EFECTOS DE LA DEFICIENCIA Y

TOXICIDAD DEL BORO EN PLANTAS

SUPERIORES

UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE, SEVILLA (ESPAÑA)

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
Investigación actual en Universidad Pablo
de Olavide de Sevilla
Área de Fisiología Vegetal
Departamento de Fisiología, Anatomía y
Biología Celular

Jesús Rexach
ESTUDIO DE LOS EFECTOS QUE LA Víctor Beato
DEFICIENCIA Y TOXICIDAD DE BORO María Teresa Navarro
CAUSAN EN LAS PLANTAS Begoña Herrera
Juan Camacho
Macarena Martín Rejano
Carlos Quiles Pando
Miguel Macho
Agustín González
INTRODUCCIÓN: NUTRICIÓN MINERAL EN PLANTAS

• Las plantas absorben los nutrientes minerales del suelo

(nitrógeno, fósforo, azufre, calcio, hierro, potasio, entre otros)

Micronutrients

Macronutrients
 INTRODUCCIÓN: FUNCIÓN DEL BORO EN LAS PLANTAS

- El boro (B) es un micronutriente esencial para el correcto desarrollo de las plantas (3-100 μg
/ g ps). En animales y microorganismos tiene efectos beneficiosos en el desarrollo

- En plantas: su función principal es estructural: entre 80 – 90% del boro se localiza en la

pared celular, donde une a dos moléculas de ramnogalacturonano II (RG-II), un polisacárido de
la pared celular. Este complejo es esencial para la estructura y función de la pared celular.

Bolaños et al., 2004

Función estructural del B en las plantas

Dímero de ramnogalacturonano II
 ABSORCIÓN Y TRANSPORTE DE BORO POR LAS PLANTAS
VASCULARES

El boro se absorbe por las raíces mediante tres mecanismos diferentes:

1) Difusión pasiva (disponibilidad de B adecuada).

2) Transporte mediado por canales
Baja disponibilidad de B y toxicidad
3) Transporte activo
Banda de Caspary

Flujo apoplástico de B

Destoxificación

Absorción

Epidermis Córtex Endodermis Periciclo

Xilema Floema
Estela

Modificado de Robert y Friml, 2009.

EFECTOS DE LA DEFICIENCIA DE BORO EN LAS PLANTAS

Afecta al desarrollo radical

Bajo condiciones de:

Suficiencia de B Deficiencia de B

La deficiencia en boro
provoca un descenso
rápido del crecimiento
de la raíz

Los ápices de las raíces

laterales continúan
emergiendo, pero se
inhibe la elongación de la
raíz principal
 EFECTOS DE LA DEFICIENCIA DE BORO EN LAS PLANTAS

- Afecta al crecimiento radical y a la formación y elongación de los pelos

radicales

+B (10 µM)
-B (0,4 µM)

Martín-Rejano et al., 2011

 Efecto de la disponibilidad de boro sobre la arquitectura radical

+B
-B
Aprox. 35 % de diferencia en la
longitud de la raíz principal al 4º
día de tratamiento

+B +B
-B -B

Martín-Rejano et al (2011) Physiol Plant 142:170-178

Ni la longitud ni el número de raíces laterales se ven afectados por la

deficiencia de boro; sin embargo, sí se afecta la longitud de la raíz principal.
 Efecto del aporte de boro sobre la actividad DR5:GUS

¿Interviene la auxina en la inhibición de la elongación de la raíz principal cuando

hay bajo aporte de boro?
DR5:GUS
marcador de genes de respuesta a auxina

C D

Aumentan los niveles de

actividad DR5:GUS en las
(C  10 µM boro; D 0,4 µM boro) zonas de
transición/elongación
Martín-Rejano et al (2011) Physiol Plant 142:170-178

El bajo aporte de boro afectaría al modelo de distribución de las auxinas en

el ápice de la raíz principal.
 Efecto del aporte de boro sobre la actividad EBS:GUS

¿Interviene el etileno en la inhibición de la elongación de la raíz principal cuando

hay bajo aporte de boro?
EBS:GUS
marcador del gen EIN3

E F

Aumentan los niveles de

actividad EBS:GUS en
las zonas de
elongación/maduración

(E  10 µM boro; F 0,4 µM boro)

El bajo aporte de boro provocaría una acumulación de etileno en las zonas

de elongación/maduración de la raíz principal.
Efecto del aporte de boro sobre la elongación de la raíz principal en
mutantes de Arabidopsis de etileno y auxina

+B
a
ein2  mutante insensible al
a a
6
-B
c
etileno
Root elongation (cm)

El gen EIN2 no estaría implicado

4
b
en la inhibición de la elongación de
3 b

2
la raíz principal en bajo aporte de
1
boro
0
Col aux1-22 ein2

Genotype

a
a a +B
-B aux1-22  mutante insensible a la
Relative root elongation (%)

100
c
80
auxina

60 b El gen AUX1 (transportador de

auxina) estaría implicado en la
b

inhibición de la elongación de la raíz

40

20 principal en bajo aporte de boro

0
Col aux1-22 ein2

Genotype
 CONCLUSIONES

• El bajo aporte de boro tiene dos efectos sobre la arquitectura de la raíz en

plántulas de A. thaliana:

• Una disminución en la elongación, pero no en la división celular, de la

raíz principal sin afectar al crecimiento de las raíces laterales.

• Un incremento en el número y longitud de los pelos radicales de la

raíz principal.

• En bajo aporte de boro se altera la distribución de auxinas en el ápice de la raíz

principal; el transportador AUX1 parece estar implicado en la inhibición de la
elongación de la raíz principal en estas condiciones.

• El etileno, a través de la proteína EIN2, estaría implicado en la inducción de la

formación y elongación de los pelos radicales en condiciones de bajo aporte de
boro.
¿CÓMO LAS PLANTAS SIENTEN LA DEFICIENCIA DE BORO?

¿EL Ca2+ PODRÍA ESTAR IMPLICADO EN ESTE

PROCESO DE SEÑALIZACIÓN?

MICROSCÓPICO CONFOCAL
Arabidopsis plants expressing Yellow
cameleons [(donor chromophore (CFP),
calmodulin (CaM), a glycylglycine linker, the

+ CaM binding peptide of myosin light-chain

kinase (M13), and an acceptor chromophore
(YFP)]
¿CÓMO LAS PLANTAS SIENTEN LA DEFICIENCIA DE BORO?

FLUORESCENCE IMAGES OF ROOTS FROM ARABIDOPSIS

6 h + B 24 h + B

6 h - B 24 h - B

A significant increase in fluorescence levels was observed in B-

deficient roots, which was more marked in 24 h B-deprived roots
¿CÓMO LAS PLANTAS SIENTEN LA DEFICIENCIA DE BORO?

TRANSCRIPTOME ANALYSIS in Arabidopsis thaliana

6 h. +B

7 days. +B (2μM)

24 h. +B

6 h. -B

0 h. +B
24 h. -B

These analyses were performed in A. thaliana ROOTS

 TRANSCRIPTOME ANALYSIS

Boron deficiency affects the expression levels of several Ca2+

signaling genes in Arabidopsis thaliana roots
HOW BORON DEFICIENCY IS SENSED BY PLANTS?
TRANSCRIPTOME ANALYSIS: Ca2+ transport genes

CNGC Plant cyclic nucleotide-

gated ion channels (CNGCs) have
been proposed as a Ca2+ influx
channel.
+B

-B

Quiles-Pando y col.
ACA (auto-inhibited Ca2+-ATPases) are a class of Ca2+ pumpsthat transport
this cation out of cytosol against its electrochemical potential gradient using
the energy from ATP hydrolysis.
HOW BORON DEFICIENCY IS SENSED BY PLANTS?
TRANSCRIPTOME ANALYSIS: Ca2+ transport genes

+B

-B

Quiles-Pando y col.

CAX Ca2+/H+ antiporters. These transporters utilize the pH gradient

established by proton pumps –such as H+-ATPase or H+-pyrophosphatase– to
export Ca2+ from the cytosol.
 Conclusion: Hypothetical mechanism to explain how Ca2+ could
mediate the Arabidopsis response to B-deprivation signal

1. ALTERATION OF
B deficiency
Ca2+ HOMEOSTASIS
2. RESTORATION OF Ca2+
HOMEOSTASIS
Ca2+ Ca2+
Ca2+
Ca2+ Ca2+

CAX?
+ CNGC19 ACA10

Ca2+ CMLs Ca2+ Ca2+

Target proteins
?
Physiological
CPK28 responses
CPK29
TF Target proteins P
Ca2+

CBL/CIPK CAX3

TF
TF
TF

ACA?

Nucleus Ca2+ Vacuole

 Análisis metabolómico en condiciones de deficiencia de B

- Afecta a los niveles de diversos metabolitos en plantas de tabaco

Beato et al., 2011

 Expresión radical del gen AS en las distintas transiciones
A tiempo cero las plantas se transfirieron a medios en presencia o ausencia de B y a
distintas fuentes de nitrógeno

Expresión del gen AS (asparragina sintetasa)

NO3- 3 mM NO3- 3 mM-NH4+ 3 mM NH4+ 3 mM-NO3- 3 mM
+B
GDH2
-B
Unidades relativas

Unidades relativas

Unidades relativas
AS 1,0 *** AS 1,0 AS

0,8
* 0,8 * 0,8
*
0,6 0,6 **
*
0,4 0,4 0,4
*
0,2 0,2
0,0 0,0 0,0
0 4 8 24 0 4 8 24 0 4 8 24
Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h)

+B
-B

En todas las transiciones la expresión del gen AS de tabaco aumentó bajo

deficiencia en B
 Efecto de la deficiencia de B sobre la concentración radical de Asn

Contenido radical de Asn

NO3- 3 mM NO3- 3 mM NH4+ 3 mM NH4+ 3 mM NO3- 3 mM

10 Asn Asn Asn

* 8
*
-1

-1
-1
3

mol (g PS)
mol (g PS)

mol (g PS)
8
* 6
*
6 2 *
4
4 Col 32 vs Col 33
*
1
2 Col 32 vs Col 35 2

0 0 0
0 4 8 24 0 4 8 24 0 4 8 24
Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h)

+B
-B

La deficiencia de B provocó un aumento de la concentración radical de Asn en

todas las transiciones de la fuente de nitrógeno
 Expresión radical de los genes GDH en las distintas transiciones

Expresión de los genes GDH (glutamato deshidrogenasa)

NO3- 3 mM NO3- 3 mM NH4+ 3 mM

Unidades relativas
Unidades relativas

Unidades relativas
Unidades relativas
Ntgdh-NAD;A1 Ntgdh-NAD;B2 Ntgdh-NAD;A1 Ntgdh-NAD;B2
1,0 * * 1,0 1,0
* *
1,0
0,8 0,8 0,8 0,8
0,6 0,6 0,6 0,6
0,4
C 0,4 0,4 0,4
0,2 0,2 0,2 0,2
0,0 0,0 0,0 0,0
0 4 8 24 0 4 8 24 0 4 8 24 0 4 8 24
Tiempo de deficiencia (h) Tiempo de deficiencia (h) Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h)

NH4+ 3 mM NO3- 3 mM
Unidades relativas

Unidades relativas
Ntgdh-NAD;A1 Ntgdh-NAD;B2
1,0 * 1,0
+B 0,8 0,8

-B 0,6 0,6
0,4 0,4
0,2 0,2
0,0 0,0
0 4 8 24 0 4 8 24
Tiempo de deficiencia en B (h) Tiempo de deficiencia en B (h)

Los niveles de transcritos de los genes GDH aumentaron en las raíces bajo
deficiencia en B independientemente de la fuente de nitrógeno
 Efecto de la deficiencia en boro sobre la actividad GDH

+B
-B NO3- 3 mM

-1
mol NADH (h g DW)
2000 A Aminante **
1500

1000

500

0
B Desaminante **
-1

500
mol NADH (h g DW)

400
300
200
100
0
00 4 8 12
24
Time after B treatments (h)

La actividad de la enzima GDH aumentó en las raíces de la plantas sometidas

a condiciones de boro limitante
Modelo para la respuesta a corto plazo de las raíces de las plantas de tabaco
a la deficiencia en boro

Asparragina

Deficiencia de B + AS
+ Glutamina 2-Oxoglutarato

Hexosas Aa Glu GDH NH4+ GS GOGAT

Glutamato Glutamato
2-Oxoglutarato
Ciclo GS/GOGAT

Ciclo
de
Krebs

Este modelo sería operativo independientemente de la fuente de nitrógeno

 Efectos de la deficiencia de boro

- Produce cambios en la expresión génica

La expresión de diversos genes relacionados con la síntesis de la pared
celular se reprime bajo condiciones de deficiencia de boro

Camacho-Cristóbal et al., 2008

 EFECTOS DE LA DEFICIENCIA DE BORO EN LAS PLANTAS

- Afecta a la expresión de genes implicados en la síntesis y modificación de la

pared celular en raíces de plantas de Arabidopsis thaliana

+B

-B

Camacho-Cristóbal y col., 2008

XTHs: Xyloglucan endotransglycosylase/hydrolases. Involved in the

rearrangement of the network formed by association of xyloglucans with
cellulose microfibrils ,and play a key role in the cell elongation and growth.
PLAN DE TRABAJO A REALIZAR EN
UNJBG

INVESTIGACIÓN FINANCIADA POR PROYECTO EUROINKA

(UNIÓN EUROPEA)
 TOXICIDAD DE BORO EN LAS PLANTAS

Elevados contenidos de boro en zonas áridas y semiáridas del sur del Perú

Determinación de variedades de maíz y de vid tolerantes al exceso

de boro en el suelo

Determinación
Análisis de cortes Genes homólogos a
contenido de boro en
histológicos BOR4 de A. thaliana
vástagos y raíces

Análisis proteómicos y
metabolómicos
 TRABAJO DESARROLLADO EN
UNJBG
TOXICIDAD EN BORO EN
VARIEDADES DE ZEA MAYS

UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE, SEVILLA (ESPAÑA)

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
1. INTRODUCCIÓN: TOXICIDAD DE BORO EN LAS PLANTAS
Los altos niveles de boro pueden estar presentes en el medio:

-De forma natural debido a la composición química del suelo

Elevados contenidos de boro están presente en zonas áridas y
semiáridas del planeta como: sur de Australia , Chile, Israel…
-Incorporados al medio mediante diversas fuentes de origen
antropogénico.
- Agua de riego
- Efluentes industriales
- Residuos mineros
- Aplicación de fertilizantes

Estrecho intervalo de concentraciones óptimas.

Alta permeabilidad del ácido bórico a través de las membranas.

Situación de estrés en las

plantas
1. INTRODUCCIÓN: EFECTOS DE LA TOXICIDAD DEL BORO
EN LAS PLANTAS

Disminución del crecimiento de la planta.

Descenso en los niveles de clorofilas y disminución de la tasa

fotosintética.

Estrés oxidativo y peroxidación de lípidos.

Alteración de la división celular y del metabolismo.

Impacto negativo en la
productividad de los cultivos
SELECCIÓN DE VARIEDADES DE ZEA MAYS QUE PRESENTEN

DIFERENTES GRADOS DE TOLERANCIA AL EXCESO DE BORO

EN LOS SUELOS

SE HAN RECOGIDO MAZORCAS DE ZEA MAYS EN LAS

SIGUIENTES LOCALIDADES:

1. MUNICIPALIDAD DE PACHÍA

2. LAS YARAS-SAMA

3. CHIPISPAYA
 2. SELECCIÓN DE VARIEDADES CON POSIBLE GRADO DE
TOLERANCIA AL EXCESO DE BORO EN LOS SUELOS

1. VARIEDAD PACHÍA 2. VARIEDAD CHILENA

Donada por la municipalidad de Recogida en la vega del río SAMA aguas abajo
PACHÍA (15/7/2016) del puente Cuylona en el distrito de Sama Las
Yaras (18/7/2016). Contenido Boro 12,61 mg /
L (Datos de Autoridad Nacional Agua.
27/04/2013)
2. SELECCIÓN DE VARIEDADES CON POSIBLE GRADO DE
TOLERANCIA AL EXCESO DE BORO EN LOS SUELOS

3. VARIEDAD PINTADA 4. VARIEDAD PACHIA MEJORADA

- Recogidas en Chipispaya el 4/08/2016

- Punto más cercano RSAMA2. Contenido Boro 4,75 mg / L

(Autoridad Nacional Agua. 27/04/2013)
2. SELECCIÓN DE VARIEDADES CON UN POSIBLE GRADO DE
TOLERANCIA AL EXCESO DE BORO EN LOS SUELOS

5. VARIEDAD AMARILLO

- Recogidas en Chipispaya el 4/08/2016

- Punto más cercano RSAMA2 Contenido Boro 4,75 mg / L

(Autoridad Nacional Agua. 27/04/2013)
CONFLUENCIA RÍO SALADO Y TALA
PRESENCIA DE BORATOS Y SALES EN ESTA CONFLUENCIA

RSala2 15,1 mg/L de BORO

PRESENCIA DE BORATOS Y SALES EN ESTA CONFLUENCIA
 3. ANÁLISIS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y CHILENA

REALIZADOS Y EN PROCESO DE FINALIZACIÓN

1. Ensayo de germinación en la variedad PACHÍA

2. Cultivo in vitro de las variedades Chilena y Pachía a
distintas concentraciones de boro (100 µM, 0,5 mM y 5
mM)
3. Determinación del peso fresco en hojas y raíces de las
variedades Pachía y Chileno cultivadas in vitro
4. Determinación del contenido de B foliar y radical en ambas
variedades
 3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

- Semillas de esta variedad se mantuvieron en imbibición con dH2O, 100 µM
de B, 0.5 mM de B o 5 mM de B durante aproximadamente 17 horas.
- Posteriormente se mantuvieron en papel humedecido con dH2O durante 13
días.
- Finalmente se determinó la longitud de la raíz principal y del vástago
 3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

IMBIBICIÓN dH2O IMBIBICIÓN 100 µm B

3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

IMBIBICIÓN 0,5 mM B
 3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

IMBIBICIÓN 5 mM B IMBIBICIÓN 5 mM B
 3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

VÁSTAGO GERMINACIÓN RAÍZ GERMINACIÓN

16.0 16.0
14.0 a a 14.0 a a
c b
Longitud (cm)

Longitud (cm)
12.0
b
12.0
10.0 10.0
8.0 b 8.0
6.0 6.0
4.0 4.0
2.0 2.0
0.0 0.0
DH2O 100 µM B 0,5 mM B 5 mM B DH2O 100 µM B 0,5 mM B 5 mM B
3. ANÁLISIS REALIZADO CON LA VARIEDAD PACHÍA

1. ENSAYO DE GERMINACIÓN EN LA VARIEDAD PACHÍA

TOTAL GERMINACIÓN
30.0
a c
25.0
a,c
Longitud (cm)

20.0 b

15.0

10.0

5.0

0.0
DH2O 100 µM B 0,5 mM B 5 mM B
3. ANÁLISIS REALIZADOS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y
CHILENA

2. Cultivo in vitro de las variedades Chilena y Pachía a distintas

concentraciones de boro (100 µM, 0,5 mM y 5 mM)
3. ANÁLISIS REALIZADOS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y CHILENA

2. Cultivo in vitro de las variedades Chilena y Pachía a distintas

concentraciones de boro (100 µM, 0,5 mM y 5 mM)
5 mM de B (10 días)

PACHÍA CHILENO
3. ANÁLISIS REALIZADOS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y CHILENA

2. Cultivo in vitro en placas de las variedades Chilena y Pachía a

distintas concentraciones de boro (100 µM, 0,5 mM y 5 mM)
3. ANÁLISIS REALIZADOS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y
CHILENA

3. Determinación del peso fresco en hojas y raíces de las

variedades Pachía y Chileno

HOJAS
0.800
CHILENO
0.700
PACHÍA
0.600
PESO (g)

0.500

0.400

0.300

0.200

0.100

0.000
100 µM B 5 mM B
3. ANÁLISIS REALIZADOS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y
CHILENA
3. Determinación del peso fresco en hojas y raíces de las
variedades Pachía y Chileno

RAÍCES
0.900
CHILENO
0.800
0.700 PACHÍA

0.600
PESO (g)

0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
100 µM B 5 mM B
 3. ANÁLISIS CON LAS VARIEDADES PACHÍA Y CHILENA

POR REALIZAR
1. Escrutinio de genes homólogos al transportador BOR4 de Arabidopsis
thaliana (AtBOR4)
2. Análisis de la expresión de genes homólogos a AtBOR4 en
condiciones de exceso de Boro (5 mM) en las distintas variedades de
maíz de la provincia de Tacna y su entorno
3. Análisis citohistológicos de raíces y hojas en las distintas variedades
de maíz de la provincia de Tacna y su entorno cultivadas con 5 mM
de Boro
4. Determinación de los contenidos de Boro en campos de cultivos de
maíz
5. Determinación de los contenidos de Boro en las aguas de regadío de
las cuencas de diversos ríos (Sama, Salado, Tala, etc.)
AGRADECIMIENTO AL PERSONAL QUE HA COLABORADO EN
LA REALIZACIÓN DE ESTA ESTANCIA

Dr. Oscar Fernández

Julio González
Licenciada Betty Mamani
Brett Luque
Oswaldo

Personal administrativo:
Regina
Silvia Quispe