UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

INGENIERÍA QUÍMICA

Bioquímica

6.3
6.3 Cinética Enzimática

Facilitador: Dr. Carlos Escamilla Alvarado

Equipo #2 3
Samantha Virginia Cañamar Garza
Victor Manuel Gama Terrazas
Mauricio Mellado Ayala
Nora Elena Rosales Castillo
Carolina Villarreal Mendoza
Grupo: 008
 Cinética Enzimática

 La velocidad de una reacción enzimática se define

como el cambio de la concentración de un reactivo o
producto por unidad de tiempo.

• Donde:
[A] = concentración del sustrato
[P] = concentración del producto
t = tiempo
 También se mide la afinidad de la enzima en el sustrato y la
catálisis enzimática. Esto da otra ecuación:

Donde:
Va = velocidad
k = una constante de velocidad que
depende de las condiciones de reacción
(p. ej., temperatura, pH y fuerza iónica)
x = orden de la reacción
 Al combinarlas queda:
 En la reacción A + B --> P, si el orden de A y B es 1 para cada
uno, se dice que la reacción es de segundo orden (reacción
biomolecular):
Velocidad = k[A]'[B]‘

La K tiene unidades de 1 sobre M s.

Si el reactivo no afecta al ser añadido, el reactivo está
saturado, se le da un orden de cero.
 Cinética de Michaelis-Menten
 Cuando se une el sustrato S en el lugar activo de una
enzima E, se forma un complejo intermediario (ES).
Durante el estado de transición, el sustrato se
convierte en producto. Tras un breve espacio de
tiempo, el producto se disocia de la enzima.
 Este proceso puede resumirse como sigue:

Donde:

 k1= constante de velocidad de la formación de ES

 k2 = constante de velocidad de la disociación de ES
 k3 = constante de velocidad de la formación y liberación del
producto del lugar activo.
De acuerdo con el modelo de Michaelis-Menten, se supone que
1. k2 es despreciable en comparación con k1
2. La velocidad de formación de ES es igual a la velocidad de su
degradación durante la mayor parte del curso de la reacción.
(suposición del estado estacionario.)
 Para que sea de utilidad, la velocidad de una reacción
debe definirse en términos de [S] y [E]
 La velocidad de formación de ES es igual a k1[E][S]

 velocidad de disociación de ES es igual a (k2 + k3)[ES].

 La suposición del estado estacionario iguala estas dos
velocidades:
 Michaelis y Menten introdujeron una nueva
constante, Km (denominada actualmente constante
de Michaelis):

 El valor de Km es determinado experimentalmente

 También obtuvieron la ecuación

donde Vmáx= Velocidad máxima que puede alcanzar la

reacción.
 Esta ecuación, que se denomina ecuación de Michaelis-Menten,
ha demostrado ser muy útil para definir determinados aspectos
del comportamiento enzimático.
• El número de recambio (kcal ) de una enzima se define
como:

• kcal= número de moléculas de sustrato convertidas

en producto por unidad de tiempo por una
molécula enzimática en condiciones óptimas, es
decir, saturada con el sustrato.
• [Et] = concentración total de enzima
 Una medida más útil de la eficacia catalítica se obtiene
reordenando la ecuación anterior de la siguiente forma

y sustituyendo esta función en la ecuación de Michaelis-

Menten.

 Debido a que las enzimas convierten el sustrato en

producto prácticamente cada vez que el sustrato difunde
al lugar activo, se dice que ha conseguido la perfección
catalítica.
 Cuando [S] es muy baja [Et] es aproximadamente igual a [E] y la
ecuación anterior se reduce a

 La actividad enzimática se mide en UI. Se define una UI como la

cantidad de enzima que produce 1 μmol de producto por
minuto.
 Recientemente se ha introducido una unidad
nueva de medida de la actividad enzimática
denominada katal. Un katal (kat) indica la
cantidad de enzima que transforma 1 mol de
sustrato por segundo. Un katal es igual a 6 x 107
UI).
 Representaciones de Lineweaver-
Burk

 Los valores de Km y Vmáx para una enzima se determinan

cuantificando las velocidades iniciales de la reacción a varias
concentraciones del sustrato. Se pueden obtener valores
aproximados construyendo una gráfica.
𝑉𝑚á𝑥 [𝑆]
𝑣=
𝑆 + 𝐾𝑚

1 𝐾𝑚 1 1
= +
𝑣0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
 Se trazan los recíprocos
de las velocidades iniciales
frente a los recíprocos de
las concentraciones de
sustrato (conocida como
gráfica de dobles
recíprocos de Lineweaver-
Burk).
 La línea recta 𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
La actividad de las enzimas puede inhibirse. Las moléculas que
reducen la actividad de una enzima, denominadas inhibidores,
incluyen muchos fármacos, antibióticos, conservantes
alimentarios y venenos.

 La inhibición enzimática es un medio importante para regular

las rutas metabólicas.
 Numerosos tratamientos clínicos se fundamentan en la
inhibición enzimática.
 Las investigaciones de la inhibición enzimática han permitido
a los bioquímicos diseñar técnicas que se utilizan para
demostrar la arquitectura física y química, así como las
propiedades funcionales de las enzimas.
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA.

La inhibición enzimática puede producirse cuando un

compuesto compite con el sustrato por el lugar activo de
la enzima libre, se une al complejo ES en un lugar
separado del lugar activo, o se une a la enzima libre en un
lugar separado del lugar activo.
 INHIBIDORES COMPETITIVO

Los inhibidores competitivos se unen de forma reversible a la

enzima libre, y no al complejo ES, para formar un complejo
enzima-inhibidor (El).
suelen tener una estructura semejante a la del sustrato.
INHIBIDORES ACOMPETITIVOS

En la inhibición acompetitiva, el inhibidor sólo se une al

complejo enzima-sustrato, y no a la enzima libre:
INHIBIDORES NO COMPETITIVOS

Se denomina inhibición no competitiva, cuando el

inhibidor se une a un lugar diferente del lugar activo. La
unión del inhibidor ocasiona la modificación de la
conformación de la enzima que impide la formación del
producto
 Análisis cinético de la inhibición
enzimática
A continuación se muestran los diferentes efectos que tienen los inhibidores
sobre la actividad enzimática.

Inhibición competitiva

Aumenta la 𝐾𝑚 de la
enzima y mantiene
la 𝑉𝑚á𝑥 inalterada.

Figura No. X. Análisis cinético de la inhibición

competitiva.
Inhibición acompetitiva

Se modifican ambas 𝑲𝒎 y 𝑽𝒎á𝒙 aunque

su cociente permanece igual.

Figura No. X. Análisis cinético de la inhibición acompetitiva.

Inhibición no competitiva

Disminuye 𝑽𝒎á𝒙 y aumenta la 𝑲𝒎 (la 𝑲𝒎

no varía en los casos, en los que los
valores de la K de unión a E y ES sean los
mismos).

Figura No. X. Análisis cinético de la inhibición no competitiva.

 Inhibición irreversible
Existen dos tipos de inhibiciones enzimáticas: reversible e
irreversibles.

En las inhibiciones reversibles se

encuentran las inhibiciones:
competitiva, acompetitiva y no
competitiva, ya que se unen por
enlaces no covalentes

Los inhibidores irreversibles se unen

covalentemente a la enzima, con Figura No. X. Inhibición no competitiva.
frecuencia a una cadena lateral del
lugar activo.
El inhibidor no se encuentra en equilibrio
con el complejo EI. Por lo tanto, no se
reactiva la enzima removiendo el inhibidor.

Se caracteriza por un aumento progresivo

en el tiempo, llegando hasta la inhibición
completa ( I > E).

La efectividad del inhibidor se como una

constante de velocidad, que determina la
fracción de la enzima inhibida en un
período determinado de tiempo.

Figura No. X. Citarabina.

 Enzimas alostéricas
Son proteínas con varias subunidades, que generalmente catalizan pasos
reguladores clave de las rutas bioquímicas.

• Presentan cinética sigmoidea

(cooperatividad entre las
subunidades).

• Poseen un sitio activo y uno alostérico.

• La unión de un sustrato a uno de los

sitios, afecta el enlace en los otros
sitios.

Figura No. X. Perfil cinético de

una enzima alostérica.
Dependiendo del sitio en el cual se realice la
unión se pueden tener :

• Efectos positivos que aceleran la

velocidad de reacción.

• Efectos negativos que disminuyen la

velocidad de reacción.