ENZIMOLOGIA

BASICA
UPAO MEDICINA
2017
Mblgo. Dr. ENRIQUE MARTIN ALVA
 PROPIEDADES
Modelo llave-cerradura
MODO DE ACCION
ASPECTOS Ajuste inducido
GENERALES
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

NOMENCLATURA
Clase 1 : Oxidoreductasas
Clase 2 : Trasnferasas
Clase 3 : Hidrolasas
ENZIMAS CLASIFICACION Clase 4 : Liasas
Clase 5 : Isomerasas
Clase 6 : Ligasas

Conceptos bsicos de Cinetica Quimica

CINETICA
ENZIMATICA Cintica Enzimtica
Modelo Cintico de Michaelis-Mentin
Calculo del KM y de la Vmax de una enzima
Actividad Enzimatica
 ASPECTOS GENERALES

Los enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas

en los seres vivos.
sin consumirse en una reaccin, aumentan notablemente su
velocidad en condiciones fisiolgicas
 ASPECTOS GENERALES

Son catalizadores especficos: un solo tipo de reaccin, y casi siempre un nico sustrato o un grupo muy reducido
de ellos. En una reaccin catalizada por un enzima:
Sitio de unin + sitio catalitico

Distintos grados de especificidad. La sacarasa es muy especfica para sacarosa , pero maltosa y la isomaltosa
son sustratos anlogos.. Entre los enzimas poco especficos estn las proteasas digestivas como la
quimotripsina, que rompe los enlaces amida de protenas y pptidos de muy diverso tipo.
 PROPIEDA
DES
Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser protenas y
de actuar como catalizadores.

Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable que

las dems conformaciones posibles. As, cambios en la conformacin
suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica.

Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad

de un enzima son: Ph , temperatura, cofactores
 pH
Los enzimas poseen grupos ionizables (carboxilos -COOH;
amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en sus aa. Segn el pH del
medio, estos grupos pueden tener carga elctrica +, - o neutra.
Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de
sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin
ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el
llamado pH ptimo

AMORTIGUADORES FISIOLOGICOS
 TEMPERAT
Por cada 10C de incremento, URA
la V.R. se duplica. Sin
embargo, al ser protenas, a V.R
partir de cierta T, se
empiezan a desnaturalizar por
el calor.
La temperatura a la cual la
actividad cataltica es mxima
se llama temperatura ptima
T
DESNATURALIZACION Y PERDIDA
ACTIVIDAD CATALITICA
 EFECTO DE LOS
COFACTORES
sustancias no proteicas que colaboran en la apoenzima + grupo prosttico= holoenzima
catlisis: los cofactores. iones inorgnicos como el
Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc.. Cuando el cofactor es
una molcula orgnica se llama coenzima..

Cuando los cofactores y las coenzimas se

encuentran unidos covalentemente al enzima se
llaman grupos prostticos.

La forma catalticamente activa del enzima se

llama holoenzima.
La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se
llama apoenzima, de forma que:
 MODO DE ACCION
Gibbs (DG<0).

Perfil energtico de una reaccin espontanea Perfil energtico de una reaccin catalizada
La accin de los catalizadores
consiste, precisamente, en
disminuir la Ea

Los reactantes deben chocar con una energa y una orientacin adecuadas. La actuacin del enzima PERMITE :
(1) los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca y

(2) modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la
formacin de otros nuevo
 El centro activo adopta la conformacin idnea slo en
Supone que la estructura del sustrato y la del centro
presencia del sustrato. La unin del sustrato al centro activo
activo son complementarias, vlido en muchos casos,
del enzima desencadena un cambio conformacional que da
pero no es siempre correcto.
lugar a la formacin del producto.

MODELO LLAVE CERRADURA MODELO AJUSTE INDUCIDO

 BIOENERGT
ICA

TEMA 15
14
 TRABAJO Y ENERGA BIOLGICOS
Los seres vivos captan ENERGA de diversas fuentes
Utilizan la energa para desarrollar TRABAJO BIOLGICO
Los organismos realizan gran cantidad de transformaciones de energa
Convierten la energa qumica (ATP) de los combustibles en:
Calor, energa mecnica, energa elctrica, otras fuentes de energa qumica

NUTRIENTES DEL ENTORNO.....quimiosintticos

ENERGA
LUZ SOLAR ...................................fotosintticos

Transformaciones qumicas en el interior de

las clulas

TRABAJO BIOLGICO:
TRANSDUCCIONES Biosntesis (anabolismo)
DE ENERGA Trabajo mecnico (contraccin muscular)
Gradientes osmticos (transporte contra
gradiente)
Trabajo elctrico (transmisin del impulso
nervioso) etc.

PRODUCTOS FINALES DEL METABOLISMO

AUMENTO DE (molculas simples CO2, H2O)
ENTROPA
TEMA 15 CALOR 15
 PRINCIPIOS BSICOS DE BIOENERGTICA

Bioenergtica: Rama de la bioqumica que estudia la

transferencia y utilizacin de energa en los sistemas biolgicos.
Comprende el estudio cuantitativo de los cambios de energa de
las reacciones bioqumicas.
Aplica los principios bsicos de la termodinmica a los
sistemas biolgicos.

Sistema: se denomina sistema termodinmico a aquella parte

del universo que se est observando. El entorno es el resto del
universo. El sistema y su entorno constituyen el universo.
Las clulas vivas y los organismos son sistemas abiertos
que intercambian materia y energa con el entorno

ENTORNO SISTEMA UNIVERSO

TEMA 15
16
 Estado de un sistema: forma de comportarse el sistema en un
instante dado.
Cuando se produce una variacin en el estado de un sistema, se
dice que este ha sufrido una transformacin, un proceso en el
que existe un estado inicial y un estado final. El incremento ()
es la diferencia entre el valor de una variable en el estado inicial
y
en el estado final.
Ej.: Transformacin de un gas
Estado inicial Estado final
V1, P1 V2, P2

Cambios: V =V2-V1 P =P2-P1

Funciones de estado: aquellas funciones termodinmicas cuyo

valor depende slo del estado del sistema. Si en un sistema se
produce una transformacin, la variacin de las funciones de
estado depende nicamente del estado inicial y del estado final,
y no del camino por el que se realiza la transformacin.

Volmen V, Presin P, Entalpa H, Energa libre G, etc.

TEMA 15
17
 1er PRINCIPIO: conservacin de la energa

La energa ni se crea ni se destruye, solo se transforma de una forma a otra

Ej: los animales convierten la E qumica (ATP) en
- calor (mantenimiento T)
-Trabajo(E mecnica, E elctrica, otras formas de E qumica)
En todas estas conversiones de E, esta no se crea ni se destruye.

H = ENTALPA (contenido calrico del sistema) (J/mol)

H = calor que se libera o se absorbe durante una reaccin
H (-).... EXOTERMICA (libera calor)
H (+) .... ENDOTERMICA (absorbe calor)

2 PRINCIPIO: analiza la direccin de los procesos favorables o espontneos

"en todo proceso el desorden total del universo aumenta

S = entropa (medida cuantitativa del desorden) (J/mol K)
( Ssistema + Sentorno ) > 0 = proceso espontneo

Entropa= la energa de un sistema que no puede utilizarse para realizar

un trabajo til
TEMA 15
18
 ENERGA LIBRE O ENERGA DE GIBBS (G)

- La energa libre (G) es la parte de energa de un sistema

capaz de hacer trabajo biolgico.

Las reacciones espontneas van en la direccin

de ms baja energa libre
G (-), EXERGNICA, favorable o
espontnea
G (+), ENDERGNICA, no espontnea.
G=0, equilibrio

TEMA 15
19

Procesos exergnicos Procesos endergnicos

 G = H - T S
(relaciona los dos
principios)

G = variacin de la E libre
H = variacin de la
entalpa (cambio calorfico)
T = T absoluta
S= variacin de la
entropa (grado de orden)

Koolman, Rohm. Bioqumica Texto y

TEMA 15
Atlas Panamericana 2003 20
 REGULACION DE LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA
Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su
actividad puede estar modulada por:
cambios en el pH
cambios en la temperatura
presencia de cofactores
las concentraciones del sustrato y de los productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por proteolisis
isoenzimas
 EFECTO DE LAS
CONCENTRACIONES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
La velocidad de una reaccin enzimtica
depende de la concentracin de sustrato.

Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que

la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido (Figura
inferior).
 EFECTO DE LOS INHIBIDORES

Ocupan temporalmente el centro activo por Alteran la conformacin espacial de la enzima,

semejanza estructural con el sustrato original impidiendo su unin al sustrato
INHIBIDOR COMPETITIVO INHIBIDOR NO COMPETITIVO
 MODULACION ALOSTERICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles

Sustancias tienden a estabilizar la forma R. Sustancias que favorecen la forma T y

Son los moduladores positivos. El sustrato disminuyen la actividad enzimtica
es a menudo un modulador positivo son los moduladores negativos

Favorecen la forma R pero que actan sobre una

Actan en lugares distintos del centro
regin distinta del centro activo
activo del enzima se llaman
ACTIVADOR ALOSTERICO : favorece la unin
INHIBIDOR ALOSTERICO : Impide la unin
del sustrato
del sustrato
 MODIFICACION COVALENTE
Pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose
covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el
AMP o Viceversa
VIA SINTETICA VIA DEGRADATIVA

ELEMENTOS DE LA REACCION Enzima no fosforilada es INACTIVA Enzima fosforilada es ACTIVA

 ACTIVACION PROTEOLITICA
Algunos enzimas sintetizan sin actividad enzimtica y se llaman proenzimas o zimgenos. Para activarse, los
zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la
molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades del enzima activo

Secretan en forma de zimgenos y en el tubo digestivo se

convierten en la forma activa. Es el caso de la a-quimotripsina,
que se sintetiza en forma de quimotripsingeno

Sintetisadas en forma activa destruiran la propia clula que

las produce. ((pancreatitis aguda), a menudo mortal)
Tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como
tripsingeno (inactivo).
 REGULACION POR ISOENZIMAS
ISOENZIMAS = distinta estructura molecular aunque su funcin biolgica es
similar.
Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus
propiedades, y se adaptan a la funcin que debe realizar. Por Ejemplo

el tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isozimas

distintos en msculo y corazn.
el compartimento celular donde acta: Por ejemplo, la malato deshidrogenasa
del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
el momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos enzimas
de la glicolisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el adulto.
 NOMENCLATURA
NOMBRE SISTEMICO
Consta de 3 partes:
el sustrato preferente
el tipo de reaccin realizado
terminacin "asa"
G-6-Pasa isomeriz. G-6-P en F-6-P
Cuando la accin tpica del enzima es la
hidrlisis el segundo componente del
nombre se omite y por ejemplo, la lactosa
hidrolasa se llama simplemente lactasa.
EXEPCIONES : GLUCOQUINASA
CODIGO DE LA COMISION ENZIMATICA
cdigo numrico, encabezado por las
letras EC (enzyme commission), seguidas
de cuatro nmeros separados por puntos.
clases ,subclases,3 y 4 los grupos
qumicos especficos que intervienen
As, la ATP:glucosa fosfotransferasa
(glucoquinasa) se define como
EC 2.7.1.2. 2 transferasa, 7
fosfotransferasa, el 1 aceptor es un grupo
OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la
D-glucosa el que acepta el grupo fosfato.
 CLASIFICACION ( accin
cataltica)
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS

Clase 2: TRANSFERASAS

Clase 3: HIDROLASAS

Clase 4: LIASAS

Clase 5: ISOMERASAS

Clase 6: LIGASAS
 1.- OXIDOREDUCTASAS

Transferencia de hidrgeno (H) o electrones (e-) de

un sustrato a otro, segn la reaccin general:

AH2 + B A + BH2

Ared + Box Aox + Bred

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o

la citocromo c oxidasa.
 2.-TRANSFERASAS

Transferencia de un grupo qumico (distinto del

hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin :

A-B + C A + C-B

glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

Glucoquinasa
 3.-HIDROLASAS 4.- LIASAS
5.- LIGASAS
5.- LIGASAS
3.-HIDROLASAS 4.- LIASAS Unin de 2 sustratos con hidrlisis
simultnea de un nucletido trifosfato
Catalizan las reacciones de Ruptura o soldadura de sustratos (ATP, GTP, etc.):
hidrlisis
A+B A + B + XTP A-B + XDP + Pi
A-B + H2O AH + B-OH A-B

lactosa + agua glucosa + galactosaAcido acetactico CO2 + acetona

Lactasa descarboxilasa
Lactasa
 ISOMERASAS

interconversin de ismeros: A B

fosfotriosa isomerasa Fosfoglucosa isomerasa

gliceraldehdo-3-fosfato dihidroxiacetona-fosfato glucosa-6-fosfato fructosa-6-fosfato
 CINETICA ENZIMATICA
A continuacin, se describirn los siguientes conceptos:
Cintica enzimtica

Modelo cintico de Michaelis-Menten

Clculo de la KM y la Vmax de un enzima

Actividad enzimtica
 CINETICA ENZIMATICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas en las condiciones ptimas , alcanzando la (Vmax).

La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los

productos o la desaparicin de los reactivos.

curva de avance de la reaccin

Medir la velocidad inicial de la reaccin (v0). = igual a la pendiente de la curva de

avance a tiempo cero

considerarse la [S] como esencialmente constante

Efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la
reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante.

Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la

concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden.

A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no

depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es
mxima (Vmax).
 MODELO CINTICO DE
MICHAELIS-MENTEN

A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v =

(k3 [ET]/KM) [S]. : v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un
proceso cintico de primer orden.

A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3

[ET]. La velocidad de reaccin es independiente de la
concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un
proceso cintico de orden cero.
CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax
DE UN ENZIMA
La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva
experimental,
KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la
velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

Representacin de Lineweaver-Burk
Es una recta en la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede
calcular grficamente, los valores de KM y Vmax de un enzima
para diversos sustratos.
 ACTIVIDAD ENZIMTICA

Unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la

conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. (U/mg prot) o por mililitro de
disolucin (U/ml).

(SI) Katal (kat) cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por
segundo.= 60 x 106 U. microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de reacciones

elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de
tiempo.