INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Departamento de Bioquímica
Métodos de Análisis

CROMATOGRAFIA DE REPARTO
5QV1

Catedrático: Dra. Guillermina Rosas Sandoval

 ¿Qué es una Cromatografía de
Reparto?
Cromatografía basada En donde la fase estacionaria:

fundamentalmente: Soportada sobre

Reparto o un sólido inerte
distribución de los
soluto entre dos
líquidos: fase móvil y
fase estacionaria
inmiscible
¿Cómo es que se separa el
analito?
De manera genérica, en las

DIFERENCIAS DE
SOLUBILIDAD QUE
TIENE EL ANALITO
CON LA FASE
MÓVIL Y FASE
ESTACIONARIA.
 Liquido-
liquido
Cromatografía
de Reparto
Liquido-fase
enlazada
¿Cuál es la diferencia entre estas dos ?
Radica en la manera en la que la fase estacionaria se
mantiene en las partículas del soporte
 Liquido-liquido  Liquido-fase enlazada
Empacamientos de fase enlazada

 En la superficie de las partículas de sílice, mediante la hidrólisis de ácido

clorhídrico diluido caliente, se forman –OH´s
 Un organoclorosilano reacciona con los grupos –OH

Modelo molecular de Octadecil

silano
 Grupo isobutil
volimunoso
protege los
enlaces
siloxanos de
una hidrolisis
de pH bajos.

Siloxano (Si-O-SiR) enlace hidrolizándose debajo de pH 2

 Aminas alifáticas
Otros grupos Éteres
muchas polaridades
funcionales Nitrilos
orgánicos Hidrocarburos aromáticos.
ESTABLECIMIENTO DEL MÉTODO EN
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO
 ELECCIÓN DE LA FASE MÓVIL Y
ESTACIONARIA

Fase
Fase Polaridad estacionaria
móvil y el analito
 Fase
Analito y fase móvil
estacionaria

• La fase estacionaria no puede competir por

los componentes de la muestra
• Por lo tanto los tiempo de retención se
vuelven muy cortos para tener una
aplicación practica.
• En el caso anterior los tiempos de retención
son extraordinariamente largos.
 POLARIDAD
Propiedad de las moléculas que representa la
separación de las cargas eléctricas dentro de la
molécula, según el número y tipo de enlaces que
posea.
 EFECTO DEL DISOLVENTE

En las separaciones se
Los disolventes que emplea una mezcla de
interaccionan agua y un disolvente
fuertemente con los orgánico polar.
solutos de La capacidad de
denominan retención se manipula
disolventes polares fácilmente variando la
concentración de agua.
 POLARIDADES RELATIVAS DE LA
FASE MÓVIL Y ESTACIONARIA

Cromatografía Cromatografía
en fase normal en fase inversa
CROMATOGRAFIA EN FASE NORMAL
o Fase estacionaria de
elevada polaridad o El componente menos
polar se eluye primero
o Fase móvil se o Si aumenta la
empleaba un polaridad de la fase
solvente móvil ocasiona una
relativamente no disminución del tiempo
polar de elución.
FASE ESTACIONARIA POLAR FASE ESTACIONARIA APOLAR

Solventes muy apolares:

 Hexano
Sílica con grupo:  Heptano

Grupo ciano Mezclados con disolventes mas

Diol polares:
Amino  Isopropanol
 Cloroformo
Dietilamino  Etilacetato

La fuerza de elución de la fase

móvil se modifica con n-hexano
 CROMATOGRAFIA DE FASE INVERSA

Con la cromatografía de fase

La fase estacionaria es no
inversa, los componentes más
polar, con frecuencia un
polares aparecen primero y un
hidrocarburo, y la fase móvil
aumento de la polaridad de la
es un solvente relativamente
fase móvil incrementa el
polar, como agua, metanol,
tiempo de elución
acetonitrilo o
tetrahidrofurano.
Los rellenos de fase unida químicamente se
llaman de fase inversa cuando el
revestimiento enlazado tiene un carácter
no polar

La principal ventaja de las separaciones en

fase inversa es que el agua se puede utilizar
como fase móvil
BIBLIOGRAFIAS

 Skoog, Duglas A.; F. James Holler; T. A. Nieman. 2001. Principios de Análisis

Instrumental. 5a ed., Editorial Mc Graw Hill Interamericana de España,
Madrid, España.
 Skoog, Duglas A.; F. James Holler; T. A. Nieman. Quimica analítica
 https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/2015/08/14/cromatografia-de-
reparto/
 http://slideplayer.es/slide/10546386/
 J. G. Dorsey y W. T. Cooper, Analysis Chemical, 1994, No. 66, p. 857, DOI:
10.1021/ac00089a002.