ANÁLISIS EXPERIMENTAL

1) Material de laboratorio utilizado

2) Preparación de muestras patrón para elaborar la recta
de calibrado
3) Preparación de las muestras problema
4) Proceso de extracción de la cafeína en el café.
4.1) aplicación de método cromatógrafico (HPLC)
4.2) aplicación de método espectroscópico UV.
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 2) Preparación de muestras patrón para elaborar
• De los datos en (*)
𝑚𝑔
𝐶 𝑝𝑝𝑚 = 40 = 400 𝑝𝑝𝑚
100𝑚𝑙

Ya preparada la disolucion Traspasar con ayuda de • De los datos en (**)

patron de cafeina.40 mg pipeta aforada(10mL),a un
de cafeína en matraz matraz de 100 mL a 400𝑝𝑝𝑚𝑥10𝑚𝐿
aforado de 100 ml….(*) enrase….(**) 𝐶 𝑝𝑝𝑚 = = 40 𝑝𝑝𝑚
100𝑚𝐿
• Diluyendo (***)
𝟒𝟎𝒑𝒑𝒎𝒙𝟓𝒎𝑳
𝑪 𝒑𝒑𝒎 = = 𝟒 𝒑𝒑𝒎
𝟓𝟎𝒎𝑳
Se toma alícuotas de 5 ml De manera analoga se

la recta de calibrado
de esta última preparan 4 soluciones más
solucion+2ml HCl y se diluidas del intermedio de
enraza en 50 mL de 8,16,24,32 ppm
agua...(***)

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 Tipos
¿Qué es ? HPLC Ventajas de HPLC

• Técnica de • De • Cromatografía • Posibilidad de

separación mas absorción:Fase de alta volver a utilizar
recurrida. móvil no polar. eficiencia. la columna
• Fáciladaptación • De reparto:Fase • La fase fija en multitud de
para cálculos móvil poco polar. tamaño de veces.
cuantitativos. • De intercambio micrones. • Columnas más
• Aplicable a iónico. • La fase movil eficaces con
sustancias de • De exclusión. acondicionada a menos longitud.
interés presiones altas. • Continuidad de
industrial. flujo.
• Resultado
continuo
(detector en
continuo).
• El tiempo
necesario para
efectuar una
separación se
reduce a una
centésima
Facultad parte.Química-Analisis Instrumental
de Quimica e Ingeniería
Instrumentacion Reactivos:

Cromatografo Perkin Elmer Series 410 LCPUMP.

Cafeína anhidra.

Bomba Perkin Elmer LC-410.

Acetonitrilo.

Detector Perkin Elmer LC-410.

Agua.

Interfase Perkin Elmer 970.

Jeringa tipo hamilton de 50 uL.

Columna de acero inoxidable Nucleosil 100(C18):longitud 100

mm,diametro 4.6 Facultad de Quimica e Ingeniería Química-Analisis Instrumental
 Corrida con sistema cromatográfico
Fase móvil en diversas muestras de cafeínas Cromatograma de la fase movil

Si nuestro Wreal de cafeína fue

39,9mg.
Tendríamos que nuestras
diluciones serían
3.99;7.98;15.96;23.94 y 31.92
ppm

Cromatograma de la fase
móvil 70% de agua y 30% de
acetonitrilo con la solución
patrón de cafeína de 15,96
ppm

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 Con solución patrón de cafeína 31.92 ppm.

Por eso se decidió ir probando diferentes

proporciones de fase móvil con una mayor cantidad
de acetonitrilo que de agua hasta encontrar la
composición óptima de fase móvil agua-acetonitrilo
en proporción 20:80 que nos permitía obtener un
tiempo de retención superior al minuto (se gasta
menos cantidad de producto que si hubieran sido 2
Se comprobó que manteniendo la misma
proporción de fase móvil pero minutos) y una forma de pico muy bien definida.
aumentando progresivamente la velocidad, se
conseguían unos picos mucho más
definidos aunque su tiempo de retención
disminuía significativamente. Facultad de Quimica e Ingeniería Química-Analisis Instrumental
Proceso

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Resultados obtenidos Las soluciones patrón de cafeína con
concentraciones: 4,00 ppm, 8,00 ppm,
16,00 ppm, 24,00 ppm y 32,00 ppm se
inyectaron por separado en el sistema
Concentraciones patrones de cafeínas y sus aréas. cromatográfico y se registraron los
siguientes cromatogramas

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 Facultad de Quimica e Ingeniería Química-Analisis Instrumental Curva de calibrado
Y = 294.506 · x – 22.523
R2= 0,99940061

Y: Área
m: Pendiente de la curva de calibrado.
x: Concentración de cafeína de las muestras
inyectadas (ppm)
b: Ordenada en el origen de la curva de calibrado

Ya con estos datos se puede hallar la concentracion de APROM=3155682,75

cafeína en los dstintos tipos de café expuestos. En la ecuación:
3155682,75 = 294.506 · x – 22.523
x=10,79ppm
 Café soluble natural descafeinado Carrefour:
25 𝑚𝐿 𝑠𝑜𝑙 𝐵 3.03 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎/𝑐𝑎𝑓𝑒
100 𝑚𝐿 𝑠𝑜𝑙 𝐴. 𝑥 = 0.7575 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑎𝑛 𝑒𝑛 𝑐𝑎𝑓𝑒
10 𝑚𝐿 𝑠𝑜𝑙 𝐴 1000 𝑚𝐿 𝑠𝑜𝑙 𝐵

0.7575 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 𝑐𝑎𝑓𝑒

%𝐶𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 = 𝑥100% = 0.25%
300 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒

Por lo tanto, se estaría hablando de que el café soluble

natural descafeinado Carrefour posee una concentración
real de 0,25% de cafeína.

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