Anlisis hormonales

en Reproduccin
Sistemas de separacin
Se utilizan con la finalidad de separar molculas
para poder ser cuantificadas.

Los que actualmente se utilizan en anlisis

hormonales son:

Electroforesis.
Cromatografa.
Electroforesis

Es una tcnica de
separacin que puede ser
utilizada con fines analticos
y fue introducida por el
sueco Arne Tiselius.

Inters: protenas sricas.

Premio Nobel de Qumica

en 1948.
 Los mtodos electroforticos son de alta sensibilidad,
eficacia, poder de resolucin y versatilidad.

Mtodo de separacin de:

Enzimas.
Hormonas.
cidos nucleicos.

Permite determinar:
Peso molecular.
Punto isoelctrico.
Distinguir molcular por su carga neta o por su forma.
 Componentes:

Fuente de alimentacin.
Dos electrodos:
nodo (+)
Ctodo (-)
Cubeta.
Tapn de electroforesis.
Soporte electrofortico.
 DIFUSION.
Gradientes de concentracin.
Energa cintica propia.
Aumento de la temperatura.

MIGRACIN.
Fuerza externa: campo elctrico.

FLUJO TRMICO.
Corriente elctrica: calor.

FRICCIN.
Choque de molculas.
Resistencia.
 APLICACIONES:

Principal: caracterizacin y anlisis cuantitativo

de molculas biolgicas (protenas, pptidos,
aminocidos)

Separacin de insulina, histonas, fibringeno,

lipoprotenas, enzimas, hormonas.

Secuencias de ADN.
Analisis de cromatografia

Mikhail, botnico ruso, en 1910, formaliz

el uso de esta tcnica: separacin de
pigmentos de plantas.

Primer paciente que recibi penicilina

falleci (1941): alta cantidad de
impurezas.

Ernst Chain, qumico alemn purific la

penicilina.

Chain, Fleming y Florey compartieron el

Premio Nobel de Medicina en 1945.
 La cromatografa (escribir
en colores)es una tcnica
que permite la separacin
de los componentes de una
mezcla debido a la
influencia de dos efectos
contrapuestos:

Retencin: efecto producido

sobre los componentes de la
mezcla, puede ser slido o
lquido anclado a una base
slida: fase estacionaria.
 Desplazamiento: efecto ejercido sobre los
componentes de la mezcla por una fase mvil,
que puede ser un lquido o un gas.

www4.ujaen.es/~esiles/cromatogrpregt2.pdf
TIPOS DE CROMATOGRAFA:

Absorcin.

Particin.

Intercambio inico.

Exclusin molecular.

Afinidad.

Gas.
 CROMATOGRAFA DE ABSORCIN

La fase estacionaria es un slido, ya no se

usa en la clnica.
CROMATOGRAFA DE
PARTICIN.
Basada en las diferencias en
la solubilidad de los
componentes de la mezcla.
La fase estacionaria es un
slido, y la mvil es un
lquido.

Mezclas de aminocidos.

Capa fina
CROMATOGRAFA DE
INTERCAMBIO INICO
La fase estacionaria es
un slido, el cual lleva
grupos con carga.

Aminocidos,
separacin de HB,
isoenzimas y esteroides.
CROMATOGRAFA POR EXCLUSIN
MOLECULAR.
Por tamao molecular.

Se utiliza para la purificacin de hormonas.

ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/2011-1-35_Manual.pdf
CROMATOGRAFA POR AFINIDAD.
Interaciones especficas entre dos molculas.

Uniones enzima-sustrato, hormona-receptor,

antgeno-anticuerpo.
 CROMATOGRAFA LQUIDA
DE ALTA PRESIN.
La fase estacionaria se deposita
en una columna con un sistema
inyector de la muestra y un
impulsor de la fase mvil.

Es el ms empleado en mezclas
orgnicas.
 CROMATOGRAFA DE GAS.
Es una tcnica que permite la separacin de los
componentes de una mezcla; la fase mvil es un
gas y la estacionari un slido o un lquido.

Ya no se utiliza: purificacin extensa y proceso

individual.

www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm
Sistemas de analisis
homogeneos
Son aqullos que no requieren la separacin del
complejo unido Ac-Ag libre.

Se han utilizado en la medicin de pequeos

analitos como sustancias de abuso y
teraputicas.

www.alergomed.org/uploads/1/0/0/2/10021998/lectura_prctica_-_inmunoensayos_1.pdf
Analisis de receptor

Las alteraciones en los receptores

causan trastornos endcrinos.
El receptor es tan importante como la
hormona.
Receptores de estrgeno y
progesterona en tejido tumoral,
femenizacin testicular.
CARBN DEXTRN.
Mtodo ms popular.
Carbn activado (absorbente) con dextrano.
Necesita tejido fresco (1gr).
Utiliza estrgeno tritiado (radiactivo).
Mide receptores libres.

ENZIMOINMUNOENSAYO.
Necesita tejido fresco (1gr).
Utiliza Ac.
Mide receptores libres y ocupados.
INMUNOHISTOQUMICA.
En tejido fresco:
Semicuantitativo.

En tejido incluido en parafina:

Digestin enzimtica para recuperar
antigenicidad
Los preparados pueden ser reevaluados
(guardar).
Sensibilidad disminuida.
Falsos negativos.

En ambos:
Utiliza Ac anti hormona.
Cortes de 5m de tejido fresco congelado.
Mide receptores libres y ocupados.
Validacion de
inmunoanalisis

Se debe considerar:

Uso que se le dar (domstico, clnico, de campo,

confirmatorio).
N de tests a realizar.
Costo.
Sensibilidad, especificidad, exactitud y precisin.
Tipo de muestra.
Seguridad.
Aceptacin internacional y analtica.
 La validacin de un mtodo analtico es un
proceso de evaluacin sistemtico para
demostar que el mtodo cumple con los
requisitos necesarios para el uso que se le va a
dar.

Es necesario cuando:
Se esta desarrollando una tcnica nueva.
Antes de incorporar una nueva tcnica a la rutina
de laboratorio.
Cuando se desea comparar el desempeo de dos
tcnicas.
 Todas las medidas tienen un error.

Error admitido:

Criterios CLIA (Clinical Laboratory Improvement

Amendments):

Lmite de concentracin absoluto +/-1mg/dl.

Como %: +/-10%

Valor +/- 3 DS.

Reaccion cruzada,
contaminantes enzimaticos
e interferencia.
Similitud molecular de las hormonas.

Ac presentan reacciones cruzadas.

Reduce: Ac a las subunidades de las hormonas

o produccin de Ac monoclonales.
GRACIAS.