Universidad Nacional de La Rioja

Cátedra: Anatomohistología
Carrera: Farmacia y Bioquímica
Año:2018
Prof. Dra. Noemí Díaz
 EQUIPO DE CÁTEDRA:

• ADJUNTO: Irma Noemí Díaz

• JTP: Karina Ávila

Antonella Taborda
Valeria Rubano
CLASES TEÓRICAS
• Se dictarán el día Martes 10 hs.
• Son de Asistencia OBLIGATORIA
• 80%

CLASES PRACTICAS:
• Martes 18 hs Sala de Microscopia
• 14 hs Morgue
• Son evaluables
• Hospital de Clínicas de Fátima
HISTOLOGIA
 Definición
• Del Griego: Histo: tejido y logia : conocimiento
• Estudia la organización estructural de los
organismos mediante el uso de microscopios.
 Ciencias que se relacionan
• Anatomía macroscópica: Ciencia que estudia
las estructuras del cuerpo humano y las
relaciones entre si
• Embriología
• Fisiología
• Química
• Biología celular
NIVELES DE ORGANIZACION
¿ Como se estudia la Histología?
• Preparación histológica o
tratamiento previo los tejidos
y células

• Microscopio
 TECNICA HISTOLOGICA
• Procedimientos que permiten finalmente de
una preparación histológica para ser
examinada en el microscopio.

• Objetivo: preservar la estructura y

organización de las células y tejidos
OBTENCION DE LA MUESTRA:
Sección: no mas 3-4 mm espesor
 TECNICA HISTOLOGICA
2- FIJACION:
 Preserva las características morfológicas y
moleculares lo mas parecido a las que
poseía en estado vivo
 Dureza
 Fijador: formol o formalina
 Solución acuosa de un gas, la aldhehida
formica
 24-48 hs, cambio de color (blanco grisaceo:
cocido)
• Sección Micrótomo: cuya platina se enfría por
debajo de 0°.
• Los cortes son inmediatamente coloreados
• Diagnostico durante un acto quirúrgico
 TECNICA HISTOLOGICA
3- INCLUSION EN PARAFINA
Mezcla de hidrocarburos
saturados que se obtiene
como producto residual
destilación petróleo

Blanca, untuosa, solida

No es miscible con el agua

a) Deshidratación
b) Aclaración
c) Parafina
Xilol o benzol:
• Muy miscible con el alcohol
• Aclara o transparenta el tejido
• Facilita la penetración de la parafina fundida
 CORTE
Micrótomo(del griego mikros:
"pequeño", y tomo: "parte" o
"división") es un instrumento de
corte que permite obtener
rebanadas muy finas de
material, conocidas como
secciones
8um

Cortes obtenidos se recogen caja de papel negro

• Portaobjeto
• Capa albumina o gelatina
 TECNICA HISTOLOGICA
5- TINCION
Balsamo de
Canada
6- MONTAJE
 TECNICA HISTOLOGICA
5- MONTAJE
 Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración
La Eosina es un colorante ácido (anionico), se asocia y colorea a estructuras
catiónicas del citoplasma y matriz extracelular: filamentos citoplasmáticos (como los
de células musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus
aminoácidos básicos ionizados). Colorante citoplasmático por excelencia

La Hematoxilina actua como un colorante

básico, por lo cual se asocia y colorea estructuras
aniónicas (que posean fosfatos (acido nucleico),
sulfatos ( glucosaminoglucanos)y/o carboxilos
ionizados (proteina):
•Heterocromatina y nucléolos
•RNA ribosomal
•Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)
•Colorante nuclear por excelencia
 Acido Peryodico de Schiff
• Identificación macromoléculas con hidratos de
carbono
• Membrana basal
• Rojo magenta
 Tricromicos
• Fibras colágenas y elásticas
• Se observan colores distintos: TC (verde),
Tejido Muscular (verde pardo), eritrocitos
(rojizo), núcleos (azul negro), citoplasma y
fibras musculares (rosa)
 Giemsa
• Se emplea mucho en
hematología
• Permite distinguir los
gránulos de los diferentes
leucocitos
polimorfonucleares.
• Contiene mezcla de
colorantes catiónicos ( azul
de metileno) y anionicos
(eosina)
 Impregnación Argentica
Fibras reticulares y nerviosas
Pardo/ negro
 Orceina
• Fibras elásticas
• Pardo oscuro
 TECNICA DE MICROSCOPIA ELECTRONICA:
1- Utilizar fragmentos de menos de 1mm.
2- Proceder más rápidamente a la fijación, con tetróxido de osmio,
aldehído glutárico o glutaraldehido.
3- Deshidratación.
4- Inclusión en resinas epoxi quedan la dureza necesaria para obtener los
cortes finos que la observación exige.
5- Cortar con ultramicrotomo de avance muy lento y cuchillas de vidrio o
diamante.
6- Recepción de los cortes en agua, luego en rejilla de cobre y recubierta
por una delgada película plástica, la que será la que sostenga el corte.
7- Pasaje por ácido osmico, acetato de uranilo, sales de plomo, etc.
8- Observación en pantalla fluorescente.
9- Toma de fotografías y ampliaciones.
MICROSCOPIA
• Siglo XVII el conocimiento de la estructura o
morfología se hizo posible mediante
instrumentos de magnificación: Microscopios
• Lupa: lente convergente de corta distancia
focal que da imágenes aumentadas.
• Microscopio compuesto: da imágenes
invertidas. Tres tipos lentes: ocular, objetivo y
condensador.
• Campo Claro: la muestra se observa más
oscura que el campo que la rodea
Descripción del
microscopio

1- Parte óptica:
• Ocular.
• Objetivo.
• Sist. De iluminación.
2- Parte mecánica:
1- Pie.
2- Columna.
3- Tubo.
4- Mecanismo de
movimiento.
5- Platina.
 Oculares
Cilindro hueco metálico, lente o un sistema de lentes
convergentes, aumentar la imagen real e invertida enviada por
el objetivo.
Están colocados en la parte superior del tubo.
Poseen un aumento de 10x, 15x y 20x.
 Objetivo
 Están colocados en el
revolver.
 Un anillo coloreado
indica los aumentos.
 Poseen un aumento de
4x, 10x, 40x y 100x
aumentos.
 Rojo
4x

Amarillo
10x

Blanco
100x
(Inmersión)

Azul
40x
 Aumento
 Se calcula multiplicando el aumento del objetivo
por el aumento del ocular.

40 x 10 x 400x
 Poder de resolución

 Capacidad para discriminar dos puntos separados

entre si, por una distancia mínima. Capacidad lente
distinguir los mas finos detalles

 Ojo humano: PR: > 0,1mm

 MO: 0,2 um= 0.001mm

 ME: 0,4 nm: 1nm=0,001um

 Depende de: la long. de onda (λ) y de la apertura numérica (AN).

 Poder de resolución

MO: aumenta la resolución de los objetos unas 500 veces

con relación a la vista directa

ME: 500 veces con respecto al microscopio óptico.

 Sistema de Iluminación:

Fuente de luz
Dirige los rayos luminosos
hacia el condensador.

Condensador
Lente convergente que
concentra los rayos luminosos
sobre la preparación.
Diafragma
Regula la cantidad de luz
que entra en el condensador.
 Fuente de luz

 Suele ser una lámpara halógena

de intensidad graduable.
 Se enciende y apaga con un
interruptor.

graduación
de la luz

lámpara Interruptor
Parte mecánica:

También
denominado estativo
o montura del
microscopio.
Se compone de las
siguientes partes:
1- Pie.

2- Tubo..

3- Columna

4- Mecanismo de
movimiento.

5- Platina.
Mecanismo de movimiento:
Para facilitar el
desplazamiento del
tubo y lograr un
enfoque correcto

Tornillo
micrométrico
Tornillo
macrométrico

Aproxima el
enfoque,
permite un Se logra el
enfoque rápido enfoque exacto
de la y nítido de la
preparación. preparación
TIPOS DE MICROSCOPIOS
 Microscopio de fluorescencia

•La observación se realiza con luz ultravioleta

•Se emplean sustancias naturales de la célula o colorantes que

tienen la capacidad de absorber determinadas longitudes de
onda, y emitir luz fluorescente.

•En la práctica la luz ultravioleta se enfoca sobre el espécimen,

la luz es absorbida por ciertas estructuras, que luego la emite
dentro de la banda visible.
 Un colorante fluorescente azul
para teñir el ADN

Anticuerpo acoplado a una Anticuerpo acoplado a una

proteína fluorescente roja para proteína fluorescente verde para
detectar a los centrómeros detectar a los microtúbulos
 Microscopio de luz ultravioleta
• Emplea luz ultravioleta, long de onda
menos de la mitad de la long de onda de
la luz visible, lo que permite poder
aumentar el poder de resolución del
objetivo
• La imagen se registra en películas
fotográficas dado que la luz ultravioleta
es invisible, y la muestra no puede
inspeccionarse en forma directa a través
del ocular ya que lesiona el ojo.
• Posee una resolución mayor que el
microscopio óptico.
• Útil: detección ácidos nucleicos,
proteínas
 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE
FASE:
• Se basa en modificaciones de la
trayectoria de los rayos de luz,
los cuales producen contrastes
notables en la preparación.
• Permite observar células sin
colorear
• Útil para células vivas.
• Se puede utilizar para ver
parásitos y bacterias en cortes
histológicos, y para objetos
transparentes y no coloreados
(sedimento urinario).
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO:

• Utiliza una luz muy intensa en forma de cono hueco sobre el

espécimen.
• Condensador, hace que los rayos luminosos no penetren
directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la
preparación.
• Las porciones claras aparecen como un fondo oscuro y los objetos
minúsculos que se están analizando aparecen como una luz
brillante sobre el fondo.
• Se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin
manchas, invisibles con iluminación normal.
• Cristales orina, espiroquetas: treponema pallidum
 Microscopio de campo oscuro

La muestra se observa brillantemente

iluminada sobre un fondo oscuro.
 Microscopio confocal

• Emplea sistema de iluminación con rayo láser

• Utiliza un sistema de espejos para mover el rayo láser a través del
espécimen, iluminando un solo punto por vez.
• Se registran los datos de cada punto de la muestra y se guardan
en una computadora.
• Luego se puede llevar la imagen a un monitor de alta resolución.
• Se pueden tomar imágenes.
• Las regiones fuera de foco se restan de la imagen mediante un
programa para dar una definición máxima a la imagen.
• Crear imágenes múltiples a diferentes profundidades dentro del
espécimen y realizar reconstrucciones tridimensionales.
 Microscopio Electrónico
• Alto poder de resolución nos permite ver y conocer la
ultraestructura de la célula.
•Las lentes son remplazadas por bobinas electromagnéticas.
•La fuente de energía: haz de electrones.
•Los electrones son invisibles y la imagen que forman se
observa en una pantalla fluorescente o se registra
fotográficamente.
•Se requiere el máximo de delgadez del espécimen para la
mejor absorción de los electrones y para que estos puedan
atravesarlos.
•Los cortes se logran con el ultramicrotomo
• Los instrumentos modernos permiten
aumentos de más de 160.000 veces, que
mediante amplificaciones fotográficas
pueden aumentarse más de 1.000.000
de veces.
 PASOS A SEGUIR PARA USO CORRECTO DEL MICROSCOPIO:

1. Conectar el microscopio a la corriente eléctrica.

2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y
bajar la platina completamente.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas
metálicas.
4. Encender la fuente de luz con la intensidad mínima y se va
aumentando poco a poco.
5. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en
posición).
 PASOS A SEGUIR PARA USO CORRECTO DEL MICROSCOPIO:

6. Para realizar el enfoque:

• Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación,
empleando el tornillo macrométrico ( Mirando directamente y no a
través del ocular, se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparación y dañar ambos).

• Mirando, a través de los oculares, ir separando lentamente el

objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se
observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener
un enfoque fino.

7. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi

enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico
para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operación desde el paso 5.
Muchas gracias
por su atención!