Laboratorio

Enzimas
Somsimith Deechaleune
BIOL3051
 Objetivos
 Definir qué es una enzima y cómo ésta actúa en las
reacciones dentro de la célula.

 Identificar los diferentes factores que pueden

afectar la actividad enzimática.

 Diferenciar entre inhibición competitiva y no-

competitiva.
 Introducción
 Las enzimas son en su mayoría proteínas o RNA
(riboenzimas).

 Son catalizadores químicos que agilizan una reacción

química que involucra la formación o rompimiento de
enlaces químicos.

 No se consumen ni se alteran en las reacciones.

 Al finalizar la reacción la enzima se libera y queda

disponible para otra reacción.
 Introducción

 Actúan sobre un sustrato formando un complejo

enzima-sustrato al unirse en un lugar específico del
sustrato: sitio activo de la enzima.

 Las enzimas son selectivas, pocas moléculas pueden

interactuar con el sitio activo y formar el complejo
(figura 1).
 Fig. 1: Reacción con participación de
una enzima.

Sustratos

Sitio activo

Complejo Enzima-Sustrato Producto Enzima

 Fig. 2: Energía de activación necesaria
para iniciar la reacción.

Sin enzima
Energía de Con enzima
activación

Curso de la reacción

 Cuando se forma esta interacción baja la energía de activación

necesaria para poder llevar a cabo la reacción.
 Enzimas en una reacción
 Funcionan mejor bajo
condiciones específicas
(óptimas) que incluyen:
 Temperatura
 pH

 Los cambios pueden alterar el

desempeño de la enzima,
desactivarla o destruirla.

 Algunas enzimas necesitan

activadores para poder formar
el complejo enzima-sustrato.
 Cofactores e Inhibidores

Activadores que cambian la conformación de la

enzima para formar el complejo enzima-sustrato
reciben el nombre de cofactores:

 pueden ser iones metálicos (nada

orgánico).
 de origen orgánico se llaman coenzimas.
 Cofactores e Inhibidores

Los inhibidores impiden la actividad de la enzima,

como el pH y la ºT. Pueden afectar el sitio activo de
de dos maneras:

 Competitiva: Bloquea el sitio activo (Fig. 3).

 No competitiva: Altera indirectamente la

forma del sitio activo, al pegarse en otro lugar
de la enzima (Fig. 4).
Fig. 3: Inhibición competitiva
Fig. 4: Inhibición no competitiva
 Ejemplos de enzimas: Catalasa
 Se encuentra en casi todas las células aeróbicas.

 Actúa rompiendo el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno

que se produce en las células:

catalasa
2 H 2O 2 2 H2O + O2

 Observaremos su funcionamiento en varios organismos.

Ejercicio 1: Funcionamiento de la catalasa
en varios organismos.
 Materiales
 Peróxido de hidrógeno
 Papa
 Hígado
 Setas
 Espinaca
 Gasa (cheesecloth)
 Placas de porcelana
 Goteros
 Morteros o licuadora
Procedimiento
 En este ejercicio se prepararán varios homogenados para
obtener partículas pequeñas y uniformes al mezclarlas con el
agua.
 Para preparar los homogenados, corte en pedazos por
separado las muestras de papa, hígado, setas y espinaca.
 Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco
de agua hasta diluir parte de la muestra; no muela
excesivamente para que queden pedazos pequeños del
material.
 De ser necesario, filtre el macerado con una gasa
(cheesecloth).
 Coloque cada homogenado en un tubo de ensayo.
 Usando un gotero, coloque cinco gotas de cada homogenado
en las fosas de la placa de porcelana y añada tres gotas de
peróxido de hidrógeno.
 Resultados
Resultados homogenado con peróxido de
hidrógeno
Homogenado Reacción al añadir gotas de
peróxido.
Agua

Papas

Setas

Hígado

Espinaca
 Preguntas
1. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?

2. ¿Ocurrió lo mismo para todas las muestras?

3. ¿Por qué se forman las burbujas?

4. ¿Qué otros organismos podrían usarse para esta

prueba?
Ejercicio 2: ¿Se comportan todos los
organismos de la misma manera?
 Materiales
 Homogenado de hígado, papa, setas y
espinaca
 Tubos de ensayo
 Peróxido de hidrógeno
 Goteros
Procedimiento
 Rotule cinco tubos de ensayo con las letras A a la E.

 Ponga 3 mL de cada homogenado en los tubos como sigue:

A - Hígado
 B - Papa
 C - Setas
 D - Espinaca
 E - Agua
 Marque el nivel hasta donde llega cada homogenado.

 Ponga 3 mL de peróxido de hidrógeno en cada tubo de ensayo.

 Observe la reacción que sucede en cada tubo y marque el

cambio en el nivel del líquido.
 Resultados
Resultados producción de catalasa en varios
organismos
Tubo Cantidad de Cantidad de
burbujas homogenado
consumido
A
B
C
D
E
 Preguntas
1. ¿Qué organismo produjo más gas?

2. ¿Qué gas se está produciendo?

3. ¿Qué sugieren los resultados sobre la

fisiología de estos organismos?
Ejercicio 3: Efecto de la temperatura
sobre el funcionamiento de las enzimas.
 Materiales
 Homogenado de hígado
 Baño de agua
 Agarradera de tubo
 Ejercicio 3: Efecto de la temperatura
sobre el funcionamiento de las enzimas.

 Influye en la actividad. El punto óptimo representa

el máximo de actividad.

 A temperaturas bajas, las enzimas se hallan "muy

rígidas“, la actividad se detiene y cuando se supera
un valor considerable la actividad cae bruscamente
porque, como proteína, la enzima se desnaturaliza.
Procedimiento
 Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un baño de agua
hasta 37 °C y otro hasta 80°C.
 Añada 5 mL de hígado homogenado a cada tubo.
 Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:
 Tubo 1 = 80 °C por 5 minutos
 Tubo 2 = 37 °C por 5 minutos
 Tubo 3 = Temperatura ambiental
 Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
 Tubo 5 = Congelador a 4 °C por 30 minutos
 Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.
 Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que
se comienzan a producir burbujas, y anótelo en la Tabla..
 Repita con los demás tubos.
 Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs.
temperatura.
 Resultados
Resultados del efecto de la temperatura
Tubo Temperatura Tiempo que Observaciones
tardó en
comenzar
reacción
1 80°C

2 37°C

3 Ambiente

4 Hielo

5 Congelador
 Preguntas
1. ¿Cuál es la relación entre la temperatura y la
actividad enzimática?

2. ¿Qué le sucede a las enzimas cuando se exponen a

temperaturas extremas (muy frías o muy
calientes)?
 Ejercicio 4: El efecto del pH sobre el
funcionamiento de las enzimas
Todas las enzimas presentan un pH óptimo de actividad. El pH
puede afectar de varias maneras:

 El centro activo puede contener aminoácidos con grupos

ionizados que pueden variar con el pH.

 El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.

Algunas enzimas presentan variaciones peculiares. La pepsina del

estómago, presenta un óptimo a pH=2, y la fosfatasa alcalina del
intestino un pH= 12
Efecto del pH sobre el funcionamiento
de la enzima
 Procedimiento
 Rotule tres tubos de ensayo A, B y C
 Añada 1 mL de homogenado de hígado a cada tubo.
 Añada 3M HCl y 3M NaOH a los tubos como sigue,
y agite suavemente hasta mezclar:
 Tubo A – tres ml de 3M HCl

 Tubo B – tres ml de 3M NaOH

 Tubo C – tres ml de agua (control sin ácido ni base).

 Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.

 Observe y anote las reacciones en la siguiente tabla.
 Resultados
Resultados del efecto del pH sobre la actividad
enzimática.
Tubo Tiempo que toma Descripción
la reacción en comparativa de
completarse las reacciones.
A

C
 Preguntas
1. ¿Cuál es la relación entre el pH y la actividad
enzimática?

2. Las enzimas del estómago funcionan mejor con

un pH de 2. ¿Cómo afectaría un pH de 4 en el
estómago a la digestión?