American Journal of Botany 93(4): 575–581. 2006.

Variación entre: Planta en la composición de néctar (azúcar), en una hierba perenne y insectos de polinización

VARIACIÓN EXTREMA DENTRO DE UNA PLANTA

EN LA COMPOSICIÓN DE AZÚCAR NÉCTAR EN
UNA HIERBA PERENNE CON INSECTOS DE
POLINIZACIÓN.

JUAN CAMILO NIÑO HERNANDEZ

OLGA NATALIA PULIDO CARO
DAVID ALEJANDRO REINA LEAL

UNIVERSIDAD PEDAGOGICA Y TECNOLOGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA INGENIERIA AGRONOMICA
2013
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Variación entre: Planta en la composición de néctar (azúcar), en una hierba perenne y insectos de polinización

Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Ranunculales
Familia: Ranunculaceae
Subfamilia: Ranunculoideae
Helleborus foetidus es una hierba perenne ampliamente distribuida en el
Tribu: Helleboreae oeste y el suroeste de Europa ( Werner y Ebel , 1994 ) . En la Península Ibérica,
Género: Helleborus por lo general se produce en los claros, bordes de bosque y el sotobosque
Especie: H. foetidus
de los bosques montanos, principalmente sobre sustratos calizos. Floración
tiene lugar principalmente entre enero y marzo. Los abejorros y abejas
andrena son los Principales Polinizadores (Herrera et al. , 2001) .

Reino: Animalia
Filo: Arthropoda
Inflorescencia. Clase: Insecta
Orden: Hymenoptera
Suborden: Apocrita
Superfamilia: Apoidea
Familia: Apidae
Subfamilia: Apinae
Tribu: Bombini
Género: Bombus
Figura No.1 Helleborus foetidus (Helleborus).
Figura No.2 Abejorro (Bombus) con
corbícula llena de polen.
Las plantas consisten en uno o unos pocos rametos que
desarrollan una inflorescencia terminal después de varias Reino: Animalia
temporadas de crecimiento vegetativo. Cada inflorescencia, Filo: Arthropoda
Clase: Insecta
hecha de 3-7 cimas laterales, produce 25-100 flores que se Orden: Hymenoptera
abren poco a poco más de 1.5 a 2.5 meses. Flores Familia: Andrenidae
acampanadas colgantes color verde como se muestra en la Subfamilia: Andreninae
figura No. 1 son de 14-19 mm de largo y 12-17 mm de Género: Andrena

ancho.

Figura No.3 Abeja andrena.

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Estambres Nectarios

El verticilo floral externo está formado por cinco sépalos grandes y superpuestos, que son
verdes. Al igual que en otras especies del género Helleborus, los pétalos de H. foetidus se
han convertido modificado en nectarios (Tamura , 1993). Hay cinco nectarios por flor , que
tienen forma de cuernos aplanados y están profundamente ocultos en el interior de la corola.
Ellos forman un anillo distinto entre los estambres y los sépalos y producen néctar abundante
(Herrera y Soriguer, 1983; Vesprini et al, 1999). La estructura de las flores foetidus H.
incluidos los nectarios, se representa en Corbet et al. (1979), Vesprini et al. (1999), y Herrera
et al ( 2002).

Figura No.4 Flor y nectarios Helleborus foetidus (Helleborus).

En botánica, los nectarios son glándulas que segregan una solución azucarada llamada
néctar. El néctar tiene como función la de atraer insectos, pájaros y otros animales. Los
azúcares más comunes que se encuentran en el néctar son la sacarosa, la glucosa y la
fructosa, si bien también pueden hallarse otros azúcares simples e incluso algunos
polisacáridos como la maltosa y la melobiosa.

Figura No.5 Tipos de nectarios.

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Sitio de estudio y campo de métodos

Vadillo Castril

Mapa No.1 Localidad Vadillo Castril. Municipio de Cazorla - España

Mapa No.2 Parque Natural Sierras de Cazorla Segura - Las Villas

Figura No.6 Pino salgareño (Pinus nigra) Figura No.7 Pinus pinaster

Las plantas Helleborus foetidus crecen en el sotobosque de pino ( Pinus pinaster y Pinus nigra)
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Se recogieron muestras de néctar en dos fechas separadas, que más o

menos corresponde con el inicio del periodo de floración ( 9 de marzo) y
ligeramente más allá de la floración pico de la población de estudio ( 4 de
mayo). En 2005, la época de floración de H. foetidus se retrasó
considerablemente con respecto al período de floración entre enero y
marzo de costumbre (Herrera et al, 2001). En la primera fecha de
recolección (''muestra'' temprana en adelante), algunos flores todavía
estaban abiertos en la población, el clima era frío y lluvioso, y los
abejorros son rara vez visto visitando flores. Como consecuencia, el
néctar era abundante en los nectarios, y las plantas no necesitan la
protección de los visitantes florales para que podamos obtener muestras
de néctar

Extracción de néctar, de almacenamiento, y los procedimientos analíticos

fueron los mismos para las colecciones tempranas y tardías . Todas las
muestras de néctar se obtuvieron por la misma persona . Las flores
individuales en etapas similares ( a mitad de camino en la fase
masculina, con cerca de la mitad de las anteras abiertos) fueron
disecados mediante la eliminación de los sépalos y nectarios individuales
1-3 se cortaron utilizando unas pinzas finas. Una muestra separada
néctar se obtuvo de cada nectario . El néctar se vio obligado a emerger
como una gota en la entrada nectario oprimiendo suavemente la base
nectario y fue inmediatamente borrado en una 3 2 mm Whatman 3MM
mecha de papel 10 . Para evitar la contaminación de la muestra, se tuvo
particular cuidado para evitar daños en los tejidos ( lo que podría causar
otros líquidos de la planta a la fuga en el néctar ) y para asegurar el
contacto exclusivo entre el néctar y la mecha.

Figura No.8 Extracción de muestras de néctar de los nectarios de

Helleborus foetidus (Helleborus).
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Análisis de azúcares néctar con cromatografía líquida de alto rendimiento ( HPLC ) -

néctar que contienen mechas se colocaron individualmente en tubos Eppendorf de 2
ml, y 500 lL de agua de calidad HPLC se añadieron a cada uno. Cada muestra se midió
tres veces de forma independiente . Para cada medición , 10 mL de solución se filtró a
través de un polyvinylidenedifluoride 0,4 - lm (PVDF) filtro (Analisis V'ınicos SL,
Tomelloso , España ) y se inyecta en un sistema de HPLC DX 500 Dionex ( Dionex,
Sunnyvale, California , EE.UU. ) . El sistema de HPLC estaba equipado con un módulo
de eluyente desgasificar , una bomba de gradiente GP 40 , una columna de seguridad
CarboPac PA10 ( 4 3 50 mm ) , y una columna analítica CarboPac PA10 ( 4 3 250 mm
), así como un detector electroquímico ED 40 para la detección amperométrica pulsada
( PAD ) en el modo de amperométrica integrada , con la forma de onda precargado
normal para la detección de azúcar ( Dionex , 1994 ) . El rango de salida del detector
se ajustó a 100 nC . Se eluyó la columna ( tasa de flujo de 1 ml / min ) isocráticamente
con NaOH 40 mM ( solución al 50 % obtenido a partir de JT Baker, Deventer , Países
Bajos ) como eluyente y se mantiene a 248C durante el análisis.

Néctar extraído de los nectarios de Helleborus foetidus (Helleborus).

Figura No.9 Análisis de azúcares néctar con cromatografía líquida

de alto rendimiento
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Las proporciones de los tres diferentes azúcares (glucosa, fructosa, sacarosa) en

cada muestra analizada se estimaron mediante la integración del área bajo los
picos del cromatograma. Sólo sacarosa, glucosa, fructosa y aparecieron en todas
las muestras. Trazas de un cuarto de azúcar, no identificado apareció en algunas
muestras, y no se considera aquí.

Colección datos Estadisticas Glucosa (%) Fructosa (%) Sacarosa (%)

Muestra temprana Mean 6 SD 21.9 6 13.5 24.8 6 20.8 53.3 6 31.8

Rango 3.9–52.5 1.6–69.9 1.1–94.4

Interquartile rango 11.4–24.2 10.5–39.8 22.6–77.0
Posteriormente a la Mean 6 SD 9.1 6 8.5 64.4 6 30.2 26.5 6 31.1
muestra
Rango 0–55.6 0–100 0–97.9
Interquartile rango 4.5–10.2 45.3–91.8 0–42.9

TABLA 1 . Resumen estadístico de la cantidad relativa de azúcares individuales en muestras de néctar de una sola nectario de Helleborus foetidus en
una población española sudeste .

RESULTADOS
Las diferencias entre los resultados de los tres HPLC mediciones repetidas para cada muestra de un solo nectario fueron insignificantes, corroborando así
la alta repetibilidad del procedimiento analítico. La variación entre mediciones repetidas de la misma muestra eran responsables, en promedio, para sólo
0.004 -0,13 % y 0,04-0,28 % de la varianza de la muestra total de toda en las proporciones de azúcares individuales en las muestras tempranas y tardías,
respectivamente.
Resumen de las estadísticas para la variación entre nectarios individuales en las proporciones de azúcar néctar se basaron en un solo conjunto de valores
para las proporciones de azúcar para cada nectario, obtenida promediando los resultados de mediciones repetidas ( Tabla1 ). En promedio, el néctar
estaba dominado por sacarosa ( 53 % ) en la muestra temprana , con glucosa ( 22 % ) y fructosa ( 25 % ) compartiendo segundo lugar . La composición
media cambiado marcadamente en la muestra tarde; fructosa ( 64 % ) era el dominante azúcar, sacarosa ( 26 % ) fue segundo, y glucosa ( 9 % ) cayó a
niveles muy bajos . Las diferencias entre las fechas de muestreo para la media proporciones de composición de azúcar son estadísticamente significativas,
como se muestra por los resultados de MANOVA de Wilk ( k ¼ 0,637 , F2 , 122 ¼ 34,76 , P , 0,0001 ). Los valores medios describen la tendencia central
para la '' población '' de nectarios en cada muestreo, pero no fue variación extrema en torno a estos valores medios en cada Fecha de toma de muestras.
Los amplios intervalos mostrados en la Tabla 1 indican que, cuando el néctar de los nectarios individuales se analiza por separado
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Figura No 10. Variación en la composición de azúcar en el néctar Helleborus foetidus .

( a) Diagrama ternario de la distribución de las muestras analizadas ( n = 125 ) sobre el
plano definido por los ejes correspondientes al porcentaje de la glucosa fructosa, y
sacarosa. Cada punto representa la composición de azúcares proporcional del néctar
de una sola nectario. La distancia de un punto de un lado del triángulo es proporcional
a la importancia relativa de que el azúcar en la muestra. Los círculos abiertos,
muestras tempranas ( marzo); círculos sombreados, muestras finales ( mayo).
( b ) Representación esquemática de la distribución de puntos de datos para cada una
de las seis plantas muestreadas en mayo ( polígonos sombreados ).
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* Las cifras de porcentaje de varianza total no siempre es igual a 100 debido al pequeño
componente debido a errores de medición (es decir, a las diferencias entre las mediciones de
HPLC repetidas en la misma muestra de néctar)
Importancia de la Importancia de la Importancia de la
variación variación variación

Datos Fuente de variación F P Porcentaje de la F P Porcentaje de la F P Porcentaje de la

variación variación variación

Antes Planta 2.7 0.12 26.7 1.5 0.30 11.9 1.8 0.24 17.8

Flor en planta 1.0 0.50 11.3 3.5 0.04 55.3 3.0 0.05 48.4

Nectario en flor 1495.7 ,0.0001 61.8 4496.2 ,0.0001 32.8 2531.4 ,0.0001 33.8

Después Planta 5.0 0.04 18.8 1.1 0.43 3.2 1.4 0.33 7.2

Flor en planta 4.2 0.005 54.5 32.7 ,0.0001 84.8 29.0 ,0.0001 81.1

Nectario en flor 1.1 0.32 26.3 0.3 0.99 12.0 0.4 0.99 11.7

Tabla No. 2 Estas cifras indican, por lo tanto, que la variación dentro de la planta era responsable en promedio el 86 %
de todos varianza en la composición de azúcar néctar se produce en la población de estudio .

Las diferencias entre las muestras tempranas y tardías deben estar relacionados con patrones variables en la secreción de
azúcar y / o variación en los procesos post secretora que tiene lugar en el nectario . Los grandes néctares de las especies
Helleborus son estructuras verdes con competencia considerable fotosintética ( Vesprini et al, 1999 ; Pacini et al,
2003;Aschan et al, 2005) , y la variación entre muestras tempranas y tardías en la importancia relativa de floema
suministran vs azúcares prestados a nivel local , debido , por ejemplo , a los cambios en la temperatura y la insolación ,
podría dar lugar a una variación en las cantidades relativas de los diferentes azúcares .
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Esta investigación ha demostrado que las proporciones de diferentes azúcares en

el néctar de H. foetidus tienen una considerable variación intra específica y que la
mayor parte de esta variación tiene lugar dentro de las plantas individuales .
Implicaciones de estos resultados son de dos tipos , como veremos más adelante.
En primer lugar, la gran variación observada en la composición de azúcar néctar
muestra que el supuesto de especificidad de especie y la constancia en la
química intra específica néctar generalmente implícitos en las comparaciones
interes pecíficas no se justifica para algunas especies. En segundo lugar, el
hecho de que la variación dentro de la planta es , con mucho, la fuente más
importante de variación intra específica en composición de azúcares néctar
plantea una serie de consideraciones en relación con la interacción entre H.
foetidus plantas y sus polinizadores néctar que buscan .
Los resultados de este estudio sugieren que, en H. foetidus , la composición
promedio de azúcar en el néctar varían entre regiones y, dentro de una localidad
determinada , también entre los tiempos de la época de floración

El resultado más importante de este estudio es la demostración que, cuando los análisis químicos se
llevan a cabo en muestras de néctar, cada uno correspondiente a la producción de una estructura
secretora elemental ( es decir , nectarios individuales ) , composición de azúcar néctar surge como
extraordinariamente variables , con la mayor parte de la variación que tiene lugar en la escala dentro
de la planta restringido, al menos 61 de las 893 especies que se investigó tenían néctares variables.
Esta cifra más probable es que subestima la proporción de especies con néctares variables , ya que
probablemente refleja sólo los casos extremos en los que la variación era lo suficientemente grande
como para ser detectada por los métodos analíticos más bien rudimentarios utilizados por estas
investigaciones anteriores
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Nuestro estudio ha demostrado que , en la población estudiada , la variación dentro de la

planta era la principal fuente de variación local en la composición de azúcar néctar , con
mucho, superior a la variación entre las plantas individuales . La importancia cuantitativa de
la variación entre las flores de la misma planta y entre los néctares de la misma flor habría
permanecido sin ser detectados si hubiéramos analizado muestras combinadas de
diferentes nectarios y flores. Como se muestra por este estudio , la variación en la
composición del néctar entre los medios individuales de la planta en realidad puede ser
insignificante , sin embargo, una amplia variación todavía se puede producir a una escala
muy fina de grano espacial en las poblaciones locales debido a las diferencias entre las
flores y los néctares de la misma planta . La investigación que demuestran que la variación
dentro de la planta es una fuente importante de la población en toda la varianza en los
rasgos florales estructurales y funcionales conocidos para influir en el comportamiento de
los polinizadores , como el tamaño de las piezas del perianto