UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

ESCUELA DE QUMICA Y FARMACIA

ANLISIS INSTRUMENTAL I

INTEGRANTES

Chica Jos
Fuentes Henry
Muoz Andrea
Tomal Rosa
INTRODUCCIN
Considerando que el 99% de la carga corporal del magnesio
es intracelular, la determinacin de magnesio intracelular
puede ser un buen indicador del estado del magnesio en
distintas patologas

Para la determinacin del magnesio en el organismo

humano, generalmente se utiliza la espectrofotometra de
absorcin molecular, sin embargo, la espectrofotometra de
absorcin atmica es una tcnica rpida, con alta exactitud
y precisin que tambin puede ser utilizada.
INTRODUCCIN

Particularmente el contenido de magnesio intracelular

ha sido medido en clulas rojas o eritrocitos, dado que
estas clulas representan el compartimiento subcelular
ms grande de las clulas sanguneas.
INTRODUCCIN
Los parmetros (linealidad, lmite de deteccin, lmite
de cuantificacin, sensibilidad, exactitud, precisin y
estudios de interferencias por adicin estndar) que
servirn como criterios de confianza del mtodo a
utilizar.
INTRODUCCIN
Para asegurar la confiabilidad de los resultados, los
mtodos analticos deben someterse a un proceso de
validacin. Segn la norma ISO/IEC: 17025.

Este mtodo podr aplicarse una vez validado para la

determinacin de este analito en muestras de
pacientes con distintas patologas.
 Parte experimental
Materiales y reactivos: se utilizaron los siguientes
reactivos, todos de grado analtico: cloruro de sodio cido
clorhdrico, cido tricloroactico anhdrido, sulfato de
magnesio hexahidratado, cloruro de lantano (Sigma),
solucin salina al 0,9 %.
Para la preparacin de todas las soluciones se utiliz agua
desmineralizada y desionizada con una resistividad
especfica de 18 cm.
El material de vidrio de uso comn en el laboratorio fue
previamente lavado con agua y detergente y luego se
enjuag con cido ntrico al 10% y con agua desionizada.
Equipos: espectrofotmetro de absorcin atmica con
atomizacin en llama Perkin Elmer. Se utiliz una lmpara
de ctodo hueco monoelemental de Mg.
 Tratamiento de las muestras: se realiz basndose en el
mtodo propuesto por Prasad y colaboradores, para
determinar concentraciones de cinc eritrocitario:
Utilizando tubos al vaco heparinizados.
Bsicamente la modificacin del mtodo de Prasad y
colaboradores se encuentra en que aqu los eritrocitos se
lavan tres veces y principalmente en que en el tratamiento
de la muestra solo se realiza una fase de desproteinizacin a
diferencia de Prasad y colaboradores que realizaron este
proceso en tres fases, recogiendo tres filtrados, ya que se
comprob que se obtienen los mismos resultados al
realizar una sola fase de desproteinizacin y utilizar este
solo filtrado o recogiendo tres filtrados como lo hizo
Prasad. La modificacin realizada ahorra tiempo y
reactivos.
 Determinacin analtica: las determinaciones de
magnesio se realizaron de acuerdo con las condiciones
estndares y el procedimiento sealado en el manual
del espectrofotmetro de absorcin atmica Perkin
Elmer 311016. Para ello se utiliz 1 mL del sobrenadante
y se hizo una dilucin 1:50 con cloruro de lantano al
0,1%.
 RESULTADOS
Determinacin de las caractersticas de desempeo del
mtodo.

Para determinar el intervalo de

concentraciones en que el sistema
cumple la ley de Beer, o el intervalo Se utiliz como solvente solucin de
ptimo de concentraciones, se procedi cloruro de lantano al 0,1%. Se prepar
primero a construir la curva de Ringbom. tambin una solucin blanco con
Para ello se prepararon una serie de cloruro de lantano al 0,1% ms los
soluciones patrones acuosos con reactivos presentes en la muestra a
concentraciones de magnesio analizar, de acuerdo con el tratamiento
comprendidas entre 0,5 mg/dL y 3,5 de la misma.
mg/dL. Estos patrones se calcularon y
prepararon de manera que sus
concentraciones fueran equivalentes a
esas mismas concentraciones en los
glbulos rojos sanguneos.
 De acuerdo con la Australian Pesticides and
Vetherinary Medicines Authority (APVMA),
la linealidad debe ser establecida mediante
una inspeccin visual y debe observarse que
el comportamiento de la respuesta analtica
est en funcin de la concentracin del
analito. Por lo tanto, al evaluar la curva de
Ringbom se puede observar que el
comportamiento lineal se limita hasta una
concentracin de aproximadamente 1,30
mg/dL.

La curva de calibracin mediante

un anlisis de regresin por el
mtodo de los mnimos cuadrados
y se determinaron las
caractersticas de desempeo del
mtodo en estudio. En la Figura 2
se muestra la curva ajustada para la
determinacin de magnesio en
glbulos rojos por espectroscopia
de absorcin atmica con llama.
Mediante la prueba de linealidad se calcul
el coeficiente de variacin (C.V.) total de los
factores de respuesta (1,67 %), el cual fue
inferior al 5% establecido como lmite
indicativo de linealidad, lo que indica que la
pendiente es distinta de cero y demuestra la
adecuada linealidad en el intervalo de
trabajo estudiado. Estos datos se muestran
en la Tabla 1

Lmite de Deteccin y Lmite de Cuantificacin:

Para la determinacin del lmite de
deteccin se sigui la definicin de la
Unin Internacional de Qumica Pura y
Aplicada20 (IUPAC) adoptada en 1975, la
cual establece que el lmite de deteccin
expresado como una concentracin (CL),
o cantidad, (qL) se deriva de la medida
ms pequea, (YL), que puede detectarse
con razonable certeza para
procedimiento analtico dado.
Para la determinacin del lmite de
deteccin y del lmite de cuantificacin se
prepararon diez muestras blanco, tal como
se explic anteriormente, con cloruro de
lantano al 0,1% .
Estas determinaciones se hicieron
espaciadamente en el tiempo de
realizacin de la investigacin,
obtenindose los resultados siguientes:
un DSB = 0,001 m = 0,24 LOD = 0,0125
mg/mL LOQ = 0,0416 mg/mL
 Exactitud y precisin:
Para estas determinaciones se tomaron en
consideracin los criterios y definiciones
establecidos en normas internacionales y
nacionales tales como el Vocabulario
Internacional de Trminos Bsicos y
Generales en Metrologa (VIM), (norma
venezolana COVENIN 2552:1999)
La exactitud se expresa como el
porcentaje de recuperacin en un
mtodo analtico de una cantidad
conocida del analito o como la diferencia
entre el valor medio obtenido en la
valoracin y el valor aceptado como real.

Una vez conocido el contenido

promedio de magnesio en la muestra
real, se procedi a enriquecer la
muestra, por triplicado, con el analito
de inters a diversas concentraciones
empleando para ello soluciones
patrones de concentraciones iguales
a 0,050 mg/dL, 0,100 mg/dL y 0,150
mg/dL.
 La recuperacin media alcanzada (100,78 %) indica que el mtodo
propuesto muestra la exactitud necesaria para considerarlo adecuado para
las determinaciones de magnesio en eritrocitos. Para el estudio de la
repetibilidad (precisin intradiaria), tal como se seal anteriormente, el
anlisis se realiz utilizando los resultados obtenidos para el estudio de la
exactitud, y como se puede observar en la Tabla 2, se obtuvo un coeficiente
de variacin de 1,7% el cual se encuentra por debajo del 2%.

Los resultados de la repetibilidad

se muestran en la Tabla 3 y los
resultados obtenidos para la
precisin intermedia se
muestran en la Tabla 4. El
coeficiente de variacin total
calculado es de 0,53%, inferior al
valor de 1% aceptable segn la
ICH.
El coeficiente de variacin total
calculado es de 1,45 %, inferior al
valor de 2% aceptable segn la ICH.
Los resultados obtenidos para la
repetibilidad en los dos ensayos
realizados y para la precisin
intermedia demuestran que el
mtodo cumple con las
especificaciones y puede ser
aplicado con seguridad y eficiencia.
Para completar la validacin del mtodo se
realiz otro ensayo para verificar la robustez
del mtodo, para ello se llev a cabo una
prueba entre das por un analista distinto. Se
prepararon por triplicado soluciones con las
concentraciones de 0,075 mg/dL, 0,125
mg/dL y 0,175 mg/dL y se leyeron a 285,2 nm
en el espectrofotmetro de absorcin
atmica por otro analista y en distintos das.
Los resultados se muestran en la Tabla 5.
Estudio de Interferencias
Las pruebas de
recuperacin permiten
determinar si existen o no
interferencias por parte de
la matriz, se usan para
medir errores sistemticos
debidos a sustancias
distintas del analito.
Los resultados obtenidos permitieron observar que
no existen diferencias significativas entre las
pendientes, ya que la t-Student calculada es menor
que la t-Student crtica, a un nivel de confianza del
95%, tal como se observa en la Tabla 6. Esto indica
que no existen interferencias causadas por la
matriz en la determinacin de magnesio
eritrocitario por espectrofotometra de absorcin
atmica en llama.
 Determinacin de magnesio en muestras
reales.
El mtodo antes validado se aplic para la
determinacin de magnesio en muestras de
glbulos rojos provenientes de pacientes:
estudiantes de la Facultad Facultad de
Farmacia y Bioanlisis de la Universidad de
Los Andes de Mrida, Venezuela, con
edades comprendidas entre 20 y 40 aos de
edad, aparentemente sanos, a quienes se les
investig mediante cuestionario si haban
padecido o padecan de patologas tales
como diabetes, enfermedades tiroideas,
hepticas, gstricas, artritis, osteoporosis, y
alteraciones menstruales en las pacientes
femeninas, el estilo de vida, la
alimentacin, y la ingestin de
medicamentos o de anticonceptivos.
Los resultados obtenidos se expresan en
miligramos de magnesio por decilitro de
eritrocitos (mg(dL). Estos resultados
arrojaron un valor promedio de
magnesio correspondiente a 5,17 0,02
mg/dL, el valor mnimo encontrado
corresponde a 4,2 mg/dL y el valor
mximo encontrado en este grupo de
pacientes fue de 6,65 mg/dL. Estos
valores se encuentran dentro de los
valores de referencia (4-6,44 mg/dL)
establecidos para la determinacin de
magnesio en glbulos rojos por la
tcnica de espectrofotometra de
absorcin molecular utilizando el
mtodo de la calmagita
CONCLUSIONES
En el proceso de validacin se estimaron los valores
para los parmetros que determinan el rendimiento
del mtodo como son: linealidad, lmite de deteccin,
lmite de cuantificacin, exactitud y precisin.
CONCLUSIONES
Se demostr que el mtodo validado cumple con los
niveles de aceptacin establecidos por las normas
nacionales e internacionales relacionadas con la
calidad en el laboratorio, y aseguran que el mtodo es
adecuado para ser aplicado en el anlisis de magnesio
eritrocitario en pacientes con diferentes patologas