magnesio
6) Oxido de Calcio
7) Carbn Activo
8) Carbonato de Calcio
9) Almidn
Usada
Gel de Slice Compuestos menos polares, o cidos
Usada
Almina Compuestos mas polares, o bsicos
 Los disolventes llamados eluyentes, o medios de elucin; representan la fase
mvil en la cromatografa.
Es de vital importancia para lograr una buena separacin.
La regla general es elegir un disolvente de la misma polaridad de los
compuestos a la mezcla a separar.
Cuanto mas polar es una sustancia, mas fuertemente es absorbida por la fase
estacionaria (absorbentes), y necesitaran disolventes mas polares para ser
separada y desplazada de la superficie del absorbente.
Los disolventes mas utilizados son:
1. Acido actico
Cuando un disolvente no funciona
2. Agua
correctamente se realiza una mezcla de
3. Metanol ellos
4. Etanol
5. N-propanol
6. Acetona
7. Acetato de etilo
8. Benceno
9. ter de petrleo; etc
 Proceso que permite al disolvente moverse a travs del absorbente; se
denomina desarrollo, y el grado de separacin de los compuestos, despus del
desarrollo se llama resolucin. Se denota con la siguiente formula:

RF = Distancia recorrida por la muestra / Distancia recorrida por el disolvente

RF: Es una propiedad constante y caracterstica de la sustancia que depende

tanto del absorbente, disolvente y tcnica de separacin.
 Una vez se ha efectuado la separacin de sustancias cromatografcas, se hace
necesario localizar la posicin de las sustancias. Si las sustancias son
coloreadas no se presenta ningn tipo de dificultad, pero la mayora de las
sustancias son incoloras y por consiguiente, invisibles.
Se realizan mtodos fsicos y qumicos para reconocer las sustancias incoloras.
 Por este mtodo se aprovecha la propiedad de algunos compuestos orgnicos
de absorber la luz ultravioleta, y emitir radiaciones de mayor longitud de onda,
en forma de fluorescencia, es decir, presentan fluorescencia.
 Las sustancias separadas que son incoloras, tambin pueden visualizarse
hacindolas reaccionar con algn reactivo qumico determinado, para formar
compuestos coloreados.
El revelador se puede aplicar sumergiendo el cromatograma en la solucin
reveladora, o pulverizando el cromatograma por medio de un rociador o
colocndolo en una cubeta que contenga cristales de yodo.
 Son sustancias muy puras que sirven para comparar las sustancias separadas
presentes en las muestras cromatografiadas.
Cuando se obtiene el mismo valor de RF, para dos compuestos separados,
usando dos o mas sistemas de solventes, se puede presumir que ambos
compuestos tienen la misma estructura.
 Utiliza una placa inmersa verticalmente

Se debe apoyar la placa sobre un recipiente

Sirve para analizar mezclas de AA, separar molculas pequeas

La muestra se aplica mediante un tubo capilar en forma de banda, punto o

mancha
ELECCION DEL DISOLVENTE:
Depende del componente que se va a separar y del material

Principales disolventes en orden creciente: Eter de petroleo, ciclo

hexanos, benceno, etanol, cloroformo, agua

Hay ciertos factores que influyen en la eleccin del disolvente

 Adsorbente extendido sobre una capa de vidrio

Se preparan las placas, se pueden obtener capas de 0,25 0,50 0,75 y 1

mm

Segn el numero de muestras seleccionamos el tamao de la placa, se

deja en reposo

Activar las placas en una estufa

Aplicar la muestra con un capilar fino

 Preparar las muestras en disolventes volatiles al 0,1%

Desarrollar en cubetas con tapas

Seleccionar el disolvente
-Metanol: Muestras corren junto con el disolvente
-Ciclo hexano: Permanecen en el origen
Disolvente adecuado

Luego que este asciende unos 10cm por la placa y se marca el frente del
disolvente

Reposo, se revela y se calcula el Rf

 Deteccin o visualizacin:
-Mtodos qumicos: Inmersin o rociado
-Mtodos fsicos: Radiacin UV

Ventajas

Aplicacin

Anlisis cualitativo: Comparaciones visuales

Anlisis cuantitativo: Medidas de transmisin

Anlisis semicuantitativo: Dimetro y comparacin visual

 a - distancia recorrida por el analito.
b b - distancia recorrida por el frente
a
x
 Cromatografa de adsorcin slido-lquido.

Sustancia de naturaleza bioqumica denominadas ligandos de afinidad y

retienen a los solutos (analitos).

Las separaciones se basan en el acoplamiento llave-cerradura.

Permite la separacin de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de

unin a un determinado ligando.

Las protenas que se retienen en la columna luego son lavadas o eluidas

mediante una solucin.
Afinidad: Slo es
retenida la molcula
afn a las unidas
covalentemente a la
fase estacionaria.
Se basa en una interaccin biolgica especfica:

Enzima-sustrato

Anticuerpo-antgeno

Enzima-coenzima

Protena-ligando especfico

La elucin se puede lograr agregando el ligando (el que est unido a la columna)
en solucin o mediante cambios en el buffer que sean capaces de debilitar la
interaccin