UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM NEUROLOGIA

LABORATÓRIO DE NEUROIMUNOGENÉTICA

BASES GERAIS DA BIOLOGIA

MOLECULAR E GENÉTICA
Dra. Fabrícia Lima Fontes-Dantas
fontesfl@hotmail.com
 Qual a importância da Genética e Biologia Molecular
na Medicina?
 Diagnóstico;
 Prevenção;
 Tratamento de doenças;
 Prognostico;
 Desenvolvimento de fármacos de acordo com o perfil
genético (farmacogenética);
 Identificação e criminalística;
 Desenvolvimento da Biotecnologia;
 Estudo da herança e da variação, responsável pela grande
variedade de formas de vida (estudos filogenéticos e
evolutivos).
CONCEITOS
 Genética:
 Ramo da biologia que estuda a forma como se
transmitem as características biológicas de geração
para geração.

 Biologia Molecular:
 Estuda principalmente as interações entre os vários
sistemas da célula, partindo da relação entre o DNA,
o RNA e a síntese de proteínas, e o modo como essas
interações são reguladas.
FLUXO DA INFORMAÇÃO GÊNICA
FLUXO DA INFORMAÇÃO GÊNICA

Mutações

SNPs
Alterações estruturais

Regulação pós-transcricional

Regulação pós-transcricional
FLUXO DA INFORMAÇÃO GÊNICA
CONCEITOS

A = gene dominante
a = gene recessivo
CONCEITOS

 Herança Mendeliana: 1 gene modificado pode levar a

alteração do fenótipo;

GG GT TT GG GT TT

Fenótipo
Fenótipo

Genótipos Genótipos
CONCEITOS

 Herança Complexa: Conjunto de genes alterados que levam

a modificação de um fenótipo.
CONCEITOS

6p21–6p23
224 Loci
Modelo molecular de alelos HLA-DRB1 que conferem
susceptibilidade ou resistência em esclerose múltipla
CONCEITOS
 O que são marcadores??
 Marcadores Morfológicos:
 É um fenótipo de fácil identificação, característica
visual.
 Marcadores Bioquímicos:
 Proteínas, citocinas, enzimas.
 Marcadores Moleculares:
 Polimorfismo detectado na sequencia de DNA;
 Não sofre influências ambientais;
 Maior desvantagem é a necessidade de técnicas e
equipamentos mais complexos.
TIPOS DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS
 Inserção/deleção:
 Microssatélites;
 2 a 4 nucleotídeos;
 STRs – curtas repetições em tandem.
 Minissatélites;
 10 a 100 nucleotídeos;
 VNTRs – número variável de repetições em tandem.

 CNVs – Copy Number Variation:

 Variação no número de cópias de um mesmo segmento de DNA;
 Inserção ou deleção de 200 pb até 2Mb.
 A Single Nucleotide Polymorphism (SNP):
 Pequena mudança, ou variação, que pode ocorrer
numa sequência de DNA em uma porção significativa
(mais de 1% ) de uma população;
 Principal fonte de variação genética.
PROJETO HAPMAP
SNP X MUTAÇÃO
 SNPs são alterações no DNA que se mantém nas
gerações futuras:
 SNP: variação >1%
 Mutação: variação <1%
CONSEQUÊNCIAS DOS POLIMORFISMOS GENÉTICOS

Ganho de função

Perda de função

Inatividade
CLASSIFICAÇÃO DOS SNPS

Não
codificantes Codificantes

Não-
Sinônimos
sinônimos

Não-
Conservativas
conservativas
GENOTIPAGEM DE SNPS

 1 a cada 1000 pb;

 Maioria são neutros;
 Baixa taxa de mutação (10-7);
 Agricultura e pecuária;
 Identificação humana;
 Doenças complexas;
 Farmacogenômica.
GENOTIPAGEM DE SNPS

 1 a cada 1000 pb;

 Maioria são neutros;
 Baixa taxa de mutação (10-7);
 Agricultura e pecuária;
 Identificação humana;
 Doenças complexas;
 Farmacogenômica.
GENOTIPAGEM DE SNPS

 1 a cada 1000 pb;

 Maioria são neutros;
 Baixa taxa de mutação (10-7);
 Agricultura e pecuária;
 Identificação humana;
 Doenças complexas;
 Farmacogenômica.
GENOTIPAGEM DE SNPS

 1 a cada 1000 pb;

 Maioria são neutros;
 Baixa taxa de mutação (10-7);
 Agricultura e pecuária;
 Identificação humana;
 Doenças complexas;
 Farmacogenômica.
SEQUENCIAMENTO
 Projeto Genoma Humano;
 As plataformas de sequenciamento de nova geração são uma
alternativa poderosa para estudos de genômica estrutural e
funcional;
 1ª geração (Degradação química e Interrupção da cadeia-Sanger);
 2ª geração (454-Roche, Illumina Genome Analyser-HiSeq/MiSeq e
SOLID);
 3ª geração (Ion Torrent e PacBio RS);
 4ª geração (Nanopore)

 Genoma, Exoma ou painéis direcionados.

SEQUENCIAMENTO
3500 SERIES - APPLIED BIOSYSTEMS
ELETROFORES CAPILAR

 Moléculas de DNA migram para ânodo;

 Excitação pelo laser e detecção pela câmera CCD;
 3500 (8 capilares);
 3500xL (24 capilares).
SOFTWARE SEQUENCING ANALYSIS (SEQA)
SEQSCAPE E VARIANT REPORTER

 Softwares que processam dados para análise baseada em

uma referência;
 Utilizados para a detecção, descoberta e validação de SNPs,
tipificação de patógenos, identificação de alelos, e
confirmação da sequência;
 Alinhamento múltiplo de sequências.
ION TORRENT- LIFE TECHNOLOGIES

 Utiliza chips semicondutores abaixo da placa de

sequenciamento, que é sensível q mudanças de pH no
momento em que cada nucleotídeo é incorporado;
 10 Mb a 1 Gb em 2 horas;
 Sequenciamento de um genoma humano em menos de 1
semana com alta qualidade;
ION AMPLISEQ™

 13 painéis já disponíveis;
 Desenhar o próprio painel.
Como usar esse conhecimento na
prática clínica?
FLUXO DE TRABALHO
Como montar um painel e interpretar
as variantes encontradas?
RESUMO DOS PASSOS