PROTOCOLO DE

ENSAYO, Daniel Ariza

ASGURAMIENTO Gabriela Parra

Laura Salazar
Y CONTROL DE
BIOENSAYOS
BIOENSAYO DE TOXICIDAD
AGUDA CON DAPHINA MAGNA

 Principio: Dentro del grupo de cladóceros,

las especies del género Daphnia son las
más utilizadas como organismos de
prueba o de referencia en pruebas de
toxicidad. La amplia distribución
geográfica, el importante papel que
cumplen al interior de la comunidad
zooplanctónica, la facilidad de cultivo en
el laboratorio, la reproducción
partenogenética (lo cual asegura una
uniformidad de respuesta) y el corto ciclo
de vida con la producción de un alto
número de crías, han hecho de este grupo
un ideal para la evaluación de toxicidad,
de carácter universal.
MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

hembras
MATERIA
partenogenéticas
BIOLÓGICO
de D. magna
MATERIAL DE LABORATORIO Y REACTIVOS

 Materiales de laboratorio:  Reactivos:

Acuarios de 3 l de capacidad,vaso de NaHCO3, MgSO4, KCl, CaSO4•2H2O,
precipitado de 2 000, 1 000 y 600 ml, Biotina, Tiamina, Vitamina B12, Na2SeO4,
pipetas volumétricas y graduadas de 1, K2Cr2O7, Agua deionizada o destilada
2, 5, 10 y 20 ml, matraz aforado de 100 ml,
pipetas pasteur y bulbos de látex, pipetas
volumétricas de 1, 2, 5 y 10 ml, peras para
pipetas, pipetas automáticas de 250, 500
y 1 000 ml; puntas para micropipetas,
recipientes plásticos de 30, 50 y 100 ml,
papel aluminio, garrafón o bidón de
veinte litros, manguera delgada para
bombas de acuario, matraz kitasato de
dos litros, platos para pesar reactivos,
espátulas, hielera y hielo o geles
refrigerantes, papel parafilm, tubos de
ensayo.
  microscopio estereoscópico, balanza analítica,
plancha de agitación con magneto, bombas para
acuario, controlador de temperatura ambiente
(equipo de aire acondicionado u otro),
refrigerador (4± 2 °c), bomba de vacío, mechero
EQUIPOS de bunsen, autoclave o equivalente, medidor de
oxígeno disuelto, potenciómetro, tituladores para
dureza y alcalinidad, termómetro, sistema
purificador de agua (deionizador, sistema milli-q) o
una fuente de abastecimiento de agua destilada,
centrífuga.
Condiciones recomendadas para
el mantenimiento de cultivos de
Daphnia magna.
Procedimiento
de la prueba
Diagrama de
flujo
 Expresión de los resultados

La mortalidad en el control negativo no La concentración final de oxígeno

debe exceder el 10%. disuelto debe ser mayor de 2 mg/L

La CL50 para el tóxico de referencia

deberá estar dentro de los límites de
confianza preestablecidos en la carta
control. En caso de emplear un control
positivo de concentración cercana a la
CL50, los valores de mortalidad obtenidos
deberán encontrarse cercanos al 50%. Se
puede considerar aceptable el
encontrar mortalidades entre el 33 y 57
por ciento
 ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA CON HYDRA
ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA CON HIDRA ATTENUATA
ATTENUATA
 SON MICROINVERTEBRADOS DE
AMPLIA DISTRIBUCION
GEOGRAFICA Y SE
CARACTERIZAN POR SER
ANIMALES PLURICELULARES;
DISPONEN DE DOS CAPAS:

EPIDERMIS GASTRODERMIS

Algunas células dan Algunas células dan

origen a los órganos origen a los órganos
característicos de característicos
defensa y ataque nutritivo musculares y
secretoras

NEMATOSITOS
Son empleadas como Los ensayos de
organismos de prueba toxicidad permiten
por la facilidad de su determinar subletalidad
cultivo en laboratorio y y letalidad potencial de
su rápida reproducción. sustancias químicas
puras.

Durante el ensayo se Las pruebas tienen una

hacen exámenes duración máxima de
microscópicos y se 96h en los cuales los
registran los cambios microorganismos son
morfológicos expuestos al toxico.
producidos diariamente
ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA CON SEMILLAS
DE LECHUGA
 PRINCIPIO

 El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa L) es una

prueba estática de toxicidad aguda (120 h de exposición) en la que se
pueden evaluar los efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas
complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de
las plántulas durante los primeros días de crecimiento.
 Agua dura reconstituida
(APHA, 1992). Para su
Material biológico: semillas
preparación se recomienda Cápsulas de Petri de 100
de lechuga (Lactuca sativa
utilizar reactivos Grado ACS mm de diámetro.
L var. mantecosa).
y agua destilada en vidrio o
Millipore Supera Q.

Papel de filtro Whatman Resistencia de la fibra del

núm. 3 (o equivalente), 90 papel para que las
Trama amplia y porosa que
mm de diámetro. El papel radículas crezcan por su
REACTIVOS de filtro que se seleccione
como sustrato de
asegure una buena
capacidad de retención de
superficie sin atravesarlo,
situación que dificultaría la
líquido.
Y germinación debe tener las
siguientes características:
remoción de las plántulas
sin dañarlas.

MATERIALES
Que no promueva el
Ausencia de residuos
desarrollo de hongos (no
tóxicos (ej. blanqueadores).
asociados a las semillas)
Matraces aforados de 50 mL.

Pipetas volumétricas de 1, 2, 5 y 10 mL.

Regla u otro elemento de medición.

Pinzas.

Toallas de papel.

Bolsas plásticas.

Cámara oscura termostatizada (22± 2 °C).