CINETICA ENZIMATICA Y

CINETICA MICROBIANA
IGUALDAD Y DIFERENCIAS
TERMODINAMICA Y CINETICA

• IMPORTANCIA……….
• La glucosa isomerasa se utiliza para la producción de jarabe de fructosa
(gaseosas carbonatadas). La reacción es :
glucosa fructosa
Para esta reacción ΔH°rxn = 5.73 KJ / mol y ΔS°rxn = 0.0176 KJ/mol-°K
a)Calcular la cte. de equilibrio a 50 y 75°C
b)Una compañía desea desarrollar una mezcla mas dulce de
azucares, es decir con mayor concentración de fructosa.
Considerando únicamente el equilibrio ¿Seria mejor realizar la
reacción a 50 o a 75°C?
Catálisis enzimática

• Desde el punto de vista:

a) estructural: son proteínas
b) cinético: son catalizadores

Para llegar a b) hay que conocer muy bien a)

i.e: que AA están presentes su cadena polipeptidica,
 Acerca de la termodinámica…….

C A
A N
T A
A B
B O
O L
L I
I S
S M
M O
O
Acerca de la cinética……
Como catalizadores……..

• Cuando su estructura tienen asociado un metal o vitamina, se les

llamara: COFACTORES.
• Y si se asocia posteriormente a una parte proteica: APOENZIMA
• POR LO TANTO:

• COFACTOR(GRUPO PROSTETICO) + APOENZIMA = HOLOENZIMA

BIOCATALISIS……en un proceso industrial……

• VENTAJAS: a) Alta especificidad

b) Alta actividad en condiciones moderadas
c) Alto # de rotación
d) Biodegradabilidad
• DESVENTAJAS: a) Complejidad molecular
b) Alto costo de producción
c) Labilidad
Falla en catálisis: desnaturalización de una
enzima

• Perdida de actividad biológica

• Desplazamiento terciario, desviándose del sitio activo
• Envenenamiento
• Contaminación ambiental
• Estress
• Sedimentación
ACTIVIDAD ENZIMATICA..según la Unión
Internacional de Bioquímica

• La cantidad de enzima que cataliza la transformación de una

micromol(µm) de sustrato/min , en condiciones standard de T, PH
y concentración de sustrato optima.

UI = 1 µm(producto formado) / min 1 Katal = 1 mol producto formada / seg

Actividad especifica: UI / mg proteína

Katal / mg proteína
Catalizadores en procesos industriales

• Para: a) Hidrolasas extracelulares

b) Sin coenzimas disociables
c) Biocatalizadores solubles
d) Medio de reacción acuoso
e) Rxn irreversibles
Micaelis-Menten, Hipotesis Briggs-Haldane

• Determinacion de los parámetros cinéticos:

• Por regresión lineal
• Por regresión no lineal
• La mejor: No Lineal
• Dentro de la lineal: a) Lineweaver-burk
b) Headdie-Hoftee
c) Hanes
Aplicaciones con Ecuaciones diferenciales

• Ecuaciones diferenciales de primer orden.

• Ecuación de variables separables(EVS)
CONSIDERACIONES EN LOS PARAMETROS
CINETICOS
• Km : Refleja la afinidad de la enzima por ese sustrato.
km es numéricamente igual a la concentración de sustrato a
la cual la velocidad de reacción es la mitad de la Vmax (km =
Vmax/2). km no varía con la concentración de enzima.
• Km pequeña: un valor numérico pequeño de km refleja una alta
afinidad de la enzima por su sustrato porque a una baja
concentración del mismo, la enzima a desarrollado ya la
mitad de la velocidad máxima.
• Km grande: el valor numérico grande de la km refleja una baja
afinidad de la enzima por su sustrato porque a una
concentración elevada del mismo, la enzima desarrolla la
mitad de la velocidad máxima.
• Relación de la velocidad con la concentración de enzima: la
velocidad de la reacción es D.P a la [ ] de la enzima a cualquier
concentración de sustrato.
Por ejemplo, si la concentración de enzima es disminuida a la
mitad, la velocidad inicial de la reacción (V0) es reducida
también a la mitad de la original.

• Orden de la reacción: cuando [S] < km, la velocidad de la reacción

es aproximadamente igual a la [ ] del sustrato.
Problema 1
• ß-galactosidasa, cataliza la hidrolisis de la lactosa en glucosa y
galactosa y es ampliamente utilizada en la industria láctea.
Una preparación de ß-galactosidasa comercial de Klyveromyces
marxianus ver lactis esta siendo utilizada en la producción de
leche de baja lactosa.
Es conocido que 500 UI de ß-galactosidasa / litro de leche, se
requiere para reducir el contenido de lactosa en la leche en
un 80% durante almacenamiento (es considerado
satisfactorio) y usted debe de calcular el requerimiento de
enzima deseada( mlt de preparación enzimática para ser
adicionada por litro de leche.
……..
• Para hacer esto, la actividad de ß-galactosidasa de la preparación
enzimática se debe de determinar.
El ensayo enzimático se basa en determinar la glucosa en un
sistema de HPLC con un detector de índice de refracción.
El procedimiento consiste en adicionar 0.3 mlt de la preparación
enzimática, diluida 3 veces, a 1.2 mlt de 150 gr/lt de
solución de lactosa e incubando la mezcla a 35°C con un PH =
6.4.
Las muestras se toman en diferentes tiempos de reacción y
sujetas a inactivación enzimática por calentamiento en Agua
hirviendo y luego filtrando antes del ensayo de HPLC
 ……….

• Se obtuvieron esos resultados, que nos ayudaran a obtener la

actividad enzimática.
T(min) 0 2 4 6 8 12 18 26 36 48
G(mM) 0 150 307 461 597 912 942 976 999 1015
Problema 2
• Un extracto crudo de glucosa isomerasa se ha obtenido después
del cultivo de streptomyces flavogriseaus y la disrupción celular
en un homogenizador.
La enzima cataliza la isomerización reversible de glucosa a
fructosa. Una muestra de 1 mlt de este extracto, diluido como se
indica en la tabla, se puso en contacto con 4 mlt de 0.1 M de
glucosa en solución.
La concentración de glucosa se monitoreo durante la Rxn y se
obtuvieron los sgtes resultados:
……..

Concentración de glucosa gr / litro

T rxn (min)
Dilución 1:50 Dilución 1:100

0 14.40 14.40
2 13.91 14.15
4 13.58 13.91
6 13.27 13.64
8 13.04 13.46
10 13.03 13.34
Calcule la actividad de la glucosa isomerasa en el extracto crudo expresándolo en UI / mlt
CINETICA DE INHIBICION ENZIMATICA

• UN GRUPO DE 4 PERSONAS, TIEMPO DE PONENCIA : MAX 20 MIN

• # DIAPOSITIVAS : 20 MIN
• ROL DE PREGUNTAS, SE EVALUARÁ Y CONTABILIZARÁ