METODOS DE AISLAMIENTO

Y PURIFICACION DE
PROTEINAS
 AISLAMIENTO DE PROTEINAS

Es un mtodo de segregacin de un nico tipo de protena

a partir de un grupo de protenas que se encuentran en una
mezcla.

Este proceso es importante en el estudio de la funcin de

la protena, as como su estructura individual y cmo
interacta con otros nutrientes en el cuerpo.

Tamao
fsico-qumica
afinidad
EXTRACCION
El tejido se divide en una solucin para obtener la protena

El tejido se somete a procedimientos tales como:

ciclos de congelacin
Sonicacin
Disolventes orgnicos
Homogeneizacin
filtracin o permeabilizacin

Solubles No solubles

Separacin de las membranas EXTRACCION ADN

celulares
Precipitacin y solubilizacin diferencial

Precipitacin con sulfato de amonio

Se aade al tejido este compuesto de manera

creciente

Se recogen las diferentes fracciones de la

protena precipitada.
 Ultra centrifugacin
Utiliza la fuerza centrfuga por medio de un dispositivo de
ultracentrfuga para separar partculas de diferentes masas de
una mezcla dada.

Las partculas presentes en la mezcla se mueven hacia

afuera de acuerdo con su masa, , con las protenas menos
densas girando ms lentamente que las ms densas.

Las protenas se segregan en funcin de su

densidad.
 PURIFICACIN
Se realiza mediante la eliminacin de contaminantes por pasos

Adicin gradual de una solucin saturada

Preparacin impura de sulfato de amonio al extracto crudo de
la protena.

Mientras la sal se va Se ve un aumento en la precipitacin de

agregando protenas contaminantes y el precipitado
se puede desechar.

La protena buscada se separa de la

solucin.
 CROMATOGRAFIA
Es la tcnica para separar componentes de una mezcla, y su posterior
anlisis, basada en que las distintas sustancias que forman los
componentes de una mezcla se dejan arrastrar a diferentes velocidades
sobre un soporte.
El soporte puede ser papel, un gas, otro lquido, etc.

FASES CROMATOGRAFIA

Fase mvil
Fase estacionaria
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
El mtodo utilizado para la separacin, a la vez que para la purificacin,
de diferentes compuestos orgnicos que se encuentren en estado slido
o lquido.

la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en

el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave
para controlar el paso de sustancias al exterior de la columna.

La fase estacionaria se impregna con el eluyente o

fase mvil.

Seguidamente la mezcla orgnica que nos interesa separar la

depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y as la fase
mvil podr ir atravesando el sistema.
 CROMATOGRAFIA EN PAPEL

Es un proceso donde el absorbente lo constituye un papel de filtro, una

vez recorrido el disolvente se retira el papel y se deja secar.
 CROMATOGRAFIA CAPA FINA
Tcnica utilizada para separar los componentes puros de
una mezcla, de acuerdo con su polaridad.

Capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa que puede ser de vidrio,
aluminio u otro soporte, sobre la cual corren las sustancias a separar por medio de un
solvente (fase mvil). La fase mvil es liquida y la estacionaria solida y polar (slica gel)

El eluyente generalmente es menos polar que la fase

estacionaria (slica gel) por tanto, entre mas rpido se
desplace un componente ser menos polar.