TINCIÓN CON HEMATOXILINA Y EOSINA

TEORIA Y FUNDAMENTOS DE LA TÉCNICA

TÉCNICAS DE TINCIÓN EN HISTOLOGÍA: GENERALIDADES

 Colorantes histológicos:
 Antecedentes históricos.
 Naturales o artificiales.

 Naturaleza química de los colorantes.

 Un compuesto químico es coloreado porque sus moléculas absorben cuantos de radiación electromagnética
en la parte visible del espectro.
 Moléculas orgánicas dobles enlaces se alternan con enlaces sencillos para formar sistemas
conjugados En éstos, los electrones del enlace se mueven de un átomo al otro cambiando las posiciones
del enlace simple y sencillo.
 En una molécula cíclica se produce una estabilización gracias a la resonancia todos los enlaces sean
equivalentes. Se dice que estas moléculas cíclicas estabilizadas tienen carácter aromático.
 Colorantes moléculas orgánicas que presentan anillos aromáticos y que absorben la luz
visible por efecto de los electrones asociados a combinaciones de átomos «cromóforos»

 Moléculas con anillos aromáticos que han adquirido un grupo cromóforo «cromógenos».

 El cromóforo es el radical químico incorporado a una molécula orgánica y responsable del color.

Para que el colorante pueda

teñir un tejido debe ser capaz de
unirse a las estructuras celulares.

El elemento químico
que le confiere esta capacidad se
denomina
«grupo auxocromo»
Relación colorante-sustrato

 La proporción de moléculas del colorante que quedan unidas al tejido es baja en relación con todas las que se
emplean en la tinción.
 Tinción progresiva y tinción regresiva
 Exito de toda tinción histológica depende de la capacidad que tienen los colorantes de unirse selectivamente,
y con diversa afinidad, a unas estructuras del tejido y no a otras.

Relaciones Importantes para atraer diferencialmente moléculas

colorantes de carga opuesta presentes en una solución en la
electrostáticas. que hay una mezcla de colorantes de distinta carga.
fisico-químicos
Fenómenos

Enlaces Mordiente: iones metálicos capaces de unirse

covalentemente a algunos colorantes para formar complejos;
coordinados. sirve para unir un colorante a un sustrato.

Enlaces Inmunohistoquímica o hibridación in situ;

covalentes. isotiocianatos
 Metacromasia
 La mayoría de los colorantes son ortocromáticos colorean el tejido con su propio color.
 Algunos tiñen las estructuras de un color que no es el original del colorante iones del colorante
unidos al sustrato cambian la longilongitud de onda de absorción de luz.

Tipos de
colorantes

Según estructura
Según grupo
química y grupo
auxócromo
cromóforo

Básicos o
Acidos o aniónicos Nitrados Derivados diversos
catiónicos

Azoicos
H&E: GENERALIDADES

 Tinción general
 Tinción más utilizada en morfología compatible
con todas las fijaciones.
 Contiene un colorante para las estructuras ácidas
como el DNA y RNA (hematoxilina-alumbre de
hemateína) y otro colorante ácido para el
citoplasma y estructuras extracelulares de
carácter básico (eosina).
 Existen diferentes tipos de hematoxilina-eosina
(H-E) en función de la hematoxilina utilizada y del
mordiente.
H&E: FUNDAMENTO

 La molécula de hematoxilina es
incolora y requiere ser oxidada
para convertirse en una molécula
coloreada que entonces recibe el
nombre de «hemateína»
 La hematoxilina (después de ser
oxidada y combinada con el
mordiente) tiñe los ácidos
nucleicos de tonos diversos de
azul-violeta, en función del
protocolo utilizado.
 La eosina tiñe de rosa las proteínas
básicas del citoplasma y del medio
extracelular.
HEMATOXILINA

 Tallo del árbol Haematoxylon campechianum.

 Oxidación natural y química
 Se añade un oxidante químico (hematoxilina de Harris [HgO], hematoxilina de Mayer [NaI03]).
 La hemateína posee poca afinidad por los tejidos; por ello las hematoxilinas requieren siempre de un mordiente,
que generalmente consiste en sales de aluminio o, en casos más especiales, hierro, cobre o plomo.
 El color de la tinción cambia en función del mordiente utilizado.
 Hay más de 40 protocolos distintos para la tinción de hematoxilina.
 La solución de
hematoxilina oxidada
(hemateína) e iones
Alumínica Sales de aluminio
Al+3 forman el reactivo
de la tinción, la
hemateína alumínica.

Plúmbica Glándulas endócrinas

Tipos de tinción
de hematoxilina

Férrica Sales de hierro

Teñir la estriación del

Tungsténica músculo, células de la
glía, cilios.
EOSINA

 Derivado halogenado del xanteno.

 2 tipos de eosinas en función del número de átomos de bromo que posean: la eosina Y, con cuatro
átomos de bromo por molécula de eosina y la eosina B, con dos átomos de bromo por molécula de
eosina.
 Molécula autofluorescente por sus átomos halógenos y es soluble en agua y en alcoholes.
 Presenta carácter ácido interacciona con las proteínas básicas del citoplasma, tono
rosa.
H&E: TÉCNICA DE TINCIÓN
Bibliografía

1. Montuenga B, L.; Esteban R., FJ; Calvo G., A. Técnicas en histología y biología cellular. Elsevier España, 2014: 2da ed.
432 págs.
II. Torres Seco, Fernando. Manual de técnicas en histología y anatomía patológica. Editorial Ariel, Barcelona 2002: 1ra
ed. 147 págs.