Estudio farmacocinético de la marbofloxacina en

cabras durante la etapa de lactación

Mgs. MVZ. Jessica Isabel Sánchez Larrañaga

 I. Introducción

I.1. Producción caprina

La cabra ha acompañado al hombre desde su domesticación, aproximadamente unos 8000 A.C

La ganadería caprina en el mundo es extensiva y se basa en la utilización de razas autóctonas.

La producción de cabras ha sido dirigida por pequeños ganaderos desde su inicio hasta la
actualidad.

La población mundial de cabras es de 936.968.882 millones

(Datos registrados hasta 2013) (FAOSTAD, 2015)

Fuente: Faostad, 2015.

(Agraz, 1986; Arviza y col., 1986).
Fuente: Faostad, 2015.
 I. Introducción
Perú:

La producción de ganado caprino :

• Su origen data de la época de la colonización

• Actividad que ha sido considerada como secundaria dentro de la

crianza ganadera a nivel nacional.
1.927.905
• En los últimos quince años se ha observado mayor interés por
la producción láctea, contando con diversos programas de
ONG´s .
• Implementación de programas de M.G. orientados a
producción lechera.

• Parte importante de las economías regionales.

• Permite desarrollar una nueva actividad generadora
de ingresos propios
(INEI, 2012; FAOSTAD, 2015).
 I. Introducción

 Fisiológicamente, la cabra está dotada para la producción láctea (10%).

 En últimos años incremento importante en la producción láctea mundial .

15 524.145,29 tn

17% Europa y Francia 580,694 tn.

 I. Introducción
Producción:

24500 tn/año (2013) (Correa, 2006).

(SAGPyA, 2007; FAOSTAD, 2015).

Fuente: Faostad, 2015.

(INEI, 2012; FAOSTAD, 2015). (SAGPyA, 2007)

6440 toneladas/ año (2013)
 I. Introducción
Importancia de caprinos de leche

• Alimento completo, rico en proteínas, vitaminas,

minerales, y moléculas de grasa pequeñas. (Sánchez, 2011; Haenlein, 2004).

• Crecimiento del mercado de productos lácteos.

• Alternativa para tratamiento de alergias, atopias, enfermedades (Jirillo y col., 2010).

inflamatorias
• Ácidos grasos saturados de cadena corta y media: C6, C8, C10.

• La leche y sus derivados pertenecen al grupo de

alimentos de mayor riesgo en salud pública.
(Khachatryan y col., 2006).

• Resistentes a antibióticos, lo cual es de gran preocupación por su

posible propagación a otros animales y al hombre a través de la
cadena de productos alimenticios. (Virdis y col., 2010).
 I. Introducción

• En los tambos lecheros, uno de los principales problemas es la mastitis, ya

que no sólo conlleva a importantes pérdidas económicas, sino también que
afecta a la seguridad e higiene de los alimentos destinados para el
consumo humano.
 I. Introducción
Fluoroquinolonas - Marbofloxacina

• Amplio espectro que abarca a patógenos aerobios gram- (Appelbaum y Hunter, 2000;
positivos y gram-negativos. Elmas y col., 2001; Thomas y
col., 2003; Meunier y col., 2004;
Idowu y col., 2010; Kroemer y
• Incluye Mycoplasmas y algunos patógenos intracelulares como col., 2012).
Brucella y Chlamydia

• Penetración fácilmente las barreras y difunde en la mayoría de los (Cotard y col., 1995)(Brown, 1996;
Thomas y col., 2001; Rowan y col.,
tejidos. 2004)
(Aliabadi y Lees, 2002) (Andriole,
• Amplia penetración, tracto gastrointestinal, piel , vías urinarias y vías respiratorias. 1998; Naeem y col., 2016).

• Buena difusión a nivel del tejido mamario. (Aramayona y col., 1996;

Shem Tov y col., 1997a,
1997b).
 I. Introducción

El uso de las FQ en animales, y el amplio uso extrarótulo en la lactación que se

hace de las mismas ha hecho necesario el estudio de su comportamiento en
leche.
 II. Objetivos

Objetivo general

Analizar el perfil farmacocinético de la marbofloxacina en cabras en el periodo de lactación

luego de su administración por vía intramuscular (IM) a partir de muestras de plasma y leche.

Objetivos específicos

1. Estudiar y comparar el perfil farmacocinético de la marbofloxacina administrada por vía intramuscular a

cabras en distintos momentos de la lactación.

2. Caracterizar la llegada a la leche de la marbofloxacina luego de la administración intramuscular a cabras

-----en distintos momentos de la lactación.
 III. Materiales y Métodos

• Administración de la marbofloxacina por vía intramuscular a cabras Anglo-Nubian en tres

• Administración de la marbofloxacina por vía intramuscular a cabras Anglo-Nubian en tres momentos
momentos diferentes
diferentes de la etapade
delalactación:
etapa deInicio
lactación:
(días 4 Inicio (días
- 8), pico 4 - 8), pico (días
de producción de producción (días
25 - 30) y final 25 - 30)
(días150 - y
final (días150 - 155).
155).

• Toma de muestras de sangre de la vena yugular a tiempos predeterminados (con posterior obtención de
plasma).

• Toma de muestras de leche a tiempos predeterminados.

• Determinación de las concentraciones de la marbofloxacina en ambas matrices biológicas: plasma y leche.

• Construcción de las curvas de disposición en plasma.

• Análisis farmacocinético.

• Análisis estadístico de los resultados

• Integración pk/pd.
 III. Materiales y Métodos

De los animales (05) Material utilizado durante la administración del fármaco, toma de
muestras de plasma y de leche y su almacenamiento

Material utilizado para la determinación de las concentraciones de la

marbofloxacina (método microbiológico)
 III. Materiales y Métodos

• Administración de la marbofloxacina por vía intramuscular a cabras Anglo-Nubian en tres momentos diferentes
de la etapa de lactación: Inicio (días 4 - 8), pico de producción (días 25 - 30) y final (días150 - 155).

•• Toma de muestras
Toma de muestras de
de sangre
sangre de
delalavena
venayugular
yugulara a tiempospredeterminados
tiempos predeterminados(con
(conposterior
posterior obtención
obtención de
de
plasma).
plasma).

•• Toma
Toma de
de muestras
muestrasde
deleche
lechea atiempos predeterminados.
tiempos predeterminados.

• Determinación de las concentraciones de la marbofloxacina en ambas matrices biológicas: plasma y leche.

• Construcción de las curvas de disposición en plasma.

• Análisis farmacocinético.

• Análisis estadístico de los resultados

• Integración pk/pd.
 III. Materiales y Métodos

Plasma Leche
 III. Materiales y Métodos

• Administración de la marbofloxacina por vía intramuscular a cabras Anglo-Nubian en tres momentos

diferentes de la etapa de lactación: Inicio (días 4 - 8), pico de producción (días 25 - 30) y final (días150 -
155).

• Toma de muestras de sangre de la vena yugular a tiempos predeterminados (con posterior obtención de
plasma).

• Toma de muestras de leche a tiempos predeterminados.

• Determinación de las concentraciones de la marbofloxacina en ambas matrices biológicas: plasma y leche.

• Determinación de las concentraciones de la marbofloxacina en ambas matrices biológicas:
• Construcción de las curvas de disposición en plasma.
plasma y leche.
•
• Análisis farmacocinético.
Construcción de las curvas de disposición en plasma.
• Análisis estadístico de los resultados
• Análisis farmacocinético.
• Integración pk/pd.
 III. Materiales y Métodos
DETERMINACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE MARBOFLOXACINA
 Bioensayo
(Shem Tov y col., 1997b)(Albarellos y col.,
2005)(Goudah y col., 2007; Rabab y col., 2015)
Klebsiella pneumoniae ATCC 10031

solución stock 1000 µg/ml

(Marbofloxacina)

Mueller-Hinton
Inoculación del Agar 28 ml / placa petri.

• Recta de calibración
50 µl de una de las muestras.
Incubadas: 32 °C / 18 hrs.
Siembra y lectura
Se puso a punto la metodología para ambas
matrices biológicas.

• Determinación de la concentración
en las muestras problema Validación de la metodología
GraphPadPrism 1.0
Cada muestra problema se sembró por triplicado en tres
Linealidad- Precisión -
placas distintas.
Exactitud
 III. Materiales y Métodos
Construcción de las curvas de disposición en plasma

Calculándose los parámetros farmacocinéticos

 Concentración máxima (Cmax)

 Tiempo máximo (Tmax)
 Vida media de eliminación (t1/2el)

Programa Informático (Pcnonlin,  Área bajo la curva (ABC0-∞)

4.0, Lexington, USA)  Tiempo medio de residencia (TMR0-∞): para su cálculo se utilizó la
fórmula ABMC0-∞/ABC0-∞. Donde ABMC0-∞ es el área bajo el primer
momento de la curva.

Análisis estadístico  Análisis de varianza no paramétrico (test de Kruskal Wallis) Y

el test de Dunn. (p≤ 0,05).
 III. Materiales y Métodos

• Administración de la marbofloxacina por vía intramuscular a cabras Anglo-Nubian en tres momentos

diferentes de la etapa de lactación: Inicio (días 4 - 8), pico de producción (días 25 - 30) y final (días150 -
155).

• Toma de muestras de sangre de la vena yugular a tiempos predeterminados (con posterior obtención de
plasma).

• Toma de muestras de leche a tiempos predeterminados.

• Determinación de las concentraciones de la marbofloxacina en ambas matrices biológicas: plasma y leche.

• Construcción de las curvas de disposición en plasma.

• Análisis farmacocinético.

• Análisis estadístico de los resultados

• Integración
• Integración
pk/pd.
pk/pd.
 III. Materiales y Métodos
Se tuvo en cuenta 3 microorganismos diferentes

E. Coli Pasteurella multocida Staphylococcus aureus

 ABC0-∞/CIM50: donde ABC es el área bajo la curva de disposición plasmática y la CIM50 es la concentración
inhibitoria mínima para los distintos microorganismos considerados.

 Cmax/CIM50: donde Cmax es la máxima concentración de fármaco alcanzada en plasma y la CIM50 es la

concentración inhibitoria mínima para los distintos microorganismos considerados.
(Kroemer y col., 2012).
 IV. Resultados y Discusiones
Metodología empleada

De los animales:

Etapa de Cabra
la Característica
A B C D E
Lactación
N° de
N° de pariciones
pariciones
22 22 22 22 22
previas
previas

Peso (kg) 36 44,2 56 36 70

INICIO Producción
Producción 900 1100 750 1280 1450
900 1100 750 1280 1450
diaria (ml)
diaria (ml)

Peso (kg) 38,6 46,7 56,3 37,7 75

PICO Producción
Producción 1450 1780 1560 1900 2560 • Edad, Nivel de
diaria (ml) 1450 1780 1560 1900 2560
diaria (ml) producción y CC.

Peso (kg) 37,8 45,7 51,5 37,7 71,7

FINAL
Producción
380 470 380 600
600 550
550
diaria (ml)
 IV. Resultados y Discusiones
Metodología empleada

Estado sanitario:

• Se garantizó un adecuado estado sanitario y nutricional.

• los criterios de inclusión fueron ausencia de anormalidades a la inspección y palpación de las mamas,
recuento de células somáticas inferior a 750,000 y cultivo de leche negativo, asegurándose de esta
manera la ausencia de mastitis clínicas o subclínicas.

Sincronización de celo:

• Se ha utilizado uno de los protocolos de sincronización de celo sugerido en la bibliografía (Freitas y col.,
1996).
• Se obtuvo un tratamiento exitoso ya que todas las hembras entraron en celo, con un porcentaje de
preñez del 100% .
 IV. Resultados y Discusiones
IV.1. VALIDACIÓN DEL MÉTODO MICROBIOLÓGICO PARA PLASMA Y LECHE

Linealidad.-

0,048 – 12,5 µg/ml

Recta de calibración de la marbofloxacina en plasma. Recta de calibración de la marbofloxacina en leche.

(r2 = 0,9899).
(r2 = 0,9906).
 IV. Resultados y Discusiones
IV.1. VALIDACIÓN DEL MÉTODO MICROBIOLÓGICO PARA PLASMA Y LECHE

PRECISION
Matriz EXACTITUD SENSIBILIDAD
Repetibilidad Reproducibilidad
Plasma 7,39% 3,58% 94,12-107,45% 0,048

Leche 7,16% 4,26% 92,45-105,87% 0,048

La metodología fue validada teniendo en cuenta estos criterios tanto en plasma como en leche.
 IV. Resultados y Discusiones
IV. CONCENTRACIONES PLASMÁTICAS DE LA MARBOFLOXACINA
Gráfico IV.8. Curvas de disposición de la marbofloxacina, (media ± D.E.), luego de la administración de una dosis única de 2
mg/kg por vía IM, en diferentes momentos de la lactación.
 IV. Resultados y Discusiones
Modelo farmacocinético empleado

Se utilizó un análisis no compartimental. Similar tratamiento empleado en estudios anteriores en

distintas especies:

caprinos (Waxman y col., 2001), caninos (Heinen, 2002), equinos (Carretero y col., 2002); ovinos (Shem Tov y
col., 1997b; Sidhu y col., 2010) y cerdas (Petracca y col., 1993) vacas (Shem Tov y col., 1997b).

Un análisis no compartimental es suficiente para describir con precisión el comportamiento cinético de los
fármacos en el organismo.
 IV. Resultados y Discusiones
IV.5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

Tabla IV.7: Comparación de los parámetros farmacocinéticos de la marbofloxacina (media ± D.E.) luego de la administración de 2
mg/kg por vía intramuscular a 5 cabras al inicio (4-8 días post-parto), durante el pico (25-30 días post-parto) y al final (150-155 días
post-parto) de la lactación.

Parámetro Inicio Pico Final

Media D.E. Media D.E. Media D.E.
ABC0-∞ (μg h/ml) 5,15* 1,87 4,50* 0,89 7,14 1,01

T1/2el (h) 3,33 1,16 3,19 0,76 4,12 1,57

Tmax (h) 2,70 0,84 1,85 0,96 2,10 0,96

Cmax (μg/ml) 0,68 0,15 0,71 0,14 0,91 0,37

TMR (h) 6,09 1,63 5,30* 1,08 7,00 1,32

ABC0-∞: área bajo la curva, T1/2el: vida media de eliminación, Tmax: tiempo en el que se alcanza la concentración máxima, Cmax:
concentración plasmática máxima, TMR: tiempo medio de residencia.
 IV. Resultados y Discusiones
IV.5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

Parámetro Inicio Pico Final

Media D.E. Media D.E. Media D.E.

ABC0-∞ (μg h/ml) 5,15* 1,87 4,50* 0,89 7,14 1,01

T1/2el (h) 3,33 1,16 3,19 0,76 4,12 1,57

Tmax (h) 2,70

2,70 0,84
0,84 1,85
1,85 0,96
0,96 2,10
2,10 0,96
0,96

CCmax (μg/ml)
(μg/ml)
0,68 0,15 0,71 0,14 0,91 0,37
max 0,68 0,15 0,71 0,14 0,91 0,37

TMR (h) 6,09 1,63 5,30* 1,08 7,00 1,32

Sidhu y col., Rabab y col.,

1 y 2 µg/ml
2010 : 0,57 h 2015: 1,36 h
 IV. Resultados y Discusiones
IV.5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

Parámetro Inicio Pico Final

Media D.E. Media D.E. Media D.E.

ABC0-∞
ABC (μg h/ml)
0-∞ (μg h/ml) 5,15*
5,15* 1,87
1,87 4,50*
4,50* 0,89
0,89 7,14
7,14 1,01
1,01

T1/2el (h) 3,33 1,16 3,19 0,76 4,12 1,57

Tmax (h) 2,70 0,84 1,85 0,96 2,10 0,96

Cmax (μg/ml) 0,68 0,15 0,71 0,14 0,91 0,37

TMR (h) 6,09 1,63 5,30* 1,08 7,00 1,32

TMR (h) 6,09 1,63 5,30* 1,08 7,00 1,32

Petracca y col., 1993

 IV. Resultados y Discusiones
IV.5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

Parámetro Inicio Pico Final

Media D.E. Media D.E. Media D.E.

ABC0-∞ (μg h/ml) 5,15* 1,87 4,50* 0,89 7,14 1,01

TT1/2el (h)
(h) 3,33
3,33
1,16
1,16
3,19
3,19
0,76
0,76
4,12
4,12
1,57
1,57
1/2el

Tmax (h) 2,70 0,84 1,85 0,96 2,10 0,96

Cmax (μg/ml) 0,68 0,15 0,71 0,14 0,91 0,37

TMR (h) 6,09 1,63 5,30* 1,08 7,00 1,32

Diferentes en
otros estados -
fisiológicos.
 IV. Resultados y Discusiones
IV.6. PASAJE DESDE LA SANGRE A LA LECHE

Concentración de marbofloxacina en leche (µg/ml), en diferentes

momentos de la lactación.

Horas post- Cabra Cabra Cabra Cabra Cabra

Media D.E.
administración A B C D E

Concentración de marbofloxacina en leche (µg/ml),al inicio

12 0,26 0,67 0,47 0,33 0,42 0,43 0,16
24 ND ND ND ND ND

Concentración de marbofloxacina en leche (µg/ml),durante el pico

12 0,11 0,16 0,28 0,36 0,39 0,26 0,12

24 ND ND ND ND ND
Concentración de marbofloxacina en leche (µg/ml), al final
12 0,87 0,75 0,78 0,56 0,81 0,75 0,12

Se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre el pico y el final de lactación.

 IV. Resultados y Discusiones
IV.8. INTEGRACIÓN DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS/FARMACODINÁMICOS (PK/PD)

Tabla IV.11: Valores de los parámetros, resultantes de la integración ABC/CIM.

Etapa CIM Cabra A Cabra B Cabra C Cabra D Cabra E

Escherichia coli-0,016µg/ml
Escherichia coli-0,016 µg/ml 374,37 235,62 493,75 200,62 306,25
INICIO

Pasteurella
Pasteurellamultocida-0,031
multocida-0,031µg/ml
µg/ml 193,23
193,23 121,61
121,61 254,84
254,84 103,55
103,55 158,06
158,06

Staphylococcus
Staphylococcusaureus-0,229
aureus-0,229µg/ml
µg/ml 26,16
26,16 16,46
16,46 34,50
34,50 14,02
14,02 21,40
21,40

Escherichia coli-0,016µg/ml
Escherichia coli-0,016 µg/ml 346,25 311,88 280,63 196,88 271,25
PICO

Pasteurella multocida-0,031
Pasteurella multocida-0,031 µg/ml
µg/ml 178,71 160,97 144,84 101,61 140,00

Staphylococcus aureus-0,229
Staphylococcus aureus-0,229 µg/ml
µg/ml 24,19 21,79 19,61 13,76 18,95
Escherichia coli-0,016 µg/ml 468,13 503,75 481,88 342,50 433,75
FINAL

Pasteurella multocida-0,031 µg/ml 241,61 260,00 248,71 176,77 223,87

Staphylococcus aureus-0,229
Staphylococcus aureus-0,229 µg/ml
µg/ml 32,71 35,20 33,67 23,93 30,31
 IV. Resultados y Discusiones
IV.8. INTEGRACIÓN DE LOS PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS/FARMACODINÁMICOS (PK/PD)

Tabla IV.14: Valores de los parámetros, resultantes de la integración Cmax/CIM.

Etapa CIM Cabra A Cabra B Cabra C Cabra D Cabra E

Escherichia coli-0,016
Escherichia coli-0,016µg/ml
µg/ml 53,75 36,25 49,37 30,00 42,50
INICIO

Pasteurella multocida-0,031
Pasteurella multocida-0,031µg/ml
µg/ml 27,74 18,71 25,48 15,48 21,94

Staphylococcus aureus-0,229
Staphylococcus aureus-0,229 µg/ml
µg/ml 3,76 2,53 3,45 2,10 2,97

Escherichiacoli-0,016
Escherichia coli-0,016µg/ml
µg/ml 55,63 51,25 36,25 38,13 41,25
PICO

Pasteurellamultocida-0,031
Pasteurella multocida-0,031 µg/ml
µg/ml 28,71 26,45 18,71 19,68 21,29

Staphylococcusaureus-0,229
Staphylococcus aureus-0,229 µg/ml
µg/ml 3,89 3,58 2,53 2,66 2,88

Escherichia coli-0,016
Escherichia coli-0,016µg/ml
µg/ml 58,75 96,25 45,63 38,75 46,25
FINAL

Pasteurella multocida-0,031
Pasteurella multocida-0,031µg/ml
µg/ml 30,32 49,68 23,55 20,00 23,87

Staphylococcus aureus-0,229
Staphylococcus aureus-0,229 µg/ml
µg/ml 4,10 6,72 3,19 2,71 3,23
 V. Conclusiones

 Se ha estudiado el perfil farmacocinético de la marbofloxacina administrada por vía intramuscular a cabras en

lactación, el cual mostró similares características que en otras especies en lactación como son búfalas y ovejas.

 Cuando se estudió si el momento de la lactación modificaba el perfil de la droga, se observó que al final de la
lactación las concentraciones plasmáticas y el área bajo la curva fueron mayores que al inicio y durante el pico. El
tiempo medio de residencia también sufrió modificaciones siendo menor durante el pico, no encontrándose
modificaciones en el resto de los parámetros.

 En el estudio de la llegada a leche de la marbofloxacina pudo comprobarse que se encontraron concentraciones

de la droga únicamente durante el primer ordeñe (12 horas posteriores a su administración). Las concentraciones
alcanzadas fueron significativamente menores durante el pico de la lactación que en el resto.
GRACIAS