UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

ALTIPLANO
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA
MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES ESTANDAR

Presentado por:
• SHANTHAL YHAMILET SUCARI YANQUE
• JAVIER FELIPE VILCA FIGUEROA
• JHOANDY ARTUR LEE ARAPA PUMA
 PREPARACIÓN DE SOLUCIONES STANDAR

• Soluciones que con mayor frecuencia son utilizadas en las

experiencias inmunoserológicas.
• En la preparación de estos fluidos que son usados para la
suspensión de microorganismos, células sanguíneas, o cultivo de
células, y en las reacciones “in vitro”
• En el área Inmunoserología y Virología se realizan estudios
destinados al diagnóstico de enfermedades infecciosas y virales
humanas utilizando diferentes metodologías que incluyen a los de
observación directa, de detección de componentes virales
(antígenos y ácidos nucléicos) y serológicos para investigar
anticuerpos de tipo IgG e IgM.
 IMPORTANTE

• El agua con la que se preparan estas soluciones deberá

ser destilada o desmineralizada.
• Estas soluciones deberán tener una presión osmótica
semejante al punto isotónico de la célula que sería
suspendida. Ej : los glóbulos rojos en medio no isotónicos
se lisan.
• Deberán contener un amortiguador para dar a las células
un pH. óptimo.
• La presencia de iones son necesarios para el
mantenimiento óptimo de células particularmente de
mamíferos.
1. SOLUCIÓN SALINA

• Solución importante por contar con los iones Na y Cl

(en un 0.85%).
• Tiene una presión osmótica equivalente a la del suero
de mamíferos y puede ser utilizado para las
suspensiones de células de la sangre, y la mayoría de
los microorganismos; sin embargo no contienen,
amortiguadores.
2. SOLUCIÓN SALINA FENOLADA.

• Esta solución se empleará en las soluciones de antígenos

bacteriales como inactivante y en pruebas de
aglutinación.
Procedimiento.
• Se prepara al 5 %; agregando 5 ml. de fenol a 95 ml. de
solución salina. Se empleará la solución salina
anteriormente preparada.
• Rotular.
3. SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

• Son aquellas soluciones cuya concentración de hidrogeniones

varía muy poco al añadirles ácidos o bases fuertes.
• El objeto de su empleo, tanto en técnicas de laboratorio
como en la finalidad funcional del plasma, es precisamente
impedir o amortiguar las variaciones de PH.
• La aplicación más importante de esta teoría es, para los
fisiólogos, el estudio de la regulación del equilibrio ácido-
base.
• La concentración de hidrogeniones del agua pura
experimenta una elevación inmediata cuando se añade una
mínima cantidad de un ácido cualquiera. No ocurre así en la
sangre, que admite cantidades del mismo ácido,
notablemente mayores, sin que la concentración de
hidrogeniones aumente de una manera apreciable.
 3.2. BUFFER BARBITAL SÓDICO (VERONAL)
• Esta solución es especial en trabajos de inmunoelectroforesis y con el
pH. 8.6, 0.01 M. se guardará en refrigeración hasta el momento de uso.
Procedimiento:
Pesar:
Acido dietilbarbitúrico. 1.28 gr.
Barbital sódico 10.60 gr.
Agua 1.000 ml.
• Disolver en una fióla en agitación constante el barbital sódico con parte
del agua (800 ml.).
• En un beaker disolver calentando ligeramente el ácido dietilbarbitúrico,
dejar enfriar.
• Mezclar ambas soluciones, envasar a 1.000 ml. Con agua destilada.
• Rotular.
3.1. BUFFER SALINA FOSFATO (PBS).

• Soluciones amortiguadoras o búffers que son los que resisten

la adición de ácidos y álcalis sin cambiar su pH.
• La Solución Salina Amortiguada por Fosfatos (PBS) constituye
una solución amortiguadora de pH comúnmente empleada
para procedimientos bioquímicos. Su osmolaridad y
concentración de iones (Cl- , Na+ y K+ ) es muy semejante a la
del líquido extracelular de los mamíferos. Esta solución se
prepara a partir de Cloruro de Sodio, Fosfato de Sodio y, en
algunas formulaciones, con Fosfato de Potasio.
PROCEDIMIENTO

Materiales:
PARA 1000ML DE PREPARACIÓN
Solunion A ml Solucion B ml Agua Destilada ml pH
85 405 500 7.4

• Solucion A 95/5=19g
• Solucion B 405/5=81
• Para 100ml de preparación
(SOLUCIÓN A)
27,65-------------------1000
X---------------------100
X= 2.76
(SOLUCIÓN B)
53,65-------------------1000
X-------------------100
X= 5,365
PESAR

Compuestos Cantidad
(A) Bifosfato de Sodio 2,760 g
NaH2PO4
(B) Fosfato de Sodio 5,375g
Na2HP
HOMOGENIZAR

AGUA compuesto peso

DESTILADA
100ML Bifosfato de sodio 2,760 g
NaH2PO4
100ML Fosfato de Sodio 5,375g
Na2HP
HOMOGENIZAR
• Homogenizar la muestra A y B extrayendo
las cantidades siguietes:

• Solución A 95/5=19g 95/5=19g

• Solución B 405/5=81 405/5=81

• Dejas reposar durante un corto tiempo .

• Rotular.
MUESTREO PARA MEDIR PH

• Se tomo una muestra para ser

llevada a un laboratorio que posea
peachímetro.
RESULTADO

• La lectura del pH :
PH= 7.4
CONCLUSIÓN

• Se concluyó que esta solución no es toxica para las células

• Se utiliza para diluir sustancias y utilizadas para lavar los

recipientes que contiene células.

• La solución es ligeramente alcalina.

BIBLIOGRAFIA

• https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b5934?lang=en&region=P
E
• https://en.wikipedia.org/wiki/Immunoelectrophoresis
• https://es.wikipedia.org/wiki/Tamp%C3%B3n_fosfato_salino
• http://www.genomica.uaslp.mx/Protocolos/Cell_Buffer_PBS.pdf
• http://corinto.pucp.edu.pe/quimicageneral/contenido/368-soluciones-buffer-o-
amortiguadoras.html
GRACIAS