UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL, GEOGRÁFICA Y

ECOTURISMO

• TEMA:
CINÉTICA ENZIMÁTICA
 INTRODUCCIÓN
Las enzimas son proteínas que realizan la catálisis de las reacciones
químicas que se llevan a cabo en los seres vivos. Aunque las reacciones
enzimáticas obedecen a los mismos principios de la cinética química, se
diferencian de éstas por el hecho de que las enzimas son saturadas por los
substratos.

Durante una reacción enzimática, el substrato S se une químicamente a la

enzima E para formar un complejo "enzima-substrato" (ES).

Luego de sufrir varias reacciones químicas, el complejo ES se rompe para

dar origen al producto P, liberando a la enzima E, que puede volver a iniciar
otro ciclo catalítico.

E + S \=====\ ES \=====\ E + P
CAPÍTULO I
¿QUÉ ES UNA ENZIMA?
 Los enzimas son biomoléculas
especializadas en la catálisis de
las reacciones químicas que
tienen lugar en la célula.
 Son capaces de aumentar la
velocidad de las reacciones
químicas mucho más que
cualquier catalizador artificial
conocido.
 Son altamente específicos para
cada reacción que catalizan
¿CÓMO FUNCIONAN?
Las enzimas trabajan de manera específica
sobre elementos específicos:
 El sustrato
Es el elemento específico sobre el que va a trabajar
la enzima. Cada enzima solo actúa sobre un tipo de
sustrato con el que encaja.
 La enzima
Cuando un sustrato pasa cerca de una enzima que
encaja con su forma (su enzima específica), se unen y se
produce la reacción química.
 La co-enzimas y co-factores
Pero para que este proceso pueda llevarse a cabo,
algunas enzimas necesitan la participación de un tercer
componente, las co-enzimas o co-factores, que son piezas
complementarias necesarias para que se active la acción
enzimática.
CATALIZADORES
Es una sustancia que incrementa la velocidad a la que se
produce una reacción química sin consumirse en la
reacción. Ellos tienen la característica, de que cambian
la energía de activación de una determinada reacción y
por lo tanto varían la velocidad de la reacción.
CLASIFICACIÓN DE CATALIZADORES
 Catalizadores Homogéneos

 Catalizadores heterogéneos
ESTRUCTURA DE ENZIMAS

 Las enzimas tienen una estructura

tridimensional sin la que no pueden
desarrollar su actividad. Poseen el centro
activo al que se unen los sustratos
mediante un acoplamiento especial y
químico, en el que se produce la reacción
catalítica.
CENTRO ACTIVO
Es una cavidad existente en la superficie
del enzima que está forrada
interiormente por una serie de restos de
aminoácidos.
Las enzimas son, en general, proteínas. Algunas son proteínas
en sentido estricto, otras poseen una parte proteica
(apoenzima) y una parte no proteica (cofactores).
 APOENZIMA
Determina la especificidad de la enzima.
 COFACTORES
- Simples iones, cationes en particular, como el Cu++ o el
Zn++.
- Sustancias orgánicas mucho más complejas, en cuyo caso, se
llaman coenzimas.
Las enzimas están conformadas a su vez por:

Una cadena peptídica Varias cadenas de

(estructura terciaria) peptídicos (estructura
cuaternaria)
COMPLEJO ENZIMA SUSTRATO
 La hipótesis del complejo enzima-sustrato explica de
modo satisfactorio el efecto de saturación del enzima
por el sustrato observado en los estudios de cinética
enzimática: cuando la concentración de sustrato es
muy superior a la concentración del enzima en el
medio de reacción.
MECANISMOS
 Modelo de llave-cerradura
Como lo indica su nombre, este
modelo plantea una analogía
entre la interacción de las
enzimas con su sustrato y el
funcionamiento de una llave que
se complementa específicamente
con una única chapa o
cerradura.

 Modelo de encaje-inducido
Este modelo sugiere una
interacción más flexible y
plástica entre la enzima y su
sustrato.
ESPECIFICIDAD
 Los enzimas presentan un alto grado de
especificidad química. Es capaz de
discriminar entre dos sustancias que
potencialmente podrían actuar como su
estratos. La especificidad de los enzimas
reside en esta complementariedad
estructural. Así, aquellos potenciales
sustratos que, por falta de acoplamiento
espacial y/o químico, no puedan acceder al
centro activo del enzima, no podrán ser
transformados por él.
CATÁLISIS QUÍMICA
. La teoría cinética química establece que las reacciones químicas
transcurren molécula a molécula de modo que una reacción tal como:
R (reactivos) → P (productos)

Determinada moléculas R, en un instante dado, posee energía suficiente

como para alcanzar un estado activado llamado estado de transición, en
el que es muy fácil que se rompan o se formen uno o más enlaces
químicos para formar los productos P.

La velocidad de una reacción química es proporcional al número de

moléculas por unidad de tiempo con energía suficiente para alcanzar el
estado de transición.

Este estado de transición posee una energía superior a la de los reactivos

y a la de los productos constituyendo entre ellos una barrera energética
que debe superarse para que la reacción tenga lugar. La diferencia entre
la energía de los reactivos y la del estado de transición recibe el nombre
de energía libre de activación
Existen dos métodos generales mediante los cuales puede
acelerarse la velocidad de una reacción química:

 Elevación de la temperatura, de modo que al

incrementarse el movimiento térmico de las moléculas
reaccionantes aumenta la fracción de moléculas que poseen
energía suficiente para alcanzar el estado de transición.

 Usar un catalizador, sustancia que se combina con los

reaccionantes para que éstos alcanzan un estado de
transición de menor energía de activación; cuando se
forman los productos se regenera el catalizador libre. Un
catalizador es una sustancia que, sin consumirse en el
proceso, aumenta la velocidad de una reacción química
rebajando la barrera de energía de activación, los
catalizadores no alteran los equilibrios de las reacciones
químicas, sólo consiguen que dichos equilibrios se alcancen
más rápidamente.
CATÁLISIS ENZIMÁTICA
 La unión entre un enzima y su sustrato para formar el complejo
enzima-sustrato se ve favorecida por la formación de una serie de
interacciones débiles (puentes de hidrógeno, interacciones iónicas,
etc.) entre grupos funcionales complementarios de ambas moléculas.
La formación de cada una de estas interacciones débiles formadas
representa la energía de fijación. La energía de fijación es la
principal fuente de poder catalítico.

 Aunque son múltiples los mecanismos según los cuales actúan estos
grupos catalíticos, en general se puede encuadrar en alguna de las
dos siguientes modalidades:

Catálisis covalente: Algunas enzimas se pueden combinar

con el sustrato, a través de un grupo catalítico.

Catálisis ácido-base: La velocidad de algunas reacciones

químicas se ve incrementada por la presencia de ácidos o bases en
el medio de la reacción.
ORDEN DE REACCIÓN
 En una reacción de orden cero, la velocidad de formación del
producto es independiente de la concentración de sustrato: v = k

 En una reacción de primer orden la velocidad de formación de

los productos es directamente proporcional a la concentración del
sustrato:

v = k [A]. Así, en la reacción:

• La velocidad de hidrólisis de la sacarosa es, en todo momento,

proporcional a la concentración de sacarosa. Dicho
matemáticamente, donde [A] es la concentración de sacarosa a
cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice
que ésta es una reacción de primer orden.
 La velocidad de hidrólisis de la sacarosa es, en todo momento,
proporcional a la concentración de sacarosa. Dicho
matemáticamente, donde [A] es la concentración de sacarosa a
cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice
que ésta es una reacción de primer orden.

 Una reacción de segundo orden es aquella en la que la velocidad

de formación del producto depende

de la concentración de dos sustratos (como en una reacción

de condensación):

v = k [A1] [A2]

del cuadrado de la concentración de un único sustrato

(reacción de dimerización):

v = k [A]2
ENERGÍA DE ACTIVACIÓN Y ESTADO
DE TRANSICIÓN.
 Sería la cantidad de energía que habría que aplicar a un sustrato
para que comience la reacción

Hay muchas reacciones con un ΔG

< 0 y que no tienen lugar o tienen
lugar a velocidades muy bajas. Se
debe a la falta de energía de
activación. Estos sustratos deben
pasar la barrera energética para
poder transformarse en productos.

La energía de activación ΔG++ es

la energía necesaria para llevar al
sustrato hasta el estado de
transición a una temperatura
determinada
MODELO DE MICHAELIS – MENTEN

OBJETIVO: Dar a conocer cuáles son los elementos y

características que intervienen en las diferentes reacciones
enzimáticas.

 La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de

reacción de muchas reacciones enzimáticas. Recibe este
nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten.
 Este modelo sólo es válido cuando la concentración
del sustrato es mayor que la concentración de la enzima,
y para condiciones de estado estacionario, es decir,
cuando la concentración del complejo enzima-sustrato es
constante.
Reacción modelo.

 Michaelis y Menten propusieron un modelo simple

para explicar la mayoría de las
reacciones catalizadas por enzimas.
 En este modelo la enzima se combina
reversiblemente con su substrato para formar el
complejo enzima-sustrato (ES) que
subsecuentemente se rompe para formar el
producto, hecho que regenera a la enzima.
 El modelo para una molécula de sustrato se muestra
continuación:

ETAPA RÁPIDA ETAPA LENT

Donde:
1. E : es la enzima
2. S : es el sustrato
3. ES : es el complejo de enzima sustrato o complejo de Michaeli
4. k1, k-1 y k2 son las constantes de velocidad de la reacción.

 𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆 ≡ 𝐶𝑂𝑁𝑆𝑇𝐴𝑁𝑇𝐸
 𝐸𝐿 𝑃𝑅𝑂𝐶𝐸𝑆𝑂 𝐷𝐸 𝐸𝑆 ⟶ 𝑃 + 𝐸 𝐸𝑆 𝐼𝑅𝑅𝐸𝑉𝐸𝑅𝑆𝐼𝐵𝐿𝐸 (concentración de pr
pequeña)
 ECUACIÓN DE MICHAELIS –
MENTEN
 La ecuación de Michaelis y Menten describe como varía la velocidad
de reacción con la concentración de sustrato:
 Se supone que la reacción enzimática es irreversible, y que el producto
no se liga con la enzima después de la reacción, entonces por medio de
diferentes pasos de derivación propuestas por Briggs y Haldane, se
obtendrá como ecuación final:
Donde:

a) V0 es la velocidad inicial de la reacc

b) V max. es la velocidad máxima

c) Km es la constante
𝐾 +𝐾
de Michaelis y Menten= 2 −1
𝐾1

d) [S] es la concentración de sustrato

Ilustración 1.Diagrama de velocidad de reacción y constante
de Michaelis-Menten
CONTROL ALOSTÉRICO
Hay enzimas que no siguen la cinética de
Michaelis-Menten. Cuando
la velocidad de reacción V se grafica
contra la concentración de sustrato, estas
enzimas son complejos con múltiples
componentes difíciles de aislar, se trata
de enzimas reguladoras conocidas como
enzimas alostéricas.
1. Homotrópicas:
Aquí el sustrato puede actuar como
efector sobre la rapidez de la reacción
enzimática, por lo general,
incrementándola.
2. Heterotrópicas:
La inhibición o estimulación es causada
por sustancias de origen natural que no
sea el sustrato
Ilustración 2. Velocidad de la
3. Mixtas: Algunas enzimas muestran reacción enzimática vs concentración
ambas características. de sustrato.
CONCLUSIONES:
 Relación de la velocidad con la concentración de
enzima: la velocidad de la reacción es directamente
proporcional a la concentración de la enzima a cualquier
concentración de substrato. Por ejemplo, si la
concentración de enzima es disminuida a la mitad, la
velocidad inicial de la reacción (v0) es reducida también a
la mitad de la original.

 La Características de Km: la constante de Michaelis-

Menten es característica de una enzima y particular para
un substrato. Refleja la afinidad de la enzima por ese
substrato. Km es numéricamente igual a la concentración
de substrato a la cual la velocidad de reacción es la mitad
de la Vmax (Km= Vmax/2). Este parámetro, Km no varía
con la concentración de enzima.
 FACTORES CONDICIONANTES QUE
AFECTAN LA FUNCIONALIDAD DE LA
ENZIMA

 Así como las estructuras tridimensionales de las

proteínas son sensibles a su ambiente y
desnaturalizan, en consecuencia la actividad de
una enzima también se ve afectada por factores
ambientales generales, como la temperatura y el
PH. cada enzima opera mejor en algunas
condiciones que en otras, porque estas
condiciones óptimas favorecen la estructura más
activa para la molécula de enzima.
LA TEMPERATURA
 La temperatura es un factor importante en la actividad de una
enzima hasta cierto punto, ya que la velocidad de una reacción
enzimática se incrementa con el aumento de la T°. En parte
porque los sustratos colisionan con los sitios activos con mayor
frecuencia cuando las moléculas se mueven con rapidez. Sin
embargo, por encima de cierta temperatura, la velocidad de la
reacción enzimática cae abruptamente.
 La agitación térmica de la molécula de enzima rompe los
puentes de hidrogeno, los enlaces iónicos y otras interacciones
débiles que estabilizan la estructura activa, la molécula
proteica finalmente se desnaturaliza.
 Cada enzima tiene una temperatura óptima a la cual la
velocidad de la reacción es máxima.
 Esta temperatura permite el mayor numero de colisiones
moleculares y la conversión más rápida de los reactivos a
productos.
 La mayoría de las enzimas humanas tienen temperaturas
óptimas entre 35°C y 40°C (cercana a la temperatura
corporal humana). Las bacterias que viven en manantiales
de agua caliente contienen enzimas con temperaturas
óptimas de 70°C o superiores.
PH
 Así como las enzimas tienen una temperatura óptima, también tienen
un pH al cual son más activas.
 Los valores óptimos del pH de las enzimas caen en el espectro de 6 a 8,
pero hay excepciones. Por ejemplo la, la pepsina, una enzima digestiva
del estomago, trabaja mejor a pH 2.
 Un ambiente acidico de este tipo desnaturaliza la mayoría de las
enzimas, pero la estructura activa de la pepsina se adapta para
mantener su estructura tridimensional funcional en el ambiente
acidico del estomago.
 Por el contario, la tripsina, una enzima digestiva que reside en el
ambiente alcalino del intestino, tiene un pH optimo de 8 y se
desnaturalizaría en el estomago.
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO:

 Existe una velocidad máxima a la cual cierta

cantidad de enzimas puede catalizar una reacción
específica. Para que se pueda alcanzar esta velocidad
máxima es necesario que la concentración de sustrato
sea muy elevada. En presencia de una concentración
de sustrato elevada se considera que la enzima se
encuentra saturada, es decir, su sitio activo está
ocupado en todo momento por moléculas de sustrato o
de producto enzimático. En esta situación un aumento
ulterior de la concentración de sustrato no afectara la
velocidad de la reacción porque todos los sitios activos
están ocupados. En condiciones normales las enzimas
no están saturadas de sustrato. En cualquier
momento dado muchas de las moléculas de enzima se
encuentran inactivas por falta de sustrato; en
consecuencia, es probable que la concentración de
sustrato altere la velocidad de la reacción.
CONCENTRACIÓN DE ENZIMA:

 En cualquier reacción enzimática, la cantidad de las

moléculas de sustrato que se trata es mayor, en
comparación con la cantidad de las enzimas. Un
aumento de la concentración de las enzimas, aumenta
la actividad enzimática por la sencilla razón, de que
más enzimas participan en la reacción. La velocidad
de la reacción, es directamente proporcional a la
cantidad de enzimas disponibles. Sin embargo, esto no
quiere decir, que un aumento constante en la
concentración de las enzimas dará lugar a un
aumento constante de la velocidad de reacción. Más
bien, una muy alta concentración de enzimas, en
donde todas las moléculas de sustrato ya se
utilizan, no tiene ningún impacto sobre la velocidad
de reacción. Para ser más exactos, una vez, que la
velocidad de reacción haya alcanzado la estabilidad,
un aumento en la cantidad de enzimas no afectará a
la velocidad de reacción.
INHIBICIÓN ENZIMATICA:

 Existen una serie de sustancias, llamadas

inhibidores, que inhiben o anulan la acción de las
enzimas sin ser transformadas por ellos. Su
estudio resulta de gran utilidad a la hora de
comprender los mecanismos de catálisis, la
especificidad de los enzimas y otros aspectos de la
actividad enzimática. La inhibición enzimática
puede ser irreversible o reversible, esta última
comprende a su vez tres tipos: inhibición
competitiva, acompetitiva y no competitiva.
1. INHIBICIÓN IRREVERSIBLE:

 Algunos inhibidores se combinan de modo permanente con

el enzima uniéndose covalentemente a algún grupo
funcional esencial para la catálisis con lo que el enzima
queda inactivado irreversiblemente. El estudio de este tipo
de inhibidores ha resultado de gran utilidad para
identificar los grupos funcionales esenciales para la
catálisis en aquellos enzimas a los que inactivan.
 Este tipo de inhibición se conoce también como
"envenenamiento" del enzima. Por ejemplo algunos
compuestos organofosforados tóxicos llamados venenos
nerviosos, que se utilizan como insecticidas, actúan
inhibiendo irreversiblemente al enzima acetilcolinesterasa,
la cual interviene en la actividad del sistema nervioso. Se
sabe que estos compuestos organofosforados inactivan al
enzima formando un enlace éster fosfórico con el grupo
hidroxilo de un determinado resto del aminoácido serina, lo
que demuestra que ese grupo funcional es esencial para la
catálisis.
2. INHIBICIÓN REVERSIBLE:

 Los inhibidores reversibles se combinan

transitoriamente con el enzima, de manera
parecida a como lo hacen los propios sustratos.
Algunos inhibidores reversibles no se combinan
con el enzima libre sino con el complejo enzima-
sustrato. Se distinguen tres tipos de inhibición
reversible.
A) INHIBICIÓN COMPETITIVA:
 El inhibidor es una molécula que presenta un cierto parecido
estructural con el sustrato, de manera que puede competir con él
por acceder al centro activo, pero que no posee ningún enlace
susceptible de ser atacado por el enzima. El inhibidor forma con
el enzima libre un complejo enzima-inhibidor de características
cinéticas análogas a las del complejo enzima-sustrato, pero que,
lógicamente, no puede descomponerse a continuación para dar
lugar al enzima libre y a los productos.
B) INHIBICIÓN INCOMPETITIVA.
 El inhibidor no se combina con el enzima libre ni afecta a
su unión al sustrato, sino que lo hace con el complejo
enzima-sustrato dando lugar a un complejo inactivo
enzima-sustrato-inhibidor, que no se descompone
posteriormente para dar lugar a los productos. El inhibidor
se coloca próximo al centro activo situado de tal manera
que impide físicamente la salida de los productos.
C) INHIBICIÓN NO COMPETITIVA:
 El inhibidor puede combinarse con el enzima libre o bien con el complejo
enzimasustrato, interfiriendo en la acción de ambos.
 Los inhibidores no competitivos se unen a un lugar del enzima diferente del centro
activo provocando en él una alteración que dificulta bien la formación del complejo
enzima-sustrato o bien la descomposición de éste para dar lugar a los productos. La
unión con el inhibidor produce dos formas inactivas: los complejos EI y ESI, ninguna
de las cuales puede descomponerse para dar lugar a los productos y al enzima libre:
 Aunque podría pensarse que los distintos tipos de inhibición estudiados pueden
desempeñar algún papel en la regulación de la actividad enzimática, todo parece
indicar que no es así; la regulación de la actividad enzimática se lleva a cabo mediante
mecanismos que no se ajustan a ninguno de los modelos de inhibición estudiados y
que se describirán en el próximo apartado.
 El interés del estudio de la inhibición enzimática reside más en su utilidad para
comprender la estructura, mecanismos catalíticos y especificidad de los enzimas, que
en una importancia biológica real.