Metb y Enzimol

Feduchi
BIOQUÍMICA
Conceptos esenciales 2ª ed.
ELENA FEDUCHI: Dra. Bioquímica y Biología Molecular. Acreditada

como Profesor contratado doctor por ACAP. Profesora asociada
en la Universidad Alfonso X el Sabio (1998-2013). Profesora
asociada en Universidad Autónoma de Madrid (1993-1998)
CARLOS ROMERO: Dr. Bioquímica y Biología Molecular.
Universidad Complutense de Madrid Profesor Titular. Universidad
Alfonso X el Sabio
ESTHER YAÑEZ: Dra. Bioquímica y Biología Molecular. Profesora
Titular. Universidad Alfonso X el Sabio.
ISABEL BLASCO: Licenciada en Ciencias Biológicas por la
Universidad Complutense de Madrid (UCM). Profesora de la
Comunidad de Madrid. Profesora asociada en la Universidad
Alfonso X el Sabio (2007-2010).
CARLOTA GARCÍA-HOZ: Doctora en Bioquímica y Biología
Molecular, Universidad Autónoma de Madrid. Acreditada como
Profesor ayudante doctor por ACAP. Profesora en la Universidad
Alfonso X el Sabio (2008-2013).
BIOENERGETICA INTRODUCCION AL METABOLISMO
Catabolismo Vs Anabolismo
Implicancias
termodinamicas
ETAPAS METABOLISMO
Generalidades Enzimas
 Las enzimas son necesarias para que las reacciones bioquímicas:
• Se produzcan a una velocidad adecuada para la célula
• Se dirijan hacia rutas útiles y necesarias según necesidades energéticas

y necesidad de producción de distintas sustancias.
 Características
 Gran poder catalítico
 Alto grado de especificidad
 Actúan en soluciones acuosas en condiciones determinadas de Tª y pH
 Su actividad puede regularse
 Importancia
 Agricultura
 Industria alimentaria
 Medicina
Generalidades Enzimas
 Características catalíticas
E+S ES E+P
 Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad.
 No se alteran en el proceso, no se modifican en su actuación.
 No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no

modifican la constante de equilibrio de la reacción, sino que aceleran su
consecución.
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
Edición LAS ENZIMAS COMO CATALIZADORES BIOLÓGICOS García-Hoz
sustrato interacciona con el centro activo de la

enzima y se forma un complejo enzima-sustrato
K1 K2
E+S E + P
K-1 ES
UNION DEL SUSTRATO ETAPA CATALITICA

ES estabiliza el estado de transición.
© 2015, Editorial Médica
Tabla 8-1. Clasificacion (EC)IUBMB de las enzimas segun la reacci6n catalizada
Clase subclase
1.-Oxidorreductasas Deshidrogenasas, oxidasas, reductasas, peroxidasas, catalasa,
oxigenasas, hidroxilasas
Reaciones Oxido- Reduccion
Transaldolasas y transcetolasas, fosforiltransferasas, quinasas,
2. Transferasas fosfomutasas
Transferencia de grupos intactos de una molecula a otra
Esterasas, glucosidasas, peptidasas, fosfatasas, tiolasas,
3. Hidrolasas fosfolipasas, amidasas, desaminasas, ribonucleasas
Reacciones de hidrolisis
4. Liasas Descarboxilasas, aldolasas, hidratasas, deshidratasas, sintasas, liasas

Adicion de grupos ,dobles enlaces sin participación del agua
5. lsomerasas Racemasas, epimerasas, isomerasas, mutasas

Transferencia intramolecular de grupo (cis/trans. L/D,aldehído,cetona
6. Ligasas Sintetasas, carboxilasas

Union de sustratos a expensas de la hidrolisis del ATP
Nomenclatura de enzimas
 Código numérico encabezado por las letras EC (enzyme commission)

 Cuatro números separados por puntos
• El 1º indica a cual de las seis clases pertenece la enzima
• El 2º se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo((tipo de

sustrato, el donador de electrones o el enlace afectado)
• El 3º aspectos específicos de la reacción (sustrato, grupo funcional

que participa en la reacción, etc.).
• 4º se refieren alos grupos Químicos específicos que intervienen en la

reacción. número concreto que ocupa la enzima dentro de la subclase.
E.C. 1.1.1.1
 Nombre sistématico Alcohol DH Acetaldehído
Etanol piruvato
Lactato Lactato DH
Sustrato preferente + reacción + “asa”
L-lactato: NAD+ oxidorreductasa E.C. 1.1.1.2
Cofactores, coenzimas y el papel de las vitaminas
Vitaminas como cofactores enzimáticos
Enfermedades
VITAMINAS FUNCIONES
carenciales
C (ácido Coenzima de algunas peptidasas. Interviene en la síntesis de

Escorbuto
ascórbico) colágeno
Coenzima de las descarboxilasas y de las enzima que

B1 (tiamina) Beriberi
transfieren grupos aldehídos
B2 Dermatitis y lesiones
Constituyente de los coenzimas FAD y FMN
(riboflavina) en las mucosas
B3 (ácido Fatiga y trastornos del

Constituyente de la CoA
pantotinico) sueño
B5 (niacina) Constituyente de las coenzimas NAD y NADP Pelagra

B6 Interviene en las reacciones de transferencia de grupos
Depresión, anemia
(piridoxina) aminos.
B12
Coenzima en la transferencia de grupos metilo. Anemia perniciosa
(cobalamina)
Coenzima de las enzimas que transfieren grupos carboxilo,en

Biotina Fatiga, dermatitis...
metabolismo de aminoácidos.
García-Hoz
Edición
. Enfermedades asociadas a alteraciones del reconocimiento

enzima-cofactor © 2015, Editorial Médica
García-Hoz
Edición

García-Hoz
Edición
Enfermedades
asociadas a
alteraciones del
reconocimiento
enzima-cofactor
Mutaciones al sitio de unión de
¿Qué la
naturaleza
proteína tendrán los
con el cofactor,
residuos
como del sitio
ocurre de caso
en el uniónde la
del centro activo si
cistationuria. el
y-cistationasa,
sustrato es la glucosa?
que provoca la disminución de
MECANISMO
Bioquímica Conceptos DE ACCIÓN. 2ª
esenciales DE LAS ENZIMAS
Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición
Función de las enzimas. Principios energéticos
union
INTERACCIONES
NO
Catalitico COVALENTES
Centro activo complementario al estado de TRANSICION Y

NO AL SUSTRATO (naturaleza de AA que lo forman y su
distribución espacial concreta) © 2015, Editorial Médica
Edición Cambios energéticos en una reacción exergónica
García-Hoz
energía de activación DG = DH - TDS

∆H<0 ∆S>0
DG = DG0 + RT ln [B]
∆G = ∆H - T∆S [A]
DG0 = -RT ln Keq
Las enzimas no alteran los equilibrios de reacción pero

consiguen que se alcancen de forma más rápida.
La expresión que nos da la energía libre de un proceso tiene
otra importante derivación. Para la reacción
A B
Esta expresión es:
[B]
DG = DG0 + RT ln
[A]
En el equilibrio, DG = 0; por tanto,

[Beq]
0= DG0 + RT ln [A ]
eq
[Beq]
Pero = Keq Por tanto, DG0 = -RT ln Keq
[Aeq]
Las
Edición
enzimas no alteran los equilibrios de reacción peroGarcía-Hoz
consiguen que se alcancen de forma más rápida.
COMO LO HACEN ?
La velocidad está relacionada con la energía de activación

La catálisis
Bioquímicaenzimática seesenciales
Conceptos consigue .rebajando
2ª esta barrera
Feduchi · Romero mediante
· Yáñez · Blasco · la
García-Hoz
ventaja energética que supone la creación del complejo ES
Edición
< VR
> VR
1. formación de enlaces covalentes o la transferencia de grupos

funcionales de la enzima y del sustrato.
2. La creación de interacciones no covalentes ES con liberación -
∆G energía de unión , que rebaja la energía de activación.

Las interacciones
Bioquímica en el esenciales
Conceptos complejo .enzima-sustrato
2ª son
Feduchi óptimas
· Romero en ·
· Yáñez · Blasco
García-Hoz
Edición el estado de transición
Daniel Koshland

García-Hoz
Edición
interacciones no covalente, de forma que una porción polar del
sustrato interacciona con una porción polar del centro activo y
una región apolar interacciona con las cadenas laterales de
residuos apolares que se suele denominar “bolsa hidrofóbica”
union
Catalitico
EL centro activo ES complementario al estado de

TRANSICION Y NO AL SUSTRATO
Modelo del encaje inducido de Kohsland
García-Hoz
Edición
(a) hexoquinasa en ausencia de

sustrato (PDB 1HKG).
El centro activo de las

enzimas es
complementario al estado
de transición y no al
sustrato
(b) En presencia del sustrato, la

enzima sufre cambios en su
conformación que aumentan las
interacciones entre ambas moléculas
(PDB 1GLK).
García-Hoz
Edición
Mecanismos químicos para la estabilización del estado de
transición
La energía de fijación proporciona especificidad y catálisis
Catálisis covalente©
Catálisis ácido-base general(a.b)
Catálisis por iones metálicos

Los cationes
Bioquímica metálicos
Conceptos como
esenciales . 2ªcofactores en las quinasas
García-Hoz
Edición
Las enzimas
Catálisis por iones metálicos combinan
• Orientando el sustrato de la forma adecuada para que reaccione. diferentes
• Estabilizando cargas en un estado de transición inestable. mecanismos
• Facilitando reacciones de oxidorreducción gracias al paso reversible químicos para
• Cambiando la polaridad de enlaces ↓ΔG‡ Y > VR
Parámetros que influyen en la velocidad de reacción enzimática
 Factores que modifican la actividad enzimática
 Efecto del pH y la Tª
 Inhibidores
 Inhibición reversible
• Competitiva
• No competitiva
 Inhibición irreversible
Variables que influyen en la velocidad de una
reacción enzimática
1. Concentración de enzima
2. Concentración de substrato
3. pH
4. Temperatura
5. Efectores (Activadores e Inhibidores)

Factores que modifican la actividad enzimática
La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:
 La concentración de moléculas de sustrato

(Ecuación de Michaelis-Menten)
 Cantidad de enzima
La V0 es proporcional a la concentración de enzima, al menos en un
determinado rango de concentraciones.
 El pH
 La temperatura
 La presencia de inhibidores
Efecto de la temperatura
Las enzimas poseen una temperatura óptima a la cual la enzima presenta

máxima eficiencia catalítica.
 Existe un intervalo en el cual son estables.
Actividad enzimática
Temperatura (ºC)
Efecto del pH
 pH óptimo de actuación, a valores superiores o inferiores la velocidad disminuye.
 El pH del medio afecta:

 Catálisis
 Unión al sustrato
 Conformación (estructura espacial) de la enzima
Quimotripsina
Pepsina
Actividad enzimática
pH
Inhibición enzimática
Inhibidores: pequeña moléculas químicas o iones que interfieren con las

reacciones ralentizándolas o deteniéndolas
 Importantes para el estudio de:
 Mecanismo de acción enzimática
 Especificidad de sustrato
 Naturaleza del centro activo
 Identificación residuos fundamentales para la catálisis
 Utilidad
 Determinación rutas metabólicas
 Medicina. Antibióticos
Inhibición enzimática
Hay dos tipos de inhibidores enzimáticos:
 Reversibles: Unión no covalente de un inhibidor a la enzima
 Competitiva
 No competitiva
 Acompetitiva
 Irreversibles: Unión covalente del inhibidor al enzima
Elementos naturales, tóxinas específicas, venenos, iones, fármacos

ORDEN DE UNA REACCION Y UNIDADES DE LA CONSTANTE DE VELOCIDAD
una reacción S➔P, la velocidad Vo se puede expresar como :
Desaparicion de sustrato Vo = d[S]/dt o Desaparicion de Producto Vo = d[S]/dt

M•s- 1
Reacciones de primer orden
A➔B, velocidad depende de un solo sustrato V=k[A]
A ↔ B: VA →B = k 1 [A] y VB->A=k_1[B] M•s- 1
equilibrio k1/k-1=[B]/[A] = : keq de la reaccion
Reacciones de segundo orden

intervienen dos sustratos para dar un producto: 2A➔B o A+ B➔C
V= k [A]2 o V= k [A][B]. M- 1 • s- 1•
Reacciones de orden cero

velocidad es independiente de la concentración de sustrato. Puede depender de
otros factores como, por ejemplo, la concentración de catalizador.
Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª Diagrama de desaparición
· Romero · Yáñez ·de
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Edición
Feduchi
sustrato y aparición de producto

Blasco ·
García-Hoz
en una reacción catalizada
d[ ]
v = dt , t -> 0
eficiencia
afinidad

Curso
Bioquímica de una
Conceptos reacción
esencialescatalizada con una
. 2ª Feduchi · Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición
concentración de enzima constante
K1
K2
E+S K-1 ES E + P
UNION DEL SUSTRATO ETAPA CATALITICA

García-Hoz
Edición
Relacionar la fórmula de la
velocidad de la reacción con
esta gráfica. ¿Dónde está
aquí representada la
velocidad?

García-Hoz
Edición

Teoría de la acción enzimática
L. Michaelis M. Menten
 En 1913 propusieron una ecuación de velocidad que explica el

comportamiento cinético de las enzimas
K1 K2
E+S ES E + P
K-1
Teoría de la acción enzimática
K1 K2
E+S ES E + P
K-1
 El complejo ES se encuentra en
estado estacionario
Concentración
Bajo condiciones de saturación,

toda la enzima interviene en la
formación del complejo ES
 Cuando toda la enzima se

encuentra en forma de complejo ES,
la velocidad de la reacción es la
Tiempo máxima posible (Vmáx)
Diagrama de V0Conceptos
Bioquímica de reacción frente a. 2ªconcentración
esenciales de sustrato
García-Hoz
Edición
1. Km »» [S] 2. [S] »» Km
3. [S] = Km
EL MODELO ESTACIONARIO Y LA ECUACION DE MICHAELIS -
MENTEN
1. Km »» [S]
2. [S] »» Km
3. [S] = Km
MENTEN
MENTEN
MENTEN
MENTEN
MENTEN
MENTEN
MENTEN
MENTEN
Significado de la constante Km
1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES

(en condiciones de equilibrio rápido)
2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato

(en condiciones de equilibrio rápido)
3. Mide la función de fijación (en cond.de equilibrio rápido)
4. Concentración de substrato para la que la velocidad se hace

igual a la mitad de la máxima (s0.5)
5. Se define para una pareja enzima-substrato
6. Se mide en unidades de concentración

Representación directa
v
100
Vmax
80
60
Vmx s
v
40 Km  s
20
s
0
0 20 40 60 80 100
Km
Representación recíproca doble
(Lineweaver - Burk)
0.04
1/v
0.03
1/Vmax
0.02
1 Km 1 1
-1/Km   
0.01 v Vmx s Vmx
0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/s
García-Hoz
Edición

Análisis lineal de la ecuación de Michaelis-Menten:
representación de Lineweaver-Burk
García-Hoz
Edición

García-Hoz
Edición
¿Sería igual de sencillo

conseguir que la enzima
alcanzara la mayor velocidad
si se aumenta la temperatura
de la reacción desde los 20
ºC a los 45 ºC, que si
disminuimos la temperatura
de
reacción de los 70 ºC a los
García-Hoz
Edición

. Mecanismos
Bioquímica Conceptos esenciales . 2ª de las Feduchi
reacciones bisustrato.
· Romero · Yáñez · Blasco ·
García-Hoz
Edición

Ejemplos de medicamentos y su mecanismo
de acción
Medicamento Enzima inhibida Enfermedad tratada
Amburicin® Topoisomerasa 2 Cáncer (Quimioterapia)
Antabuse® Aldehido deshidrogenasa Alcoholismo
Captopril® Enzima de la síntesis de Hipertetension

angiotensina
Digoxin® ATPasa de la bomba K+ Na+ Problemas cardiacos
Lipitor® 3-hidroxo-3-metil-glutaril CoA Hipercolesterolemia
Viagra® Fosfodiesterasa 5 5 Disfunción eréctil
Hycamtin® Topoisomerasa 1 Cancer(Quimioterapia)

García-Hoz
Edición

Inhibición reversible competitiva
Inhibidor
Sustrato competitivo
Enzima Enzima
Metanol Formaldehído
Etanol Alcohol DH Acetaldehído
Etilenglicol Ac. Oxálico
La intoxicación con etilenglicol o metanol se trata con etanol

Inhibición reversible competitiva
Quimioterapéuticos: metrotrexato
Agentes antibacterianos: Sulfamidas
 Compiten con el p-amino-benzoico,

necesario para la síntesis de DNA
de bacterias.
Metotrexato
Estatinas
 Inhiben HMG-CoA reductasa,

Tetrahidrofolato
enzima limitante síntesis de
colesterol.
 Inhibe síntesis de DNA
 Compite por la dihidrofolato reductasa

Inhibición reversible no competitiva
Tipranavir PETT2
(inhibidor de la Proteasa) (Inhibidor de la Trascriptasa Inversa)
Inhibición irreversible
 Reaccionan con un grupo químico de la enzima, modificándola

covalentemente.
 Bloquean unión al sustrato
 Inhiben actividad
 Sus efectos dependen del tiempo de actuación del inhibidor.
 Por lo general son altamente tóxicos. Casi todos los inhibidores

enzimáticos irreversibles son sustancias tóxicas (naturales o sintéticas).
 Penicilina inhibe la síntesis de la pared bacteriana
 Aspirina inhibe la síntesis de PG
 Gases nerviosos: diisopropil fluorofosfato (DIFP), inhiben neurotransmisores
 Hg2+, Pb2+ , CN-, As

Inhibición irreversible
 Fármacos antitumorales que actúan como análogos de la citidina

Inhibidores irreversibles del metabolismo del DNA
Regulación de la actividad enzimática
I. Control de la actividad enzimática
II. Regulación por cambios en la concentración de enzima
III. Regulación alostérica
IV. Modificaciones covalentes reversibles
V. Activación de zimógenos
VI. Isoenzimas
 Complejos multienzimáticos
Regulación enzimática
 Las reacciones enzimáticas están organizadas en rutas bioquímicas o metabólicas
A B C D
Z
 En cada ruta el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente
 Las rutas deben estar reguladas para:

 Conservar la energía
 Mantener un estado celular ordenado
 Responder a variaciones ambientales
Las enzimas reguladoras catalizan las reacciones más lentas y fijan la

velocidad de la ruta
I.- Control de la enzima reguladora
1.- A nivel de sustrato
Velocidad
[S]
(hasta saturación)
Producto
Formación producto
[ P]
(Inhibición competitiva)
Tiempo
Hexoquinasa
Glucosa Glucosa 6-fosfato

Control de la enzima reguladora
2.- Retroinhibición o inhibición “feed-back”
A B C D E
X
 Inhibición del enzima regulador por el producto final

 Se impide:
 Utilización innecesaria del primer sustrato
 Acumulación del producto final
 Acumulación de intermediarios
3.- Regulación cruzada

 Un producto de una vía activa o inhibe un enzima de los primeros pasos de otra ruta
A B C D
X
X Y Z
Mecanismos de regulación enzimática
A. Regulación por cambios en la cantidad de enzima

i. Síntesis
ii. Degradación
B. Regulación de la eficacia catalítica
no covalente: Enzimas alostéricas

a. Unión de Fosforilación
ligandos ADP-ribosilación,
covalente:
Metilación y Acetilación
b. Rupturas proteolíticas: zimógenos
c. Múltiples formas de la enzima: Isoenzimas, complejos multienzimáticos

A. Cambios en la cantidad de la enzima
 Muchos enzimas reguladores tienen vida media corta y se hayan en

concentraciones muy bajas
I. Aumento o represión de la síntesis a través de regulación génica
Permite control a largo plazo
Carboxiquinasa
Piruvato Oxalacetato X Fosfoenolpiruvato Glucosa
X
promotor
Carboxiquinasa
II. Degradación controlada por proteasas citosólicas; ubiquitina

B.- Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico
a. Unión no covalente a ligandos: ENZIMAS ALOSTÉRICAS
 Control alostérico Alostérico = otro sitio
 Enzimas alostéricas:
 Proteínas con estructura 4aria
 Más de un centro activo y catalítico
 Actividad regulada por moduladores alostéricos, unión no covalente
 Cinéticas sigmoidea
 Cooperatividad
velocidad
[ sustrato ]
 Control alostérico: ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Regulador alostérico: pequeños metabolitos o cofactores que se unen a
sitios distintos del centro activo y modifican la actividad enzimática
 Modulador propio sustrato: homoalosterismo(+)
 Enzimas homotrópicos el sitio modulador y el sitio activo son el mismo
 Modulador molécula distinta a sustrato: heteroalosterismo(+/-)
 Enzimas heterotrópicos el sitio modulador y el sitio activo distintos
Centro Centro Centro Centro

alostérico activo alostérico activo
S R S
 Control alostérico: ENZIMAS ALOSTÉRICAS
 Enzimas homotrópicos
 Un pequeño incremento de la [S] provoca un gran aumento de Vo
Vmáx
↓Km y ↑
Afinidad
velocidad E poco E muy
eficiente eficiente
[Sustrato]
[ sustrato ]c
 Permiten mantener valores constantes de sus sustratos

 Control alostérico
 Enzimas heterotrópicos
Al no ser cinética micheliana no se puede usar el término Km, sino K0,5
Modulador alostérico positivo:

aumenta actividad
La unión y transformación
del sustrato es cooperativa
Modulador alostérico negativo:

disminuye actividad
Regulación de la eficacia catalítica: control alostérico
 Control alostérico
 Enzimas heterotrópicos
Modulador alostérico positivo:

favorece forma R
Modulador alostérico negativo:

favorece forma T
Modelos de cooperatividad
 Simétrico o concertado
Conformación T (tensa)
Conformación R (relajada)
 Asimétrico o secuencial
Conformación T (tensa) Conformación R (relajada)

Conformación intermedia
Regulación de la eficacia catalítica: modificación covalente
 Unión covalente de ligandos

 Ligando aporta grupo funcional que modifica las propiedades de la enzima
 Modificación reversible
 Metilación
S-Adenosil-metionina
Enzima Enzima-CH3
 ADP-ribosilación
NAD
Enzima Enzima-ADP-ribosa
CTX o PTX
 Acetilación
 Modificaciones lipídicas
Regulación de la eficacia catalítica: modificación covalente
 Unión covalente de ligandos

 Fosforilación/desfosforilación
ATP Quinasa ADP

Serina Treonina
Enzima Enzima- P
Fosfatasa
Pi Tirosina
glucógeno (n residuos) + Pi glucógeno (n-1 residuos) + glucosa-1-fosfato

Glucógeno fosforilasa
Fosforilasa quinasa
Glucógeno fosforilasa b Glucógeno fosforilasa-a P

(poco activa) (más activa)
Fosforilasa fosfatasa
Ejemplo de regulación múltiple: glucógeno fosforilasa
Control covalente
Fosforilasa quinasa
Fosfoproteína fosfatasa I
Fosforilasa b Fosforilasa a
Inactiva Activa
(estado T) (estado T)
Control no covalente
Glucosa
Glucosa-6P Cafeina
Glucosa
Cafeina
Fosforilasa b Fosforilasa a
Activa Activa (estado
(estado R) R)
Activación por ruptura proteolítica
Zimógenos o proenzimas (inactivos) Inactiva
Ruptura enlaces peptídicos (cambio conformacional)

ruptura
Enzima activa Activa
 No requiere ATP
 Irreversible sustrato
 Enzimas proteolíticas (proteasas) del estómago y páncreas
 Sistema de coagulación de la sangre

 Sistema de coagulación sanguíneo
Estructura del fibrinógeno
Sitio de corte
Unidad globular
Zimógenos
Enzimas activas
 Enzimas proteolíticas (proteasas) del estómago y páncreas

H+
Estómago: Pepsinógeno Pepsina
Páncreas:
 Se sintetizan en páncreas (inactivas)
 Se rompen en intestino (activas)
 Después de actuar se degradan
Zimógenos
Enzimas activas
Activación quimiotripsinógeno
Quimotripsinógeno
(inactivo)
Tripsin a
-quimiotripsina
(activa)
Quimiotripsina
-quimiotripsina
(activa)
Isoenzimas o isozimas
Diferentes formas estructurales de una enzima que catalizan la misma reacción
 Difieren en sus secuencias de aa, en sus parámetros cinéticos y/o propiedades reguladoras
 Juegan un papel importante en la regulación de procesos metabólicos
 Codificados por diferentes loci
 Ejemplo: Lactato deshidrogenasa Piruvato Lactato (en ausencia de O2)
Dos cadenas H y M Corazón Riñón Cel. rojas Cerebro Leucocitos Músculo Hígado
H4
H3M
H2M2
HM3
M4
Isoenzimas o isozimas
 Aunque catalizan la misma reacción difieren en sus valores de Km para el piruvato
 El piruvato inhibe alostéricamente H4 pero no M4
Músculo Corazón
Glucosa Glucosa
LDH (M4) LDH (H4)

Piruvato Láctico Piruvato Láctico
Km Km
C02 + H20 C02 + H20
Trabajo anaerobio Trabajo aerobio

Bioquímica Conceptos esenciales. 2ª
ENZIMOLOGIA CLINICA
García-Hoz
Edición
Capt. 23 Vasudevan
A.- FUNCIONALES B.- NO FUNCIONALES DIAGNOSTICO y
↑↑[SPA] ↓↓[NO SPA] PRONOSTICO
Enz. Coagulación ↑↑[NECROSIS Y ENFERMEDAD]
BIOMARCADORES
1. Lactato deshidrogenasa i. Cualquier dolor en el pecho
2. Creatina quinasa
3. Fosfatasa alcalina ii. Angina inestable
4. Fosfatasa acida
Usados en : iii. ECG sospechosos
5. Antígeno prostético específico
6. Colinesterasa
7. Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa iv. Historia de infarto miocárdico
8. Amilasa y lipasa
9. Enzimas utilizadas como agentes v. Posterior cirugía
terapéutico revascularización
SPA =Secreción Plasmática Activa vi. Pacientes con hipertensión y

disnea
Biomarcadores cardíacos
a. Síndrome coronario agudo (isquemia miocárdica) i. Detectar Isquemia Cardiaca temprana
ii. Monitorear la progresión de la
b. Falla cardiaca congestiva disfunción condición
ventricular . iii. Para predecir el riesgo de disfunción
cardíaca.
i.- Detección temprana de IAM iii.- Riesgo EC

1. Troponinas cardíacas, Tnl y TnT( S, E) a. Prediccion inicio de la isquemia
2. Creatina cinasa, CKMB ( S, E) b. Cuantifican daño ventricular
3. Mioglobina (S, No E) hsCRP y liproteinas aterogenicas
Marcadores para enfermedades cardiacas (Primeras 6 horas)
i. Creatina cinasa
Marcadores (CKMB)
del infarto del miocardio
Marcador Aparición Pico Duración
ii. Troponina I cardiaca
CK-MB 3-6 hr (TIC)
18-24y hr
troponina
36-72 cardiaca
hr T(TCT).
Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
iii. Péptido natriurético
LDH 6-12 hr cerebral
24-48 hr(PNC). confiable función ventricular
6-8 días
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
iv. LDH y AST (IAM)
Mioglobina 1-4 hr, no6-7
se hr
utilizan
24 más
hr en la práctica clínica.
CREATINA QUINASA (CQ/CK) VR : ♂ 15-100 U/L y de ♀ 10-80 U/L
isoenzimas
CreatinaCK (Dimero
CK 40KD) Creatina fosfato CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
lsoenzima Movilidad Origen % serico
MM (CK3) Mínimo
ATP Músc.
ADP Esque 80% LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
MB (CK2) Intermedio Corazón 5% AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
BB (CK1) Máximo Cerebro 1% Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr
CK y el ataque al corazón
CK2 (MB) puede no ser i. ↑↑[CK sérico] en IAM 3-6 horas.
detectado, si SE EVALUA ii. Util temprano y ECG ambiguos.
solamente CK TOTAL.
2° pico (otro episodio isquémico.
iii. No ↑↑[CK s] en hemolisis ni ICC CK
ventaja que LDH. Area ∝ Tamaño Infarto
CK y enfermedades musculares
i. ↑↑[CK ] distrofias musculares
(DF)(500-1500 IU/L),
ii. ♀ portadoras DF ligada a X
(heterocigoto), Moderada ↑↑[CK ]
iii. CK TOTAL en DF y MB en IAM
TROPONINAS CARDIACAS (TC1/TCT) No es enzima VR : ♂ U/L y de ♀ U/L
Actualmente confiable detección temprana y monitoreo
i. CTnC(subunidad fijadora de calcio) (CTnl) (subunidad inhibidora actomiosina ATPasa), y CTnT (subunidad
fijadora de tropomiosina).
La troponina I (Tnl) isoforma cardiaca específica
La isoforma cardiaca de CTnT y CTnl (95%) miofibrillas(↑sostenido) y 5% citoplásmica(↑incial).
CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
La troponina I ↑↑ primeras 4 hr;
LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
pico 14-24 hr y permanece 3-5 días.
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
No ↑ lesión muscular; si ↑↑CK2 Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr
lesiones musculares
(TnT) 6 hrs , pico a las 72 horas y

permanece elevado 7-14 días.
↑ troponina cardiaca < percentil 99

diagnóstico de IM riesgo de evento
cardiacoadverso.
MÚSCULO ESQUELÉTICO
• TROPONINA
La troponina se compone de tres subunidades polipeptídicas:
troponina T = se une a la tropomiosina y de esta forma fija
todo el complejo proteico de troponina a la
tropomiosina
TROPONINA troponina I = posee gran afinidad por la actina, a la que se une
0.03 - 0.08 ng/mL y evita su interacción con la miosina
< 10 ug/L
troponina C = fija iones calcio (Ca++)
troponina C
TROPONINA
troponina T
troponina I
• CONTRACCIÓN MUSCULAR
Una vez que se establece el

potencial de acción en la fibra
muscular la onda de
despolarización viaja a lo largo
del sarcolema y a través de
los túbulos-T se propaga con
gran rapidez desde la superficie de
la fibra hasta su interior.
Las moléculas de calcio que son liberadas

al sarcoplasma desde las cisternas terminales
del retículo sarcoplásmico di- funden a las
miofibrillas adya- centes y se fijan fuertemente
a las subunidades proteicas de troponina
C ocasionando un cambio conformacional en
el complejo troponina-tropomiosina con el
consiguiente desplazamiento de la
tropomiosina y exposición de los sitios de unión a
miosina del filamento de actina.
Desplazamiento del complejo troponina-

tropomiosina y exposición del sitio de unión a
miosina
Troponinas Cardíacas (cTn)
cTnI VR 0.03 - 0.08 ng/Ml
< 10 ug/L
 Varios ensayos disponibles. Varios fabricantes
absolutamente cardio-específica
• anticuerpos mono ó policlonales contra distintos

determinantes antigénicos: valor discriminativo
> 0.10 ng/mL = dañoymiocárdico menor y temporal
sensibilidad variable. Digestión proteolítica por enzimas lisosómicas, sin

ruptura de la membrana.
 > 1.00 ng/mL = daño miocárdico mayor
Necrosis: ruptura de la membrana celular del

cardiocito.
absolutamente cardio-
específica
cTnT   Empieza a elevarse: 4 - 6h

 ValorInternacional.
Patente máximo: 12 - 20h Ensayos de un solo fabricante.
•
VR 0- 0.1 ug/L  Se normaliza: 10 – 14d
3º generación: 2 anticuerpos monoclonales específicos
 Resultado cualitativo: (+) / (-)
cardíacos.
• Reaccionan conlaSemolécula de cTnTdializados
eleva en pacientes expresada
(poren tejido
regeneración
cardíaco adulto. muscular) y en ACVs.
• No reaccionan con las isoformas cTnT expresadas en

LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) VR : ♀ ♂ 100-200 U/L
Eritc = 100 veces que plasmas = Hemolisis ↑↑ (LDH) y en Ejerc exten .
LDH y IAM CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr
↑↑[LDHTOTAL ] y ↑↑[H4] 5-10 veces. Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días
Area ∝ Tamaño Infarto LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días
Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr
Diagnósticos diferenciales
LDH anemias hemolíticas, daño hepatocelular,
distrofia muscular, carcinomas, leucemias y necrosis
∴ , isoenzimas es de mayor significado.
Valor diagnostico limitado( es inespecífica)
.LDH-2 (H3M1) >LDH-1 (H4);
M4
Transaminasas com marcadores de daño hepático
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina
Transa- Gln Sintetasa MAYORIA
minasas -cetoácido ADP+ Pi+ H2O DE
TEJIDOS
NH4+ Gln Sintetasa
Glutamato
Glutaminas a CICLO DE URE
LA UREA
NH4+ Glutamina A
Glutamato
Glutamato DH
NH4+ -Cetoglutarato
Piruvato
(INT.) Transaminasa Asp
HIGADO
Glutamina Alanina
Transa-
minasas OAA
GLUCOSA +
AA Glutamato
Bacterias
GPT / ALT
Ala + α-cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Más específica de daño hepático
GOT / AST
Asp + α-cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
Tema 26
15
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (AST) VR : 8 a 20 U/L.
 Contenido tisular de AST, de > a <
 Localización: mitocondrial y citoplasmática
 Acción: cataliza la transferencia reversible del grupo  Músculo cardíaco
amino desde el aspartato al alfa-cetoglutarato.  Hígado, Músculo esquelético
Se eleva en:  Riñón, Cerebro, Páncreas
 Enfermedades hepáticas,Necrosis miocárdica  Bazo, Pulmón, Eritrocitos
 Necrosis del músculo esquelético
 Distrofia muscular y dermatomiositis
 Pancreatitis aguda,Embolia pulmonar
 Necrosis renal y cerebral,Hemólisis
 Ejercicio físico intenso
 opiáceos, salicilatos o eritromicina
 Empieza a elevarse: 6 - 8h
 Valor máximo: 18 - 24h
 Se normaliza: 4 – 5d
 No ventajas sobre la CPK y la LDH:
 No es específica del miocardio

 No aparece precosmente
 Se debe abandonar su uso
Transaminasas com marcadores de daño hepático
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina
Transa- Gln Sintetasa MAYORIA
minasas -cetoácido ADP+ Pi+ H2O DE
TEJIDOS
NH4+ Gln Sintetasa
Glutamato
Glutaminas a CICLO DE URE
LA UREA
NH4+ Glutamina A
Glutamato
Glutamato DH
NH4+ -Cetoglutarato
Piruvato
(INT.) Transaminasa Asp
HIGADO
Glutamina Alanina
Transa-
minasas OAA
GLUCOSA +
AA Glutamato
Bacterias
GPT / ALT
Ala + α-cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Más específica de daño hepático
GOT / AST
Asp + α-cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
Tema 26
15
PÉPTIDO NATRIURÉTICO CEREBRAL (PNC)
1.- péptido natriurético atrial (ANP) atrio cardiaco.
2.- péptido natriurético cerebral(BNP), cerebro y ventrículos cardiacos < 100 pg/ml
BNP-C activo (32 aa)y péptido inactivo (proBNP 1-76) Mejor marcador
3.- péptido natriurético tipo C (CNP). no es claro.
BNP activo es secretado por estiramiento excesivo cardiomiocitos retención

excesiva de sal y agua.
insuficiencia cardiaca congestiva ↑↑[ANP y BNP].
↑↑[ BNP]. Baja supervivencia
.
Perfiles enzimáticos en las enfermedades hepáticas
i. ALT ♂ 13-35 U/L y d ♀ en 10-30 U/L. HEPATIS TOXICA O VIRAL(300 a 1000 U/L).
ii. ↑[ALT y AST] enfermedad hepática, pero ALT>AST.(antes que la Ictericia)
iii. ↑[ALT ]moderado (50-100 U/L) en crónicas cirrosis, hepatitis C y esteatohepatitis
no alcohólica.
FOSFATASA ALCALINA (ALP) VR de 40-125 U/L(niños es elevado)
i. ALP no específica que hidroliza compuestos alifáticos, aromáticos o heterocíclicos.

El pH 9 a 10. Se activa Mg y Mn ,Zn.
ii. Osteoblastos(Ectoenzima) calcificación y transporte en hígado, riñon y mucosa intestinal.
iii. El (2-3 veces más) hepatitis infecciosas, hepatites alcohólica o carcinoma hepatocelular
iv. (10-12 veces por (ictérica obstructiva) La colestasis intrahepática infecciosa ) o por
drogas (clorpromazina).
v .(10-25 veces por arriba de los límites altos) enfermedad de Paget (osteítis deformante),
raquitismo, osteomalacia, osteoblastoma, carcinoma metastásico oseo e hiperparatiroidismo.
Nucleótido fosfatasa (NTP) VR 2-10 Ul/L
1. nucleotidasa 5'. Hidroliza nucleótidos 5' pH 7.5 Ni inhiben NTP pero no a ALP,
2. ectoenzima (enzima presente en la membrana celular).
3. Aumentada en hepatitis y muy eenn obstrucción biliar . No se altera en enfermedades oseas

Gama glutamil transferasa (GGT) VR 2-10 Ul/L
1. síntesis de glutatión (capítulo 15). GGT tiene11 isoenzimas. hígado, riñon,

páncreas, células intestinales y en la próstata.
2. Moderadamente elevada en hepatitis infecciosas y cánceres prostéticos.
3. La GGT clínicamente importante debido a su sensibilidad en
alcoholismo
Antígeno prostático especifico (PSA) VN 1-5 microgramos/L
1. epitelio secretorio glándula prostética. (licuefacción del coágulo seminal.
2. Es una serin proteasa, glucoproteína de 32 kD.
En sangre se fija a la macroglobulina alfa-2 y a
la alfa-1-antitripsina: también se encuentra una
pequeña fracción de la forma libre.
3. Arriba 10 microgramos/L cáncer prostático.
Colinesterasa (ChE)
i. Acetil colinesterasa actya en la acetilcolina (Term. nerviosas y GR
ii. ChE en GR ∝ [reticulocitos.]
AMILASA VR 50-120 Ul/L
1. almidón a maltosa. ( Ca + Cl) páncreas y en glándulas salivales.
2. 1,000 veces pancreatitis aguda. Pico 5-12 horas , normalidad 2-4 días
3. Orina < a 375 U/L aumenta en pancreatitis aguda.y permanece 7-10 días.
LIPASA (Secrecion pancreática)

Hidroliza los triacilglicéridos a monoacilglicéridos beta y ácidos grasos.
Alto pancreatitis aguda y persiste 7-14 días. (mas que amilasa.)
La lipasa no aumenta en las paperas.
moderadamente en carcinomade páncreas, enfermedades biliares y úlceras
pépticas perforantes.
Aldolasa (ALD) 1.5-7 U/L
tetramérica con subunidades A y B; 5 isoenzimas.
Aumentada distrofia muscular progresiva, poliomielitis, miastenia grave y esclerosis múltiple.
Indice temprano enfermedades musculares debilitantes.
Ceruloplasmina VR 25-50 mg/d

ferroxidasa
proteína de fase aguda, se eleva en enfermedades inflamatorias, enfermedades
del colágeno, tumores cancerosos y en embarazo.
< 20 mg/dl, es patognomónico de degeneración hepatolenticular de Wilson,
(toxicidad Cu
Uso terapéutico de las enzimas
Enzima Aplicación terapéutica
1.Asparaginasa Leucemia linfoblástica aguda

2.Estreptoquinasa lisis de coágulos intravasculares
3.Uroquinasa =
4.Estreptodornasa DNAsa; aplicada localmente
5.Pancreatina (tripsina y lipasa) Insuficiencia pancreática;
6. Papaína Antiinflamatorio
6.Alfa-1-antitripsina Deficiencia de AAT; enfisema
Tabla 23.5. Enzimas en otros líquidos corporales

Enzima Sign ificado clínico
Adenosin Elevado en la efusión de la

deaminasa en tuberculosis pleural, pero no en
fluido pleural la efusión de tumores malignos.
Los niveles elevados indican

LDH enasa en la presencia de tumor maligno.
CSF, fluido Pero no es diagnóstico ya que la
pleural, fluido enzima no es específica de un
ascítico tejido.

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Feduchi

ELENA FEDUCHI: Dra. Bioquímica y Biología Molecular. Acreditada

• Se dirijan hacia rutas útiles y necesarias según necesidades energéticas

 Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad.

 No se alteran en el proceso, no se modifican en su actuación.

 No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no

sustrato interacciona con el centro activo de la

UNION DEL SUSTRATO ETAPA CATALITICA

4. Liasas Descarboxilasas, aldolasas, hidratasas, deshidratasas, sintasas, liasas

5. lsomerasas Racemasas, epimerasas, isomerasas, mutasas

6. Ligasas Sintetasas, carboxilasas

 Código numérico encabezado por las letras EC (enzyme commission)

• El 1º indica a cual de las seis clases pertenece la enzima

• El 2º se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo((tipo de

• El 3º aspectos específicos de la reacción (sustrato, grupo funcional

• 4º se refieren alos grupos Químicos específicos que intervienen en la

C (ácido Coenzima de algunas peptidasas. Interviene en la síntesis de

Coenzima de las descarboxilasas y de las enzima que

B3 (ácido Fatiga y trastornos del

B5 (niacina) Constituyente de las coenzimas NAD y NADP Pelagra

Coenzima de las enzimas que transfieren grupos carboxilo,en

. Enfermedades asociadas a alteraciones del reconocimiento

© 2015, Editorial Médica

Centro activo complementario al estado de TRANSICION Y

energía de activación DG = DH - TDS

DG0 = -RT ln Keq

Las enzimas no alteran los equilibrios de reacción pero

En el equilibrio, DG = 0; por tanto,

La velocidad está relacionada con la energía de activación

1. formación de enlaces covalentes o la transferencia de grupos

© 2015, Editorial Médica

© 2015, Editorial Médica

EL centro activo ES complementario al estado de

(a) hexo- quinasa en ausencia de

El centro activo de las

(b) En presencia del sustrato, la

Catálisis por iones metálicos

 Factores que modifican la actividad enzimática

5. Efectores (Activadores e Inhibidores)

La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:

 La concentración de moléculas de sustrato

Las enzimas poseen una temperatura óptima a la cual la enzima presenta

 pH óptimo de actuación, a valores superiores o inferiores la velocidad disminuye.

 El pH del medio afecta:

Inhibidores: pequeña moléculas químicas o iones que interfieren con las

 Importantes para el estudio de:

 Mecanismo de acción enzimática

 Naturaleza del centro activo

 Identificación residuos fundamentales para la catálisis

 Determinación rutas metabólicas

Hay dos tipos de inhibidores enzimáticos:

 Reversibles: Unión no covalente de un inhibidor a la enzima

 Irreversibles: Unión covalente del inhibidor al enzima

Elementos naturales, tóxinas específicas, venenos, iones, fármacos

una reacción S➔P, la velocidad Vo se puede expresar como :

Desaparicion de sustrato Vo = d[S]/dt o Desaparicion de Producto Vo = d[S]/dt

A ↔ B: VA →B = k 1 [A] y VB->A=k_1[B] M•s- 1

equilibrio k1/k-1=[B]/[A] = : keq de la reaccion

Reacciones de segundo orden

Reacciones de orden cero

sustrato y aparición de producto

en una reacción catalizada

© 2015, Editorial Médica