Facultad de Ingenieria en Industrias Alimentarias

Departamento de Ciencia, Tecnologa e Ingeniera

Biotecnologa de Alimentos

Cintica Microbiana

Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez

pedro.pelaez@unas.edu.pe
http://pedro-pelaez.blogspot.pe/
2016
 Mtodos para avaliao de crescimento de
microrganismos

Fisiologia do microrganismo!

Mtodos Diretos
Determinao da concentrao celular

Contagem no microscpio;
Contagens com cultura;
Contagem eletrnica.
No se aplicam a m.o.
filamentosos

2
1. CONTAGEM DIRETA
AO MICROSCPIO

3
Figura 1: Contagem em Cmara de Neubauer

4
CONTAGEM DIRETA
AO MICROSCPIO

CMARA DE NEUBAUER

Ao microscpio aumento de 400X

5
Ao microscpio aumento de 100X
6
Colorao com azul de metileno para evidenciar clulas viveis de leveduras
clulas azuis esto mortas; clulas sem colorao so clulas vivas
7
2. CONTAGEM EM PLACA
E DILUIES
SERIADAS

8
Figura 2: Contagem de Clulas Viveis em placas

9
METODOLOGIA
UTILIZADA PARA A
CONTAGEM DE COLNIAS
EM PLACA

POUR-PLATE 10
ESPALHAMENTO EM PLACA
3. DETERMINAO DE CRESCIMENTO MICROBIANO POR
TURBIDIMETRIA

11
 Fuente Filtro o Muestra Detector Lectura de los
de luz Prisma conteniendo sensble resultados
400 800 nm Monocromatico clulas a la luz en absorbancia
microbianas o transmitancia
Em el
espectrofotmetro

DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO POR

TURBIDIMETRIA
12
CURVA-STANDART PARA EL CLCULO DE CRECIMIENTO
MICROBIANO POR TURBIDIMETRIA
13
 Determinao da biomassa microbiana

Matria seca;
Medidas ticas.

Figura 4: Separao de clulas por filtrao

14
15

A membrana filtrante foi colocada sobre o
meio de cultura e a placa foi incubada.
Clulas bacterianas na superfcie da membrana (poros)

CONTAGE DE BACTRIAS POR EL MTODO DE FILTRACION16

MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL PARA ESTIMATIVA DE CRESCIMENTO
17
 Mtodos Indiretos

Constituintes celulares (ATP, DNA, NADH);

Dosagem de elementos do meio de cultura (substrato, consumo de
O2, propriedades reolgicas do meio de cultura, entre outros.

18
 Processo Fermentativo

Microrganismo Nutrientes

Preparo do meio
Preparo do
inculo
Esterilizao do meio

Fermentador Controles

Produto
Esterilizao do ar Recuperao do
Ar
produto Resduo

Tratamento de
efluente

Figura 5: Etapas de um processo fermentativo 19

 Obteno de uma curva de crescimento para um M.O.

Figura 6: Processo para obteno de uma curva de crescimento

20
Concentrao (g/L)
Biomassa

Produto

Substrato

Tempo de Cultivo (h)

Figura 8: Curvas de biomassa, substrato e produto

21
 Crecimiento
Se define como un incremento ordenado de los principales
constituyentes de un organismo.
Involucra sntesis de estructuras celulares, cidos
nucleicos, protenas y otros componentes celulares a partir
de nutrientes.
Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan
productos de desecho.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Fases de crecimiento.
Fase lag
Es un perodo de adaptacin, cuando un cultivo de m.o. es
llevado de un ambiente a otro.
Los m.o. sufren una reorganizacin tanto en su velocidad de
crecimiento como en sus constituyentes macromoleculares.
Durante esta etapa la masa celular puede cambiar sin cambiar
el nmero de clulas.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Fases de crecimiento.
Fase log exponencial
Es un perodo de balance o de estado estacionario en el
crecimiento, durante el cual la velocidad especfica de
crecimiento es constante.
La composicin qumica del medio de cultivo esta cambiando
debido a que los nutrientes se estn consumiendo y
productos metablicos son producidos.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Fases de crecimiento.
Fase estacionaria
Los nutrientes se agotan y productos txicos se acumulan,
crecimiento es ms despacio con un nmero de clulas
constante.
La masa total puede permanecer constante pero el nmero de
clulas puede descender.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Fases de crecimiento.
Fase de decaimiento o muerte
Un gran nmero de clulas muere. Los nutrientes se agotan y
productos txicos se acumulan.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Crecimiento...
Bajo condiciones exponenciales se describe:
dX/dt=mX.. (1)
dN/dt=mn N.. (2)
donde:
X Concentracin de m.o. en g/l
N Concentracin de m.o. en clulas/l
t Tiempo
m Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (masa)
mn Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (nmero)

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Crecimiento...
dX/x=mdt
Xt=X0emt.(3)
Xt es la concentracin de m.o. en g/l en tiempo (t)
X0 es la concentracin inicial de m.o. en g/l
e es la base de logaritmo natural

Si la velocidad especfica de crecimiento es constante

lnXt=lnX0+ mt .. (4)

La ec. 4 puede ser resuelta para el caso en el cual Dt=td, el tiempo

requerido para X2=2X1
td=ln2/m=0.693/m....(5)

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
La velocidad especfica de crecimiento es obtenida a
partir de la pendiente de una grfica de lnX vs tiempo

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Tiempo de generacin o duplicacin

Las bacterias generalmente se reproducen por fisin

binaria.
En este proceso una clula crece progresivamente para
posteriormente dividirse en dos clulas iguales.
El tiempo requerido para que la clula se divide (o para
que la poblacin de un organismo se duplique en nmero)
se conoce como tiempo de generacin o duplicacin.

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Ejemplo de crecimiento exponencial
a n
Tiempo Nmero de 2 Poblacin Log10Nt
n
divisiones (N02 )
0
0 0 2 =1 1 0.000
1
20 1 2 =2 2 0.301
2
40 2 2 =4 4 0.602
3
60 3 2 =8 8 0.903
4
80 4 2 =16 16 1.204
5
100 5 2 =32 32 1.505
6
120 6 2 =64 64 1.806
a
El cultivo hipottico comienza con una clula con un tiempo de
generacin de 20 minutos
Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
Ejemplo de cintica de crecimiento con diferentes concentraciones
de sustrato (glucosa) de Aspergillus niger
Larralde-Corona et al., (1997)

2)
20 120 gL-1

-1
16 70 gL
Biomass dryweight, X(mg/cm

12 300 gL-1
-1
8 40 gL

4 -1
10 gL

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Time (h)
 Ecuacin de Monod
Describe la velocidad de crecimiento en relacin a la concentracin
de nutrientes.
m =mmax [S/Ks+S]
donde:
m Velocidad especfica de crecimiento
mmax Velocidad mxima especfica de crecimiento
S Concentracin de sustrato
Ks Constante de afinidad del m.o. al sustrato

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
Velocidad especfica de crecimiento
mmax

0.5mmax

Ks
Concentracin de Sustrato
Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa
 Rendimiento celular
Expresa la masa celular obtenida o cantidad de producto por unidad
de masa o sustrato consumido
Yx/s = DX/DS,
Yp/s= DP/DS,

Keiko Shirai:
UAM-Iztapalapa