Práctica 15

Biodegradación de
plaguicidas por
microorganismos
del suelo.

EQUIPO 6 S1
EQUIPO 7 S2
2OM2
 Introducción

¿Qué es un plaguicida?

 Cualquier sustancia o mezcla de sustancias

que se destine a controlar una plaga,
incluyendo los vectores de enfermedades
humanas y de animales, así como las
especies no deseadas que causen perjuicio
o que interfieran con la producción
agropecuaria y forestal.
Se pueden clasificar según por los organismos que controlan:

Insecticidas
Fungicidas

Herbicidas

Nematicidas

Raticidas
 Composición química de los plaguicidas
ORGANOFOSFORADOS CARBAMATOS

• Representan la 3a parte de
los plaguicidas aplicados en
la agricultura

• Menor persistencia que los

organoclorados

ORGANOCLORADOS
PIRETRINAS

• Piretro es extracto natural de las

flores de Chrysanthemum
cinerariaefolum.

• Propiedades insecticidas
• 6 compuestos activos del piretro
y se llaman PIRETRINAS. • Tóxicos y de larga duración debido a su composición DDT
• Años 70’s más usados
• Se prohibió su uso por efectos cancerígenos
 Biodegradación
• Utilización de microorganismos para la
descontaminación de suelos.

• Se basan en la absorción de las sustancias

orgánicas por parte de dichos microorganismos.

• Utilizan como la fuente de carbono necesaria

para su crecimiento y de energía para sus
funciones metabólicas.
 • La degradación puede ser parcial o total, llegando en casos extremos
a la obtención de compuestos inorgánicos como H20, CO2, haluros,
amonio, fosfatos, etc.
• Las reacciones de degradación son muy variadas (oxidación,
reducción, hidrólisis, sustitución, eliminación de grupos funcionales,
etc.)
Factores que afectan la biodegradación.
Factores abióticos Factores bióticos

• pH • Capacidad de microorganismos para

• Humedad degradar el plaguicida.
• Temperatura • Población microbiana.
• Disponibilidad de oxígeno • La actividad de exoenzimas.
• Nutrientes responsables de la degradación
Microorganismos degradadores

Pseudomonas

Sphingomonas wittichi

Cianobacterias como Oscillatoria

Hongos como Cladophialophora

 Surfactantes
• Influyen por medio de la tensión superficial en la superficie
de contacto entre dos fases
• En función de su mayor o menor dispersión en agua, y su
mayor o menor estabilización de las micelas o coloides, los
tensioactivos se emplean como emulsionantes,
humectantes, detergentes o solubilizantes.
 Sulfonato de alquilbenceno lineal (LAS)
• Componente de los detergentes de lavandería y
productos de limpieza, muy empleado por sus
propiedades como tensoactivo y por ser
completamente biodegradable tanto aerobia como
anaerobiamente.

• Es el tensioactivo aniónico más difundido a nivel

mundial, suponiendo un 40% de todos los
tensioactivos utilizados.
 Objetivos

Analizar el efecto de la concentración de un plaguicida sobre la

capacidad de los microorganismos de un suelo para metabolizarlo,
midiendo la actividad respiratoria de la comunidad.

Analizar el efecto de la mezcla de un plaguicida como surfactante

sobre la capacidad de los microorganismos de un suelo para
metabolizarlo, midiendo la actividad respiratoria de la comunidad.
 METODOLOGIA
+

Colocar un vaso con 10ml de KOH y otro

con 10 ml de agua en el reactor y sellar
Equipo Concentración de
Mezclar 20g de suelo con 1 ml de la Diazinón
concentración correspondiente de 1 10.0mg/L
diazinón y ajustar la humedad a 60% • Repetir el proceso en un segundo
en un reactor 2 5.0mg/L
reactor sin colocar suelo
3 2.5mg/L
4 1.25mg/L • Incubar los frascos a 28°C en
oscuridad y titular cada 24 horas
5 0.625mg/L
el KOH en los recipientes de
6 0.3125mg/L plástico y reemplazar con KOH
7 0.1563mg/L fresco
8 Testigo
 +

Equipo Solución de Solución de Colocar un vaso con 10ml de KOH y otro

surfactante Diazinón con 10 ml de agua en el reactor y sellar
LAS (1%) (2mg/L)
Mezclar 20g de suelo con la solución 1 1.0 mL 0.0 mL
de surfactante y la solución de
2 0.8 mL 0.2 mL
diazinón, ajustar la humedad a 60% • Repetir el proceso en un segundo
en un reactor 3 0.6 mL 0.4 mL reactor sin colocar suelo
4 0.5 mL 0.5 mL
• Incubar los frascos a 28°C en
5 0.4 mL 0.6 mL oscuridad y titular cada 24 horas
6 0.2 mL 0.8 mL el KOH en los recipientes de
7 0.0 mL 1.0 mL plástico y reemplazar con KOH
fresco
8 Testigo
 Titulación
• Extraer el KOH del reactor
Titular con HCl 0.1N
• Agregar 2 ml de solución
de BaCl2 2N y llevar a un
volumen de 30 ml
𝐵−𝑀 𝑥 𝑁 𝐻𝐶𝑙 𝑥 1000
𝜇𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝐶𝑂2=
2 • Agregar 3 gotas de
indicador de fenolftaleína

Solución de • Titular con HCl 0.1N Hasta

KOH con BaCl2 desaparición del color
y fenolftaleína
 Resultados
Tabla 1. Gastos de HCl (mL) para determinar el efecto de la concentración de un plaguicida en su degradación.
Equipo Muestra Día 1 gasto (mL) Hora Día 2 Hora Día 3 Hora Día 4 Hora Día 5 Hora
mg/L gasto gasto (mL) gasto (mL) gasto (mL)
(mL)

1 10.0000 9 14:37 6.9 12:10 6.7 14:34 5.8 14:25 5.1 10.09

Blanco 9 14:37 7.5 12:13 7.0 14:36 6.3 14:20 6.3 10.08

2 5.0000 9 14:37 6.0 12:26 5.0 14:45 5.9 14:17 1.5 10:12

Blanco 9 14:37 6.8 12:28 6.4 14:47 6.1 14:20 6.6 10:15

3 2.5000 9 14:37 6.0 12:28 3.6 14:43 4.5 14:23 4.9 10:15

Blanco 9 14:37 7.0 12:29 4.7 14:46 5.0 14:25 5.3 10:13

4 1.2500 9 14:37 6.1 12:07 7.2 14:36 4.5 14:22 4.4 10:34

Blanco 9 14:37 6.7 12:09 7.4 14:34 5.3 14:19 4.6 10:35

5 0.6250 9 14:37 6.3 12:36 6.1 14:40 6.6 14:18 5.4 10:44

Blanco 9 14:37 7.1 12:40 7.2 14:37 6.9 14:20 5.6 10.45

6 0.3125 9 14:37 7.0 12:12 5.0 14:55 2.1 14:10 5.7 10:44

Blanco 9 14:37 7.1 12:09 5.5 14:56 3.5 14:09 8.5 10.45

7 0.1563 9 14:37 7.5 12:37 5.0 14:38 4.5 14:08 7.5 10:46

Blanco 9 14:37 8.1 12:25 5.3 14:40 4.2 14:10 6.0 10:48

Testigo 9 14:37 5.8 12:42 6.1 14:13 5.5 15:37 5.0 14:04
8
Blanco 9 14:37 7.6 12:43 6.9 14:16 6.7 15:34 6.2 14:06
Tabla 2. Gastos de HCl (mL) para determinar el efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su degradación.
Equipo Muestra Día 1 gasto (mL) Hora Día 2 Hora Día 3 Hora Día 4 Hora Día 5 Hora
mg/L gasto gasto (mL) gasto (mL) gasto (mL)
(mL)

1 10.0000 9 14:36 7 12:13 7.2 14:28 6 14:22 6.8 10:09

Blanco 9 14:36 7.5 12:09 6.8 14:27 6.4 14:19 7 10:10

2 5.0000 9 14:36 6.8 12:10 5.5 14:38 4.4 14:12 4.1 10:22

Blanco 9 14:36 7.5 12:09 5.8 14:33 6.6 14:09 6.9 10:27

3 2.5000 9 14:36 6.3 12:40 7 14:25 1.3 15:26 7.6 14:24

Blanco 9 14:36 7.4 12:43 7.7 14:29 8.4 15:29 3 14:25

4 1.2500 9 14:36 6.5 13:09 6 14:55 5.3 15:35 7.4 10:01

Blanco 9 14:36 7.5 13:08 7 14:57 6.5 15:36 7.6 10:10

5 0.6250 9 14:36 2.9 12:33 3.5 14:43 4.4 14:12 4.8 10:22

Blanco 9 14:36 3.5 12:30 5.7 14:44 6.5 14:15 6.6 10:23

6 0.3125 9 14:36 7.3 12:16 6 14:43 5.5 13:56 6.4 10:20

Blanco 9 14:36 7.7 12:17 7 14:41 6.5 13:58 7.3 10:21

7 Testigo 9 14:36 6.0 12:43 5 14:35 5.9 14:23 3.6 10:23

Blanco 9 14:36 8.0 12:33 5.1 14:55 5.7 14:27 5.3 10:24
Tabla 3. чMoles de CO2 producidos por día para determinar el efecto de la concentración de un plaguicida en su degradación.
Equipo Muestra чMoles de CO2 producidos por día

Solución Diazinon
(mg/L)
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5

1 10.0000 0 2 1.5 2.5 1.0

2 5.0000 0 4 1.5 2.5 1.0

3 2.5000 0 5 5.5 2.5 1.0

4 1.2500 0 4 1.0 4.0 1.0

5 0.6250 0 4 8.0 1.5 6.0

6 0.3125 0 .5 2.5 7.0 1.0

7 .1563 0 3 1.5 1.5 7.5

8 Testigo 0 9 4.0 6.0 6.0

Tabla 4. чMoles de CO2 producidos por día para determinar el efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su
degradación.
Equipo Muestra чMoles de CO2 producidos por día

*Sol. Surfact. (mL)

Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
°Sol. Diazinon (mL)

1 *1.0 0 2.5 2.0 2.0 1.0

°0.0

2 *0.8 0 3.5 1.5 11 14

°0.2

3 *0.6 0 5.5 3.5 5.5 23

°0.4

4 *0.5 0 5.0 5.0 6.0 1.0

°0.5

5 *0.4 0 3.0 11 10.5 9.0

°0.6

6 *0.2 0 2.0 5.0 5.0 4.5

7 Testigo 0 10 .50 1.0 8.5

 Tabla 5. чMoles acumulados de CO2 producido.
Equipo Compuesto чMoles acumulados de CO2
producido.
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
(0 h) (24 h) (48 h) (72 h) (96 h)

1 Solución de Diazinón 10.0000 mg/L 0 2.0 3.5 6.0 7.0

Sol. Surfact. 1.0 Ml + Sol. Diazinón 0.0 mL 0 2.5 4.5 6.5 7.5
2 Solución de Diazinón 5.0000 mg/L 0 4.0 5.5 8.0 9.0
Sol. Surfact. 0.8 Ml + Sol. Diazinón 0.2 mL 0 3.5 5.0 16 30
3 Solución de Diazinón 2.5000 mg/L 0 5.0 10.5 13 14
Sol. Surfact. 0.6 Ml + Sol. Diazinón 0.4 mL 0 5.5 9.0 14.5 37.5
4 Solución de Diazinón 1.2500 mg/L 0 4.0 5.0 9.0 10
Sol. Surfact. 0.5 Ml + Sol. Diazinón 0.5 mL 0 5.0 10 16 17
5 Solución de Diazinón .6250 mg/L 0 4.0 12 13.5 19.5
Sol. Surfact. 0.4 Ml + Sol. Diazinón 0.6 mL 0 3.0 14 24.5 33.5
6 Solución de Diazinón .3125 mg/L 0 0.5 3.0 10 11
Sol. Surfact. 0.2 Ml + Sol. Diazinón 0.8 mL 0 2.0 7.0 12 16.5
7 Solución de Diazinón .1563 mg/L 0 3.0 4.5 6.0 13.5

8 TESTIGO (Efecto de la concentración) 0 9.0 13 19 25

TESTIGO (Efecto de la mezcla) 0 10 10.5 11.5 20
 Resultados
Efecto de la concentración de Diazinon en su degradación
30

25
Diazinón 10.0000 mg/L

Diazinón 5.0000 mg/L

20
чMoles de CO2 acumulado

Diazinón 2.5000 mg/L

Diazinón 1.2500 mg/L

15
Diazinón 0.6250 mg/L

Diazinón 0.3125 mg/L

10
Diazinón 0.1563 mg/L

TESTIGO
5

0
0 20 40 60 80 100 120
Tiempo (hrs)

Figura 1. чMoles acumulados de CO2 producido por efecto de la concentración de un plaguicida en su degradación.
 Efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su degradación
40

35

30
Sol. Surfact 1.0mL + Diazinón 0.0 mL

чMoles de CO2 acumulado

Sol. Surfact. 0.8 mL + Diazinón 0.2 mL 25

Sol. Surfact. 0.6 mL + Diazinón 0.4 mL

20
Sol. Surfact. 0.5 mL + Diazinón 0.5 mL

Sol. Surfact. 0.4 mL + Diazinón 0.6 mL 15

Sol.Surfact. 0.0 mL + Diazinón 1.0 mL

10
TESTIGO

0
0 20 40 60 80 100 120
Tiempo (Hrs)

Figura 2. чMoles acumulados de CO2 producido por efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su degradación.
 Discusión
Algunos factores físicos y químicos permiten que los plaguicidas se acumulen en el suelo
como la humedad de este, así como la solubilidad de la molécula del plaguicida.
En la gráfica 1 muestra que la mayor cantidad de CO2 producido en un reactor fue en el
testigo al cual no se le adiciono dianizon, mientras que en los demás reactores la cantidad
de CO2 fue cada vez menor conforme aumenta la concentración del plaguicida, lo cual
significa que este no es biodegradable, ya que los organismos que no se encuentran
influenciados por la presencia de este en el testigo pueden realizar su metabolismo sin
problemas y producir CO2 como producto de la respiración utilizando para eso el Carbono
presente en el suelo, sin embargo, en los reactores con diazinon se observa la producción
de una menor cantidad de CO2 que el testigo por lo que el plaguicida está provocando que
se inhiba la cadena respiratoria y por lo tanto no exista una producción normal de CO2, por
lo que los microorganismos no están consumiendo el Carbono del plaguicida, conforme
aumenta la concentración de este plaguicida en el reactor menor es la cantidad de CO2
producido por lo que se puede concluir que el dizinon provoca la muerte de los
microorganismos.
 Conclusiones
• El Diazinón inhibe la respiración de ciertos organismos, a mayor
concentración de Diazinón la respiratoria de los organismos es mínima y a
concentraciones más bajas la respiración es mayor.
• Para los organismos que pudieron degradar el Diazinón (por ejemplo
Bacillus, Pseudomonas y Flavobacterium) este lo utilizaron como fuente de
carbono, energía y donador de electrones. (Bibliografía)
• Diazinón es un plaguicida NO biodegradable.
• En la mezcla de Sol. Surfact 4mL y Diazinón 6mL se observa mayor
biodegradación.
• La solución Surfactante le brinda mayor duración al plaguicida Diazinón.
• La solución Surfactante permite que el Diazinón sea más biodegradable.
 Cuestionario
1.- Represente la estructura molecular del plaguicida usando en la práctica

2.- ¿En qué grupo y contra que organismos se cataloga a este compuesto?
• Diazinón es un insecticida que pertenece a un grupo de productos químicos conocidos como
organofosforados.
• Se utiliza en la agricultura para el control de insectos en frutas, vegetales, frutos secos y de
campo cultivos.
• En el 2004, diazinón se utilizó para controlar plagas caseras
como moscas pulgas ,cucarachas y para controlar insectos en animales domésticos.
 3.- ¿Cuál es la forma de acción de este plaguicida?

Dentro de los seres vivos, el diazinón se transforma en una molécula llamada diazoxon, a
diferencia del diazinon, el diazoxon mata a los insectos al interferir con la función del sistema
nervioso, al igual que todos los miembros de la familia química de organofosforados.

Normalmente, los impulsos se transmiten químicamente a partir del final de una célula
nerviosa (postsinaptica) al principio de otra (presináptica). La acetilcolina después de
transmitir el impulso nervioso, es destruida por una enzima llamada acetilcolinesterasa
(AChE) con el fin de borrar el camino para otra transmisión. Los organofosforados se adjuntan
a la AChE e impiden la destrucción de la acetilcolina, causando la sobreestimulación de los
nervios.
 Bibliografia

• Instituto Nacional de Ecología y Cambio Climático(INECC). Plaguicidas. 2003. Disponible en:

http://www.inecc.gob.mx/sqre-temas/768-sqre-plaguicidas
• Torres Rodriguez D. El papel de los microorganismos en la biodegradación de compuestos tóxicos.
2003. Ecosistemas. Disponible en :http://www.redalyc.org/pdf/540/54012219.pdf
• Instituto Nacional de Ecología (INE). Manual de técnicas de análisis de suelo aplicadas a la
remediación de sitios contaminados. 2006. Disponible en:
http://www.inecc.gob.mx/descargas/publicaciones/509.pdf

• Diazinon: Toxicology. Disponible en línea en: (http://www.wolf.sk/dok/pesticidy/diazinontox.pdf )

.Consultado 15 de mayo de 2016.
•
• ChemicalWATCHFactsheet. Disponible en linea en:
(https://www.beyondpesticides.org/assets/media/documents/pesticides/factsheets/Diazinon.pdf).
Consultado 15 de mayo de 2016.
•
• Fuentes, P,C. , Roman, A,L. 1980. Los Surfactantes: Clases, Propiedades Y Uso Con Herbicidas.
Centro Internacional de agricultura tropical.Colombia. 25-30 pp.