CROMATOGRAFÍA

DE LÍQUIDOS
INTRODUCCIÓN

Cromatografía Cromatografía Cromatografía

de reparto de adsorción iónica

Cromatografía
Cromatografía
de exclusión
en capa fina
por tamaño
INICIOS
1. ERAN COLUMNAS DE VIDRIO CON DIÁMETROS DE 10 MM A 50MM
2. LAS LONGITUDES RELLENAS DE LA COLUMNA ERAN DE 50 A 500 CM DE PARTÍCULAS
SÓLIDAS CUBIERTAS CON UN LÍQUIDO ADSORBIDO QUE FORMABA LA FASE ESTACIONARIA.

3. PARA ASEGURAR TASAS DE FLUJO RAZONABLES A TRAVÉS DE ESTE TIPO DE FASE

ESTACIONARIA, LAS DIMENSIONES DE LAS PARTÍCULAS SÓLIDAS SE MANTENÍA EN MÁS DE
150 A 200 ΜM. PERO AUN ASÍ, LAS TASAS DE FLUJO ERAN BAJAS, DE UN MÁXIMO DE UNA
POCAS DÉCIMAS DE MILILITRO POR MINUTO.

4. SE TRATO DE MEJORAR POR APLICACIÓN DE VACÍO O POR BOMBEO. YA QUE POR EL

AUMENTO DE LA TASA DE FLUJO ORIGINABA UN AUMENTO DE ALTURA DE LOS PLATOS, POR
ENCIMA DE LAS GRAFICAS DE ALTURA Y ERA MENOR EFICIENCIA .

5. DISMINUIR EL TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS DEL EMPAQUE.

CAMPO DE APLICACIÓN DE LA HPLC

Sensibilidad

Adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas.

Idoneidad para automatizarla

Capacidad para separar especies no volátiles o termolábiles.

Amplia aplicabilidad a sustancias mas importantes.

 INSTRUMENTACIÓN PARA CROMATOGRAFÍA DE
LÍQUIDOS

• CON EL OBJETIVO DE ALCANZAR FLUJOS

RAZONABLES CON RELLENOS DE TAMAÑO DE
PARTÍCULA DE ENTRE 3 Y 10 ΜM, SE REQUIEREN
PRESIONES DE BOMBEO DE VARIOS CIENTOS DE
ATMÓSFERAS.

• SE REQUIEREN PRESIONES DE BOMBEO DE VARIOS

CIENTOS DE ATMÓSFERAS
RECIPIENTES PARA LA FASE MÓVIL Y
SISTEMAS PARA EL TRATAMIENTO DEL SOLVENTE
Recipientes de vidrio de 500 mL.

Sistema para eliminar gases disueltos y el polvo de líquidos.

Desgasificadores (Bombeo)

Sistema de destilación.

Dispositivo para calentar y agitar.

Sistemas de purga

Filtradores y para retirar el polvo

 ELUCIÓN

ELUCIÓN ISOCRÁTICA ELUCIÓN CON GRADIENTE

UTILIZA UN SOLO SOLVENTE O UNA MEZCLA DE • DOS SISTEMAS DE SOLVENTES Y ALGUNAS VECES
SOLVENTES DE COMPOSICIÓN CONSTANTE MÁS, QUE DIFIEREN DE MANERA NOTABLE EN
CUANTO A POLARIDAD Y VARÍAN EN
COMPOSICIÓN DURANTE LA SEPARACIÓN
SISTEMAS DE BOMBEO

Generación de presiones de 600psi o 414 bares.

Salida libre de pulsos

Tasas de flujo de 0.1 a 10mL/min

Reproducibilidad de flujo de 0.5% relativo o mejor.

Componentes resistentes a la corrosión.

BOMBAS RECIPROCANTES

• CONSISTE EN UNA PEQUEÑA CÁMARA EN LA QUE EL SOLVENTE ES IMPULSADO POR EL

MOVIMIENTO DE VAIVÉN DE UN PISTÓN MEDIANTE UN MOTOR.

• DOS VÁLVULAS DE GLOBO UNIDIRECCIONALES, QUE SE ABREN Y CIERRAN DE MANERA

ALTERNADA, CONTROLAN EL FLUJO DEL SOLVENTE HACIA DENTRO Y HACIA AFUERA DE UN
CILINDRO.

• TIENEN LA DESVENTAJA DE PRODUCIR UN FLUJO PULSADO QUE SE TIENE QUE AMORTIGUAR

PORQUE LOS PULSOS SE MANIFIESTAN COMO RUIDO EN LA LÍNEA BASE DEL CROMATOGRAMA.

• ENTRE LAS VENTAJAS DE LAS BOMBAS RECIPROCANTES SE PUEDEN CITAR SU PEQUEÑO

VOLUMEN INTERNO (35 A 400 ΜL), SUS ALTAS PRESIONES DE SALIDA (HASTA 10 000 PSI), SU
FÁCIL ADAPTACIÓN A LA ELUCIÓN CON GRADIENTE, SU GRAN CAPACIDAD DE SOLVENTE Y
SUS FLUJOS CONSTANTES, QUE SON PRÁCTICAMENTE INDEPENDIENTES DE LA CONTRAPRESIÓN
DE LA COLUMNA Y DE LA VISCOSIDAD DEL SOLVENTE.
 BOMBAS DE DESPLAZAMIENTO

• CONSISTEN EN UNAS GRANDES CÁMARAS SIMILARES A LAS DE UNA JERINGA, EQUIPADAS

CON UN ÉMBOLO QUE SE ACTIVA POR UN MECANISMO DE TORNILLO ACCIONADO POR UN
MOTOR.
COLUMNAS
Columnas para líquidos
•Precio entre 200 a más de 1000 dólares.

Columnas analíticas
•Miden entre 5 y 25 cm de largo.
•Diámetro interno es 3 a 5 mm
•Rapidez (Separación de 8 componentes distintos en 15segundos.)

Pre columnas
•Elimina la materia en suspensión y los contaminantes de los solventes, y los componentes de la
muestras.
Control de la temperatura
•El control de la temperatura es esencial para lograr separaciones.
 DETECTORES
•Para aquellos solutos que absorben alguna de estas longitudes de onda.
Absorción ultravioleta con filtros

•Consisten en un espectrofotómetro de barrido

Capacidad de barrido. •con una red entre sus componentes ópticos.

•Existen 2 tipos de instrumentos.

Infrarrojo

•Tiene una alta sensibilidad

fluorescencia

•responden a casi todos los solutos, pero sensibles al cambio de

Índice de refracción temperatura.

•Es uno de los mas recientes y respuesta es casi igual para todos los
Dispersión de la luz tras evaporación solutos no volátiles.

• Elevada sensibilidad, sencillez, conveniencia y una extensa

Electroquímicos aplicabilidad.

•La combinación de la cromatografía de líquidos con la espectrometría

Espectrométricos de masas de masas parecería ser una fusión idea de separación y detección
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO

FASE NORMAL FASE INVERSA

• UTILIZA FASES ESTACIONARIAS DE ELEVADA • LA FASE ESTACIONARIA ES NO POLAR, CON
POLARIDAD, COMO EL AGUA; COMO FASE FRECUENCIA UN HIDROCARBURO, Y LA FASE
MÓVIL SE EMPLEABA UN SOLVENTE MÓVIL ES UN SOLVENTE RELATIVAMENTE POLAR,
RELATIVAMENTE NO POLAR, COMO EL HEXANO COMO AGUA, METANOL.
APLICACIONES

CAMPO MEZCLAS
FÁRMACOS Sedantes, esteroides, analgésicos.
BIOQUIMICA Proteínas, lípidos, carbohidratos.
• PRODUCTOS ALIMENTICIOS Edulcorantes artificiales, aditivos.
INDUSTRIA QUÍMICA Colorantes, Aromáticos,
CONTAMINANTES Plaguicidas, fenoles
CIENCIAS FORENSES Fármacos, venenos, narcóticos.
QUIMICA CLINICA Extractos de orina.
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN

Descripción Fases

•Forma clásica de •Sílice y la alúmina

cromatografía de finamente dividida.
líquidos que introdujo
Tswett por vez primera a
principios del siglo XX.
CROMATOGRAFÍA IÓNICA

Descripción Aplicaciones

• Separar y determinar • Fármacos y sus

iones en columnas metabolitos, sueros,
con relativamente conservadores,
baja capacidad de mezclas de vitaminas,
intercambio iónico o azúcares y
aniónico. preparaciones
farmacéuticas.
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN
POR TAMAÑO

Descripción Relleno de columna Aplicaciones

• Compuestos de • Son cuentas • Separación de las

elevada masa poliméricas y moléculas de
molecular. partículas de sílice; elevada masa
• Rellenos de en ambos casos los molecular,
pequeñas diámetros oscilan
partículas (10 μm). entre 5 y 10 μm.
 CROMATOGRAFÍA POR AFINIDAD

Descripción Aplicación Fundamentos

• Rápida. • Industria • Preparación de

• Mejor resolución. farmacéutica placas
• Sensible. • Laboratorios clínicos • Aplicación de la
• Estudios muestra.
Bioquímicos y • Desarrollo o
biológicos. creación de la
placa
• Ubicación de los
analitos en la placa