Biotecnología

UNASAM
Facultad de Ingeniería de Industrias
Alimentarias
Huaraz, Mayo 2018
Es la aplicación de la ciencia y la ingeniería
en el uso directo o indirecto de organismos
vivos o partes de ellos, en sus formas
naturales o modificadas para la producción
de bienes y servicios o para la mejora de
procesos industriales.
Las técnicas biotecnológicas utilizadas se agrupar
en tres grandes áreas:
Fementaciones: involucra el uso de
microorganismos para la obtención de productos
mas estables y con mejores cualidades nutritivas
u organolepticas.
Cultivo de tejidos: Trabaja a un nivel superior a la
célula e incluye células, tejidos y órganos que se
desarrollan en condiciones controladas.
Tecnología del ADN: Involucra la manipulación de
genes a nivel del ADN, aislamiento de genes, su
recombinación y expresión en nuevas formas, etc.
ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
La lista de usos y
aplicaciones de la
biotecnología aumenta día
con día (medicina,
ganadería, agricultura, etc).
Su impacto en la sociedad
es tan grande, que incluso
se prevé que ésta será la
revolución tecnológica de
mayor envergadura para la
humanidad en el sigo XXI.
 Biotecnología

El desarrollo de la ciencia
básica y el entendimiento
de los procesos que
gobiernan la biología
y a los seres vivos es fundamental.
 Biotecnología

Con el desciframiento de la estructura del

ADN, los avances en biología y bioquímica
y, por ende, en la biotecnología, han dado
un salto cualitativo sin precedentes.
 DEFINICIÓN

Microbiología

Biología Molecular
Ingeniería Genética

ORGANISMOS
BIENES Biotecnología SERVICIOS
PARTES

Bioquímica Bioingeniería

Medicina
HOMBRE
 Biotecnología
La biotecnología moderna utiliza diversas
técnicas para acercarse a su objeto de
estudio:
– Microbiología
– Ingeniería genética
– Biología molecular
– Bioquímica
– Genómica
– Bioinformática
– Proteómica
 Se utiliza en:

•Industria Alimenticia: Arroz dorado

•Industria Farmacológica: Antibióticos
•Agroindustria: Nuevas variedades
•Minería: Biolixiviación bacteriana
•Medicina: Marcadores moleculares
 Genómica:
En estos momentos es una promesa
con grandes proyecciones científicas
y comerciales.
Sin un conocimiento y desarrollo en
ciencias básicas
no es posible realizar desarrollos en
biotecnología.
Invertir en educación científica es el
pilar de la generación de nuevos
desarrollos biotecnológicos.
HISTORIA

Robert Hooke
1664

Una de las pimeras

descripciones de una
célula eucariota.
L. Pasteur 1864 derrocó la teoría de la generación espontánea y
produjo varias vacunas
R. Koch 1868 escribió los postulados de Koch para la clasificación y
cultivo de bacterias.

Ferdinand Cohn 1872 escribió un tratado que dio origen a la

Microbiología como ciencia.

1928 Griffith encontró que bacterias no patógenas podían ser

transformadas a patógenas usando restos celulares de otras bacterias

1940’s Avery encontró que el factor transformante era el ADN, lo

cual dio inicio a la era de la Microbiología Molecular.

1953 James Watson and Francis Crick dilucidaron la estructura del

ADN
1970’s Fred Sanger hizo posible la secuenciación y Kary Mullis la
amplificación de DNA (PCR).

1980’s Tecnología del DNA recombinante y la Biotecnología moderna y

sus productos (Insulina, Francisco Bolívar).

1980 Moseley realizó el primer diagnostico molecular identificando una

cepa patógena de E. coli. (E. coli 0157:H7)

En la actualidad ni todo el avance en la biotecnología ni en la

microscopía, han hecho posible el poder crecer al 98% de los
microorganismos y las células en un medio de cultivo.

Sin embargo, estos avances sí han hecho posible cambiar una caja Petri
y un medio de cultivo, por un tubo Eppendorf y una reacción de PCR,
evitando la necesidad de cultivar al microorganismo en cuestión.
PROTEÍNA FUNCIÓN
INSULINA GLUCOSA
 APLICACIONES

AGRICULTURA
a).-Producción de plantas resistentes a plagas, enfermedades, sequías y sal
b).-Propagación en masa de clones vegetales
c).-Desarrollo de insecticidas biológicos
d).-Mejoramiento de características nutricionales

GANADERÍA
a).-Control de la fertilidad
b).-Producción de ganado genéticamente mejorado
c).-Diagnóstico de enfermedades bacterianas
 APLICACIONES

MEDICINA
a).-Producción de vacunas y hormonas en microorganismos recombinantes
b).-Diagnóstico molecular de enfermedades
c).-Terapia génica de enfermedades hereditarias

AMBIENTE
a).-Biorremediación de agua y suelos contaminados con:
-petróleo
-solventes
-desechos orgánicos
-metales
LA BIOTECNOLOGÍA COMO UN MEDIO ADECUADO Y SEGURO
PARA ALIVIAR ENFERMEDADES Y MITIGAR EL HAMBRE

Tratamiento para la Diabetes mellitus

Tratamiento para el Cáncer
Terapia Génica

Maíz transgénico resistente a plagas

Arroz con sobreproducción de Vitamina A
Plantas resistentes a sequías
 LA HUMANIDAD SIN BIOTECNOLOGÍA

Periodo de vida reducido por la falta de:

vacunas
medicamentos
alimentos suficientes
contaminación excesiva
diagnóstico oportuno de enfermedades infecciosas
 REALIDADES Y MITOS

REALIDADES
-Producción de Insulina, Hormona de Crecimiento, Interferón
-Biorremediación de agua y suelos contaminados
-Producción de plantas resistentes a enfermedades y a sequía
-Diagnóstico oportuno de enfermedades infecciosas

MITOS
-Carne, frutas y verduras tóxicos
-Leche y agua contaminada
-Vacunas y hormonas inseguras
-? ? ? ?
 NORMATIVAS Y ÉTICA
EN BIOTECNOLOGÍA

-Cada país tiene sus normas de lo que se

puede y no se puede hacer.
-Colombia tiene su normativa con respecto al maíz transgénico
-La utilización de células embrionarias para la clonación de
humanos
-La ley para el uso y producción de organismos transgénicos
-La ley para el aprovechamiento y protección de la biodiversidad

-La ética depende de cada quien: principios morales y religiosos

Ingeniería Genética
y
Biotecnología
Ingeniería genética:
modificación deliberada de la información genética de un
organismo que resulta en un cambio heredable de su
genoma

Aplicaciones:
- medicina (diagnóstico y caracterización de
enfermedades)
- agricultura (plantas transgénicas)
- industria farmaceútica (producción de proteínas con fines
terapeúticos)
- industria alimentaria (mejoramiento de cepas, aditivos
alimenticios (ej. vainillina))
- industria química (productos naturales, biopolímeros,
etanol)
Biotecnología
La producción industrial de bienes o servicios por
procesos que utilizan organismos, sistemas o procesos
biológicos

Ingeniería Biotecnología
+ Biotecnología =
Genética Molecular

Biotecnología Molecular Microbiana

 Biotecnología
La producción de insulina Molecular
humana en E. coli (1980) y su Método tradicional
aprobación para uso clínico
(1982) revolucionaron la
biotecnología

Esto fue posible por el

desarrollo de técnicas que
permitieron

-transferir información gené-

tica de un organismo a otro
-expresar esa información en
el organismo huésped
Técnicas que permitieron transferir información genética
de un organismo a otro
¿Cómo se logra introducir y perpetuar ADN foráneo en otro
organismo? Necesidad de un “vehículo” que lleve el ADN y sea
capaz de autoreplicarse.
- desarrollo de vectores
¿Cómo se logra introducir ADN foráneo en ese vector?

- el uso de enzimas de restricción permite

generar moléculas recombinantes

¿Cómo se introduce el vector portador del ADN de interés en la

célula huésped?
- desarrollo de técnicas de transformación
Las enzimas de restricción reconocen secuencias palindrómicas
específicas generando extremos complementarios que pueden ser
ligados por medio de una ligasa

EcoRI reconoce la secuencia GAATTC y corta el ADN

Dos moléculas de ADN cortadas con la misma enzima de restricción pueden ser
unidas por una ligasa generando una molécula de ADN recombinante
 Los vehículos o vectores de clonado deben ser capaces de portar
secuencias de ADN foráneo y de mantenerlo en forma estable en
la célula huésped.

Vectores de clonado:

- plásmidos (10 kb)

- bacteriófagos (20 kb)
- cósmidos (50 kb)
- YAC (200 - 800 kb)
(yeast artificial chromosome)

¿Qué precisa tener un vector para mantenerse estable en la célula huésped?

Características generales de los plásmidos como vectores de clonado:

Sitios de restricción únicos

Marcadores
genéticos pBR322
(permiten selección 4361 bp
de transformantes)

Orígen de
replicación
Tamaño pequeño
(mayor eficiencia de transformación)
Proceso de clonado:

-se corta el ADN de interés y

el vector con la misma
enzima de restricción

-se ligan los fragmentos

generándose un vector Transformación:
recombinante - CaCl2
- electroporación

-se transforman células del

organismo huésped

La presencia de marcadores
- se seleccionan las que portan genéticos, ej resistencia a
el plásmido antibióticos, permite seleccionar las
células que portan el plásmido
 Selección de transformantes que portan el plásmido

La selección se realiza en medio sólido

La selección puede basarse en alguna

característica aportada por el plásmido:
resistencia a antibióticos

características nutricionales
(marcadores auxotróficos)
ejemplo: síntesis de aminoácidos

resistencia a compuestos tóxicos

La selección permite crecer a las que portan un plásmido con el

marcador genético adecuado. El medio puede hacerse diferencial para
distinguir un plásmido recombinante del plásmido original, o puede
hacerse una segunda selección.
Los marcadores genéticos permiten la selección de transformantes:

En pBR322 la inserción de un
molécula de ADN resulta en la pérdida
de la resistencia a Ampicilina (a) o
Tetraciclina (b)

a
b

Otros vectores sólo presentan resistencia

a un antibiótico que permite su selección
y otro mecanismo para ver presencia de
inserto
Bacteriófagos: ejemplo fago lambda modificado
Características de los cósmidos
como vectores de clonado:

a) derivados del fago l, sin regiones

codificantes

b) permite el clonado de grandes

fragmentos de ADN

c) la presencia de sitios cos permite

su encapsulamiento in vitro

d) La infección (transducción) es
más eficiente que la
transformación

e) Se mantiene como plásmido en

E. coli
 Cromosomas artificiales como vectores de clonado:
Los YACs (yeast artificial chromosomes) fueron muy usados para el
clonado de ADN con fines de secuenciación

Características:

- muy estable (se replica

como un cromosoma)

- permite el clonado de
grandes moléculas de
ADN

También existen los BAC (bacterial artificial chromosome)

¿Cómo identificamos la secuencia de ADN que nos interesa
clonar?

- secuenciado – en el caso de algunos organismos la

información de interés existe pues se ha secuenciado el total o
parcialmente el genoma de dicho organismo
- genotecas – colección de vectores representativos de todo el
genoma del organismo en estudio

¿Cómo aislamos el gen o la región específica que nos interesa?

- amplificación de genes por la reacción en cadena de

la polimerasa PCR
Genoteca:

- se fragmenta randómicamente el
ADN del organismo en estudio y
se clonan los fragmentos

- representa todo el genoma de un

organismo

- las colonias obtenidas se

analizan en búsqueda del gen de
interés
 Existen varios métodos para rastrear una genoteca

a) Por hibridación con

sondas de ADN

- sonda:
oligonucleótido
específico para la
secuencia buscada
 Otros métodos de rastreo se basan en la expresión de la proteína
codificada por el gen de interés:

b) inmunodetección: utilización de un anticuerpo específico para la

proteína de interés asociado con un anticuerpo que de una
reacción
colorimétrica

c) Detección de
una
actividad
enzimática
característica
Una vez que se identifica el gen o la
secuencia de interés se lo puede
amplificar y aislar por la reacción en
cadena de la polimerasa PCR

Este método permite obtener grandes

cantidades de ADN con la secuencia
deseada

Mediante este método se pueden

introducir, en ambos extremos de la
secuencia amplificada, secuencias
específicas para enzimas de
restricción que faciliten su clonado
Hemos visto

a) como clonar fragmentos de ADN e introducirlos en una

célula huésped

b) como identificar y aislar el gen o la secuencia de interés

¿Cómo se logra la expresión de dicha información genética en la célula

huésped de forma que esta produzca la proteína de interés?

Aplicaciones de la Expresión de Proteínas

Con fines comerciales

- industriales
- terapeútica
Mejoramiento genético de cultivares: transgénicos
Terapia génica
 Para que una proteína sea expresada en un huésped dado el gen
debe ir acompañado de las secuencias específicas que permitan
su transcripción y traducción
En procariotas:
Sitio de unión Señal de
Promotor terminación
del ribosoma

En eucariotas es similar pero con los componentes que

permiten la transcripción y traducción eucariota
Estas características son aportadas en
un Vector de Expresión

Debe contener:
- un promotor
- un terminador
- un sitio de unión a
ribosoma (en procariotas)

- sitios de corte de enzimas

de restricción en posición
adecuada
- marcadores genéticos
(selección de transformantes)
- orígen de replicación
- tamaño pequeño
La expresión de genes eucariotas
requiere el procesamiento de
intrones, proceso que no se da
procariotas (E. coli)

Se debe clonar una copia del gen de

la cual se hayan removido los
intrones

Para ello se utiliza la enzima

transcriptasa reversa

ARN ADNs ADNd

El clonado y la expresión de proteínas heterólogas no está limitado a
procariotas como hospederos, también se han utilizado eucariotas (Ej.
S. cerevisiae, P. pastoris, A. niger)

La ingeniería genética también se aplica a plantas y animales

Los principios básicos son similares

La ingeniería genética no queda restringida a la expresión de

proteínas sino que también utiliza otras herramientas como:

- deleción de genes
- desregulación de rutas metabólicas
- generación de diversidad
 Otras técnicas utilizadas en Mutagénesis dirigida en casette:
ingeniería genética: deleción, interrupción o desregulación
de genes
Mutagénesis sitio dirigida:
Tendencias actuales:

a) producción heteróloga de proteínas

( industria farmaceútica: proteínas con aplicación terapeúticas,
vacunas)

b) ingeniería metabólica
(industria alimenticia: producción de vino, aditivos,
conservadores)
(industria química: producción de etanol, biopolímeros)

c) evolución dirigida de proteínas

(industria química: desarrollo de lipasas o estearasas
termoestables, desarrollo de enzimas con tolerancia a
solventes)
Algunas de las Aplicaciones en Medicina
Aplicaciones: producción comercial de vacunas, fármacos y
agentes de diagnóstico

Vacunas: Antígeno de superficie - Hepatitis B

Malaria
proteína de la envuelta de HIV-1
Fármacos: Factor de crecimiento epidérmico
Insulina
Factor de crecimiento de plaquetas
Factor de coagulación VIIIa

Agentes de
diagnóstico: Antígeno HIV-1
Hepatitis C
Producción de Indigo en E. coli recombinante que expresa una
dioxigenasa (naphtalene dioxygenase) de Pseudomonas sp.
Ingeniería Metabólica:
Alteración de rutas metabólicas existentes para:
a) favorecer la producción del b) introducción de nuevas
compuesto de interés rutas metabólicas
materia prima
Ej: Producción de
vainillina a partir de
Diverge materia
prima a glucosa en E. coli
productos
secundarios

Deleción de
genes
Producto deseado
La tecnología de evolución dirigida de proteínas se ha utilizado
con éxito en el mejoramiento de enzimas
Ej. desarrollo de estearasas termoestables
 Plantas transgénicas

Se han desarrollado muchas con

distintos fines:
- resistencia a insectos
- resistencia a herbicidas
- resistencia a salinidad
- Resistencia a sequía
- mejor calidad alimenticia
Uso de Agrobacterium tumefaciens
- clonado en plásmido Ti
- la secuencia de interés pasa a la
célula vegetal a través de un
proceso similar a la conjugación
bacteriana. Pasa el T-ADN lineal
con capacidad de integración (simil
transposón)
 El nivel de expresión depende del promotor y del número
de copia del vector de expresión

Número de copia del vector de expresión: depende del orígen de

replicación que tenga puede ir desde una copia hasta cerca de 100
(1-4: bajo número de copia; 10-100: alto número de copia)
Promotores
Constitutivos: siempre están transcribiéndose
Regulables: se mantienen “apagados” y son inducidos por algún
cambio en el medio (inductor, cambio de T)
Fuerza del promotor: determina el nivel de transcripción

La mejor producción de proteína no está necesariamente asociada a un

promotor fuerte y un vector con alto número de copia. Si el sistema es
muy pesado para la célula, esta lo pierde y la población que lo pierde
crece más rápido disminuyendo el rendimiento
Posibles sistemas de expresión
Escherichia coli
Saccharomyces cerevisiae
Picchia pastoris
Baculovirus
Cultivos celulares (líneas celulares de mamíferos)
Animales o plantas transgénicos
Criterios de selección de un sistema de expresión
Rendimiento
Facilidad de purificación
Necesidad de modificaciones post-traduccionales
Preferencias de uso de codones
Costos
Diseño experimental
La ingeniería genética también
se aplica a plantas y animales

Los principios básicos son

similares

Ej: producción de a-1AT en la

leche de cabra u oveja
La biotecnología puede ser clasificada en cinco
amplias áreas.
Biotecnología en Salud Humana.( donde
se incluye la B. Alimentaría)
Biotecnología Animal.

Biotecnología Industrial

Biotecnología Vegetal

Biotecnología Ambiental

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Desarrollo en tecnologías para el diagonóstico de
enfermedades infecciosas o de desordenes genéticos.
LINEAS DE INVESTIGACIÓN:
 Clonación de células madre: “James Thonson, Unv.
Wisconsin (1998).
Reprogramación de celúlas adultas sin necesidad de
clonar.
Esclarecimiento y manipulación del mecanismo
genético que dispara la formación de órganos y
extremidades en el embrión.

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Su aplicación es dirigida a sistemas diagnósticos,
nuevas vacunas y drogas, fertilización de embriones in
vitro, uso de hormonas de crecimiento, etc.
Áreas en las cuales esta influyendo la biotecnologia para
producción animal
 El uso de tecnologías reproductivas
Nuevas vacunas y
Nuevas bacterias y cultivos celulares que producen
hormonas.

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Biotecnología Industrial es la disciplina que hace uso de

los conocimientos científicos campos de biología

molecular, microbiología, bioquímica e ingeniería

bioquímica, para contribuir al desarrollo de la

agricultura, la medicina y las ciencias ambientales

(Hernández M 2000 www. Uprm.edu.es)

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
 BIOTECNOLOGIA VEGETAL
BENEFICIOS ENCONTRA
Alimentos con más vitaminas, Aparición de alergias
minerales y proteínas, y menor insospechadas
contenido en grasas
Cultivos más resistentes al ataque Desaparición de avifauna que no se
de virus, hongos insectos sin la adapte a las nuevas condiciones
necesidad de emplear productos de plantas mejoradas.
químicos, lo que supone un mayor
ahorro económico y menor daño al
medio ambiente

Mayor tiempo de conservación de

frutas y verduras
Cultivos tolerantes al sequía y
estrés

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
La biotecnología ambiental se refiere a la aplicación de
los procesos biológicos modernos para la protección y
restauración de la calidad del ambiente.
El uso de microorganismos en procesos ambientales se
encuentra desde el siglo XIX. Hacia finales de 1950 y
principios de 1960, cuando se descubrió la estructura y
función de los ácidos nucleicos
La biorremediación (uso de sistemas biológicos para la
reducción de la polución del aire o de los sistemas
acuáticos y terrestres)

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Directiva del Consejo 90/219/CEE, de 23 de Abril de 1990, relativa a la utilización
confinada de microorganismos modificados genéticamente.

Directiva del Consejo 90/220/CEE, de 23 de Abril de 1990, sobre la liberación

intencional en el medio ambiente de organismos modificados genéticamente.

Directiva 98/81/CE del Consejo, de 26 de Octubre de 1997 por la que se modifica

la Directiva 90/219/CEE relativa a la utilización confinada de microorganismos
modificados genéticamente.

Directiva 1999/10/CE de la Comisión de 8 de Marzo de 1999, por la que se

establecen excepciones a las disposiciones del artículo 7 de la Directiva
79/112/CEE del Consejo en lo relativo al etiquetado de los productos alimenticios.

ESPECIALIZACIÓN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Código de Nuremberg (Tribunal Internacional de Nuremberg) Publicado
en 1946 como respuesta a las atrocidades cometidas por los médicos
investigadores nazis.Declaración de Helsinki de la Asociación Médica
Mundial.
Recomendaciones para orientar a los médicos en la investigación con
seres humanos. Adoptado en 1964 y varias veces revisado. Ultima
revisión, año 2000.
Principios de Ética Médica. Detallados en el texto de la Resolución
37/194 adoptada por la Asamblea General de la Naciones Unidas en
1982.
Fin de la primera parte del Curso

Gracias