EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD

ANTIMICROBIANA DE LAS NANOPARTÍCULAS

DE PLATA SINTETIZADAS A PARTIR DE
Coriandrum sativum

LUISA FERNANDA BARRAZA VERGARA

INGENIERÍA QUÍMICA

UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

9 DE ABRIL DE 2018
TABLA DE CONTENIDO 1 2 3 4 5 6 7 8 9

CONTENIDO

1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. ESTADO DEL ARTE
4. JUSTIFICACIÓN
5. METODOLOGÍA
6. RESULTADOS OBTENIDOS
7. RESULTADOS ESPERADOS
8. CONCLUSIONES
9. BIBLIOGRAFÍA
1. INTRODUCCIÓN 2 3 4 5 6 7 8 9

INTRODUCCIÓN

NANOTECNOLOGÍA

NANOPARTÍCULAS
DE PLATA

NANOMATERIALES

 Staphylococcus aureus
AGENTES  Pseudomonas aeruginosa
MICROBICIDAS  Klebsiella pneumoniae
1 2. OBJETIVOS 2 4 5 6 7 8 9

OBJETIVO GENERAL Evaluar la actividad antimicrobiana

de las nanopartículas de plata
(AgNPs) usando como precursor
nitrato de plata y como agente
reductor Coriandrum sativum.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS  Sintetizar nanopartículas de plata utilizando extracto de

cilantro como agente reductor.
 Evaluar el efecto de la concentración de nitrato de plata
sobre el tamaño de las nanopartículas de plata.
 Evaluar la actividad antimicrobiana de las AgNPs sobre
las bacterias P. aeruginosa y K. pneumoniae y S. aureus.
1 2 3. ESTADO DEL ARTE 4 5 6 7 8 9

Constanza Flores.
AgNPs sintetizadas con
Fateme Mirzajani. 𝑁𝑎𝐵𝐻4 que inhibieron
AgNPs contra S. la colonización de P.
aureus. aeruginosa y S. aureus.

2010 2011 2013 2014 2015

Nilda Ayala. Luis Deschamps y Raquel Villamizar y

AgNPs contra Jesús Camacho. Lucila Monroy.
VIH-1 Sintetizaron AgNPs Capacidad de AgNPs
con cilantro para sintetizadas
aplicación contra biotecnológicamente de
E. coli. inhibir el crecimiento de
microorganismos en
frutas.
1 2 3 4. JUSTIFICACIÓN 5 6
Las AgNPs poseen propiedades
microbicidas contra bacterias Gram
negativas Pseudomonas aeruginosa y
Klebsiella pneumoniae, y Gram positiva
Staphylococcus aureus.
Se escoge como agente oxidante el
extracto del cilantro ya que, por lo
general se utiliza el borohidruro de sodio
y este es un reactivo peligroso contra la
salud humana y contamina el agua.
7 8 9
El efecto bactericida de las AgNPs depende del
tamaño, entre más pequeñas, las nanopartículas
interactúan mejor con las bacterias, debido a su
gran área de superficie.
Éstas nanopartículas, podrían ser usadas para
enfrentarnos a bacterias resistentes a los
antibióticos a nivel clínico.
1 2 3 4 5. METODOLOGÍA 6 7 8 9

DISEÑO EXPERIMENTAL

Se utilizará el diseño factorial 2𝑘 + 𝑒𝑠𝑡𝑟𝑒𝑙𝑙𝑎,

considerando dos factores y dos niveles: Factor A:
Concentración de nitrato de plata y Factor B:
Temperatura. Las variables de respuesta cuantitativas son el
tamaño de las nanopartículas y el porcentaje de
inhibición para cada microorganismo, siguiendo
el 2k+estrella en el cual se realizarán 9 ensayos,
NIVELES con 2 réplicas y 5 réplicas para el punto central
Factores Bajo Alto que es 45ºC.
A(mM) 20 70
B(°C) 35 55
Tabla 1. Diseño experimental, factores y niveles.
1 2 3 4 5. METODOLOGÍA 6 7 8 9

OBTENCIÓN DEL EXTRACTO DE CILANTRO

Se maceraron 120 g de hojas de Se agregaron 90 g de hojas

cilantro y se vertieron en un Beaker
con 250 ml de agua destilada,
calentándolo en una plancha con
agitador magnético (500 rpm) hasta
ebullición.
adicionales al caldo obtenido,
hirviéndolo nuevamente.
Posteriormente se calentó el
extracto reduciendo su volumen
por evaporación hasta 40 ml.
Por último, se filtró
el extracto final, se
dejó reposar y se
almacenó en un
recipiente.
1 2 3 4 5. METODOLOGÍA 6 7 8 9

SÍNTESIS DE NANOPARTÍCULAS DE PLATA

Se preparó una solución madre Las AgNPs se Se suspendieron las AgNPs en agua
de 100 mM de nitrato de plata, y separaron del medio destilada más hidróxido de sodio 0.1N
diluciones al 10 y 1 mM. Se de reacción por hasta alcanzar un pH de 10. Se
mezclan 1.25 ml del extracto de centrifugación a 9000 llevaron las suspensiones al
cilantro con 25 ml de solución de rpm durante 20 min. ultrasonido durante 30 minutos y se
AgNO3. dejaron en reposo por un periodo de
una semana.
1 2 3 4 5. METODOLOGÍA 6 7 8 9

CARACTERIZACIÓN DE LAS NANOPARTÍCULAS

Espectroscopia UV-Vis: Se prepararon

muestras diluidas a 1% v/v, para
determinar la longitud de onda
característica del plasmón superficial de las
nanopartículas de plata.

FTIR: Se detectaron las especies

químicas presentes en el
extracto de cilantro.
1 2 3 4 5. METODOLOGÍA 6 7 8 9

EFECTO DE LAS AgNPs SOBRE LAS BACTERIAS: SE EMPLEA EL MÉTODO ESTÁNDAR USADO
PARA ANTIBIÓTICOS: DISCOS DE DIFUSIÓN O HALO DE INHIBICIÓN.

Se prepara un cultivo bacteriano

en caldo nutritivo estéril. Luego Sobre el agar recién Luego del período
se toma una alícuota de 10 µL sembrado se coloca un de incubación, se
con una concentración de 108 disco de papel de filtro determina el
UFC/mL de cada bacteria y se circular embebido con una diámetro del halo
siembra en una placa de Petri dispersión de. Las placas se alrededor del
conteniendo agar Mueller incuban a 30°C por 24 h. papel de filtro.
Hinton.
 6. RESULTADOS
1 2 3 4 5 OBTENIDOS
7 8 9

Espectroscopia UV-Vis: AgNPs 1 mM Muestra: I y II

Gráfica 1. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs Gráfica 2. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs
1 mM (I). 1 mM (II).

λ = 421 nm ; A = 2,223
 6. RESULTADOS
1 2 3 4 5 OBTENIDOS
7 8 9

Espectroscopia UV-Vis: AgNPs 10 mM Muestra: I y II

Gráfica 3. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs Gráfica 4. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs
10 mM (I). 10 mM (II).

λ = 423 nm ; A = 2,699 λ = 429 nm ; A = 2,538

 6. RESULTADOS
1 2 3 4 5 OBTENIDOS
7 8 9

Espectroscopia UV-Vis: AgNPs 100 mM Muestra: I y II

Gráfica 5. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs Gráfica 6. Absorbancia vs longitud de onda de las AgNPs
100 mM (I). 100 mM (II).

λ = 430 nm ; A = 2,409 λ = 430 nm ; A = 1,930

 6. RESULTADOS
1 2 3 4 5 OBTENIDOS
7 8 9

FTIR: Extracto de Cilantro

11

10

%T
7

4
4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Longitud de onda (1/cm)

Gráfica 7. Espectro de FTIR en la muestra de extracto de cilantro usado para sintetizar las AgNPs.
 7. RESULTADOS
1 2 3 4 5 6 ESPERADOS 8 9

RESULTADOS ESPERADOS

Al evaluar el efecto microbicida de las

AgNPs por medio del método de halo
de inhibición, se espera que después
del periodo de incubación de las
bacterias; obtener una mayor distancia
desde el disco hasta la zona en la que
se desarrollan las colonias (halo), lo
que indicará una mayor susceptibilidad
de las bacterias ante las AgNPs.
1 2 3 4 5 6 7 8. CONCLUSIONES 9

CONCLUSIONES
• Luego de añadir el extracto de cilantro a la solución de nitrato de plata, se
observó un cambio en el color de la solución de transparente a color
marrón indicativo de la formación de nanopartículas de plata.
• Se efectuó espectroscopia UV-Vis a las muestras de las nanopartículas y Los
picos de absorción máxima, aparecieron a:

I II
λ = 421 nm
AgNPs 1 mM __
A = 2,223
λ = 423 nm λ = 429 nm
AgNPs 10 mM
A = 2,699 A = 2,538 Estos valores confirman la presencia de
λ = 430 nm λ = 430 nm AgNPs debido a la resonancia del plasmón
AgNPs 100 mM
A = 2,409 A = 1,930 superficial característico de estas
Tabla 2. Picos de absorción máxima para cada muestra. nanopartículas. (rango de 400-450 nm )
1 2 3 4 5 6 7 8. CONCLUSIONES 9

CONCLUSIONES

• La espectroscopia por Infrarrojo por Transformada de Fourier (FTIR) mostró la viabilidad que tiene el extracto de
cilantro como agente reductor para sintetizar nanopartículas de plata debido a los componentes que se
encuentran en esta planta, que son:

Componentes Grupo Funcional Longitud de Onda (1/cm)

COOH 3221-3508, 1367-1435, 1028-1120

Ácido linoleico, oleico y palmítico
>C=O 1633-1670
CH-CH2 2877-2956
Ácido ascórbico
OHC=COH 1568-1660

Tabla 3. Componentes representativos presentes en el cilantro, con sus grupos funcionales de acuerdo a FTIR
1 2 3 4 5 6 7 8 9.BIBLIOGRAFÍA

BIBLIOGRAFÍA

 A. Saxena, R. M. Tripathi, F. Zafar, and P. Singh, “Green synthesis of silver nanoparticles using aqueous solution
of Ficus benghalensis leaf extract and characterization of their antibacterial activity,” Mater. Lett., vol. 67, no.
1, pp. 91–94, 2012.
 A. Šileikaitė, I. Prosyčevas, J. Puišo, A. Juraitis, and A. Guobienė, “Analysis of Silver Nanoparticles Produced by
Chemical Reduction of Silver Salt Solution,” Mater. Sci., vol. 12, no. 4, pp. 1392–1320, 2006.
 F. Mirzajani, A. Ghassempour, A. Aliahmadi, and M. A. Esmaeili, “Antibacterial effect of silver nanoparticles on
Staphylococcus aureus,” Res. Microbiol., vol. 162, no. 5, pp. 542–549, 2011.
 L. A. D. M. J.D.Camacho Polo, “Sinteis de nanoparticulas de plata y modificacion con pulpa de papel para
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 L. Bush Larry y M. Perez, “Infecciones por Klebsiella, Enterobacter y Serratia.” , [Online]. Florida: Universidad
De Florida, Disponible en: https://www.merckmanuals.com/esus/professional/enfermedades-
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 N. Ayala Nuñez, “Nanopartículas de Plata como microbicidas : Actividad mecanismos de acción contra la
infección por el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) y diferentes bacterias resistentes a antibioticos.,”
tesis Dr. Univ. Autónoma Nuevo León, Fac. Ciencias biológicas, pp. 1–134, 2010.
 V. G. Raquel and M. P. Lucila, “Uso de Nanopartículas de plata en el control de microorganismos patógenos
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