Biotecnologia II 2017 Sitio de Promotor Seleccin Tag escisin de Anfitrin Origen Fuente Descripcin proteasa Vector de trc / lac Ampicilina C-His none BL21 pUC Invitrogen expresin
Nuestros vectores pTrcHis A, B y C
estn diseados para ofrecer una iniciacin de la traduccin mejorada y una expresin de alto nivel en E. coli
Caracteristicas:
alto nivel de transcripcin debido al
promotor. eficacia de traduccin mejorada de genes eucariotas en E. coli El lacO (operador) y lacIq gen represor para la regulacin transcripcional en cualquier cepa de E. coli regin promotora trc: bases 190-382 -35 regin: bases 193-198 -10 regin: bases 216-221 operador lac (lacO): bases 228-248 seal antiterminacin rrnB: bases 264-333 regin del gen 10: bases 346-354 Sitio de unin al ribosoma: bases 369-373 pTrcHis sitio de cebado directo: bases 370-390 Minicistron ORF: bases 383-409 Reinicio RBS: bases 398-403 Expresin ATG: bases 413-415 Sitio de clonacin mltiple: bases 411-464 eptopo myc: bases 471-503 Terminadores transcripcionales rrnB T1 y T2: bases 639-796 Resistencia a la ampicilina ORF: bases 1076-1936 Origen ColE1: bases 2081-2754 Lac Repressor (lacIq)
Fuerte promotor de E. coli, un hbrido entre los
promotores trp y lac UV5. Una etiqueta myc es una protena polipeptdica derivada del producto del gen c-myc que se puede agregar a una protena usando tecnologa de ADN recombinante . Se puede usar para cromatografa de afinidad , luego se usa para separar protenas recombinantes, sobreexpresadas, de protenas de tipo salvaje expresadas por el organismo husped. Tambin se puede usar en el aislamiento de complejos proteicos con mltiples subunidades.
Una etiqueta myc puede usarse en muchos
ensayos diferentes que requieren reconocimiento por un anticuerpo . Si no hay anticuerpos contra la protena estudiada, la adicin de una etiqueta myc permite seguir la protena con un anticuerpo contra el eptopo Myc. Los ejemplos son estudios de localizacin celular por inmunofluorescencia o deteccin por transferencia de Western . Es un anfitrin ejemplar para la expresin de protenas recombinantes. Como una cepa de E. coli B, carece adems de la proteasa principal, codificada por el gen lon, que cataliza la escisin endoproteoltica de protenas daadas y recombinantes en la clula.
BL21 E. coli competente es una cepa de E. coli
de expresin no T7 ampliamente utilizada y es adecuada para la transformacin y la expresin de protenas. Esta cepa no expresa la ARN polimerasa T7.