INTRODUCCIÓN A LAS TÉCNICAS

INSTRUMENTALES
Clase 1
1. INTRODUCCIÓN

MUESTRA

PROCESO ANALÍTICO
MEDIDA Y TOMA Y
OPERACIONES
TRANSDUCCIÓN DE TRATAMIENTO DE
PREVIAS
LA SEÑAL ANALÍTICA DATOS

RESULTADOS
 TÉCNICA principio científico fundamental que proporciona
información analítica sobre la composición de la materia.

aplicación de una técnica para la resolución

MÉTODO
de un problema analítico

PROCEDIMIENTO instrucciones para aplicar un método

descripción específica y detallada de la

PROTOCOLO aplicación de un método

Espectroscopía de Absorción UV-Visible

Determinación de fosfato en agua por Espectroscopia Absorción UV-visble
Procedimientos: ASTM ó AOAC
Protocolo: tomar X ml de muestra y añadir Y ml de reactivo....
 Métodos Analíticos

Métodos químicos Métodos instrumentales

por vía húmeda

Gravimetría Análisis Electroquímicos Separación Opticos

volumétrico

Precipitación Titulación Electrólisis Cromatografía Emisión

Pesada conductimetría Absorción

2. PRINCIPALES TIPOS DE TÉCNICAS ANALÍTICAS

Técnicas espectroscópicas
Espectrofotometría ultravioleta-visible
Espectrofotometría de fluorescencia y fosforescencia
Espectrometría atómica (emisión y absorción)
Espectrofotometría de infrarrojo
Espectroscopía Raman
Espectroscopía de rayos X
Técnicas radioquímicas
Espectroscopía de resonancia magnética nuclear
Espectroscopía de resonancia de spin electrónico

Técnicas electroquímicas
Potenciometría
Voltamperometría
Técnicas voltamperométricas
Técnicas de redisolución
Técnicas amperométricas
Coulombimetría
Electrogravimetría
Conductimetría

Técnicas cromatográficas
Cromatografía de gases
Cromatografía líquida de alta resolución
Técnicas diversas
Análisis térmico
Espectrometría de masas
Técnicas cinéticas
Técnicas acopladas
CG-MS
ICP-MS
CG-IR
3. COMPONENTES DE UN INSTRUMENTO

convierte una señal analítica que no puede es

Función del
detectable ni comprensible por un ser humano
instrumento
en una forma que sí lo es.
Generadores de Señales
Indica la presencia del analito

• La aplicación de una señal externa a la muestra, con modificación

subsecuente de la misma por el analito (espectroscopía de absorción)
• la creación de un ambiente sobre la muestra, que permite al analito
producir una señal (las mediciones potenciométricas)

Transductor de entrada (detector)

Convierte un tipo de señal en otro

Cantidad física medida Transductor de entrada Salida

eléctrica

Concentración de especies Celda polarográfica Corriente

electroactivas
Actividad iónica en solución Electrodo selectivo de iones Voltaje
Intensidad luminosa Fototubo Corriente
Fotodiodo Corriente
Temperatura Termistor Resistencia
Termopar Voltaje
Procesador de señales

Modifica la señal transducida para que se adecue al

dispositivo de lectura
Amplificación Conversión digital-analógica

Conversión analógico-digital Filtrado

Atenuación Integración

Conteo Rectificación

Conversión corriente-voltaje Conversión voltaje-corriente

Transductor de salida (lectura)

Convierte la señal procesada en una señal entendible
por el observador
Impresoras alfanuméricas Registradores (y-t)
Medidores digitales osciloscopios
Disco duro Pantalla catódica, monitor de
video
Disco flexible Cassete de cinta
 4. SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

• ¿Qué exactitud y precisión se precisa?

• ¿ De cuánta muestra se dispone?
• ¿ Cuál es el intervalo de concentración del analito?
• ¿ Qué componentes de la muestra interferirán?
• ¿ Cuáles son las propiedades físicas y químicas de la
matriz de la muestra?
• ¿ Cuántas muestras deben analizarse?
 CRITERIOS NUMÉRICOS PARA SELECCIONAR MÉTODOS ANALÍTICOS

Criterio Parámetro de calidad

1. Precisión Desviación estándar absoluta,
coeficiente de variación,
varianza
2. Exactitud Error absoluto sistemático, error
relativo sistemático
3. Sensibilidad Sensibilidad de calibración,
sensibilidad analítica
4. Límite de detección Blanco más tres veces la
desviación estándar del blanco
5. Intervalo
Concentración
de entrConcentración entre límite de
concentración cuantificación (LOQ) y Límite de
linealidad (LOL)
TABLA 6 6. Selectividad Coeficiente de selectividad
OTRAS CARACTERÍSTICAS A TENER EN CUENTA EN LA ELECCIÓN DEL MÉTODO

1. Velocidad
2. Facilidad y comodidad
3. Habilidad del operador
4. Coste y disponibilidad
del equipo
5. Coste por muestra
PRECISIÓN

 Se define como el grado de concordancia mutua entre los datos

que se han obtenido de una misma forma

 La precisión mide el error aleatorio, o indeterminado, de un

análisis

 Los parámetros de calidad de la precisión son la desviación

estándar absoluta, la desviación estándar relativa, la desviación
estándar relativa de la media, el coeficiente de variación y la
varianza

EXACTITUD

 La exactitud mide el error sistemático, o determinado, de un

método analítico (valor medido y el valor verdadero aceptado)
Análisis de un material de referencia, comparación usando otro
método que se sabe es exacto, estudios de recuperación
SENSIBILIDAD

La sensibilidad de un instrumento o de un método

mide su capacidad de discriminar entre pequeñas
diferencias en la concentración del analito

•sensibilidad de calibración:
pendiente (m) de la curva de calibración a la
concentración de interés.
S = mc + Sbl
• sensibilidad analítica :

 = m / ss ss desviación estándar de las señales

LÍMITE DE DETECCIÓN (LD)

• Concentración o el peso
mínimo de analito que pueden
detectarse para un nivel de
confianza dado

Señal correspondiente al LD
Sm = Sbl + 3 sbl

Concentración correspondiente al LD

S = mc + Sbl Sm = mcm + Sbl

Sbl señal media del blanco,
cuando n = 20 - 30

sbl desviación estándar

Sm - Sbl 3 sbl del blanco
Cm = Cm =
m m
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN

• Concentración o el peso
mínimo de analito que se utiliza
en la práctica que se emplea
para cuantificar

Señal correspondiente al LOQ

Sm = Sbl + 10 sbl

Concentración correspondiente al LOQ

S = mc + Sbl Sm = mcm + Sbl

Sbl señal media del blanco,
cuando n = 20 - 30

sbl desviación estándar

Sm - Sbl 10s bl del blanco
Cm = Cm =
m m
LÍMITE DE RESPUESTA LINEAL

• Concentración o el peso
mínimo de analito a partir de la
cual deja de existir una relación
lineal entre señal y
concentración

INTERVALO ÚTIL

• Intervalo de calibración que se

emplea en la práctica, comprendido
entre LOQ y LOL
SELECTIVIDAD (K)

La selectividad de un método analítico denota el

grado de ausencia de interferencias debidas a otras
especies contenidas en la matriz de la muestra

KB,A = mB/mA; KC,A = mC/mA

K =0 no hay interferencia

K <0 el interferente causa una reducción de la señal del analito

K >0 el interferente causa un aumento de la señal del analito

S = mA cA + mB cB + mC cC + Sbl

S = mA(cA + KB,A cB + KC,A cC) +Sbl

4. SEÑALES Y RUIDO

SEÑAL Información acerca del analito

MEDIDAD
ANALÍTICA
RUIDO Información indeseable

• El valor promedio de la señal de ruido N es constante e

independiente de la magnitud de la señal total S.
• La relación señal-ruido (S/N) es un parámetro de calidad mucho
mejor que el ruido solo.

x
S/ N=
s
RUIDO QUÍMICO

• Variaciones no controladas del equilibrio químico: cambios de

temperatura, presión, intensidad luminosa

RUIDO INSTRUMENTAL

• Ruido térmico (Johnson)

– Agitación o movimiento de partículas cargadas
• Ruido de disparo
– Movimientos de partículas cargadas a través de una unión
• Ruido de parpadeo
– Depende de la frecuencia (1/f)
• Ruido ambiental
– Depende del entorno
 5. MÉTODOS DE CALIBRADO

En muchos tipos de análisis químico se mide la respuesta del

procedimiento analítico a cantidades conocidas de analito, y
basándose en ellas se puede interpretar la respuesta de una muestra
de contenido desconocido

5.1 MÉTODO PATRÓN EXTERNO

•Comparación de las señales de la muestra con un conjunto de señales que

ofrecen individualmente "muestras de calibración", (disoluciones patrón)
Estándares de diferente concentración del analito que han sido preparados artificialmente
para que su matriz sea semejante a la de la muestra real.
•No deben usarse estándares puros, puede conducir a errores sistemáticos
importantes.
•Se someten al proceso analítico las muestras de calibración y la muestra
problema de forma independiente.
•El conjunto de las señales de calibrado permite establecer una relación
inequívoca entre la señal y la concentración de analito, que comúnmente se
denomina "recta de calibrado" y que idealmente es una relación lineal señal-
concentración en el intervalo dado de concentraciones.
•La concentración de analito en la muestra se consigue por interpolación

REGRESIÓN LINEAL SENCILLA O DE REGRESIÓN POR MÍNIMOS CUADRADOS

•Proporciona una relación lineal entre la cantidad de analito (x) y la magnitud

de la variable medida (y) que incluye a la mayoría de los puntos
•Los errores en los valores de y son mayores que los errores en los valores de x
•Las desviaciones estándar en los valores de y son similares
La mejor línea recta será la que se obtiene por minimización de las
desviaciones verticales entre los puntos y la línea (la distancia entre los puntos
experimentales y la recta sean mínimas para todos y cada uno de los puntos)

• Desviación vertical (residual) = di • Pueden ser + o -, por ello usamos di2

di = yi – y = yi – (m xi + b) di2 = (yi – y)2 = (yi – m xi - b)2
 Y
Y

xiyi

C C
Ecuación de la recta: y = m x + b

m = pendiente = y
∑xy – (∑x ∑y)/N
m= x
b = ordenada en el origen cuando x = 0
∑x2 –(∑x)2 /N

b=y–mx
Si la relación entre señal y concentración no es lineal, puede resultar
complejo encontrar la función de calibración correspondiente. Es más
practico reducir el margen de aplicación del procedimiento analítico al
rango de concentraciones en el que existe linealidad.
Coeficiente de correlación
• Se emplea como una medida de la correlación entre dos variables
• Indica si la minimización que se ha llevado a cabo es correcta.
Ello indicará que existe el mismo nº de puntos por arriba y por debajo de la recta y
r = 1,000 o muy próximo a dicho valor

Curva de calibración Siempre debe graficarse

5.2 ADICIONES PATRÓN (ADICIÓN ESTÁNDAR)

•El método de la adición estándar es aconsejable cuando se quiere asegurar

la correcta similitud entre el comportamiento de patrones y el problemas.

•En las muestras complejas o con matrices difícilmente reproducibles en los

patrones (alimentos, muestras biológicas o medio ambientales) es
aconsejable el uso de la adición estándar.
Son métodos para estandarizar y analizar dentro de la propia matriz de la
muestra (calibración metodológica "in situ").

PROCEDIMIENTO

-Consiste en preparar los patrones con la misma muestra a analizar y añadir

una cantidad conocida de la especie química a determinar.

-A n alícuotas de disoluciones de calibración con concentraciones crecientes

se la añaden la misma cantidad de muestra.
Todas las disoluciones contienen una concentración de analito que es la suma
de la original de la muestra (se busca) y la añadida

-Se someten las n alícuotas de muestras reales enriquecidas al proceso

analítico, obteniéndose una señal para cada alícuota.
-Se representan las señales en función de la concentración del estándar
añadido. Se obtendrá una recta de calibrado paralela a la que se obtendría con
los estándares sin adición de muestra

-La señal sobre el eje de ordenadas es la que origina la muestra no enriquecida.

-La concentración de analito en al muestra se obtiene por extrapolación de la

recta de calibrado, su cruce con la prolongación del eje de abscisas proporciona
el dato buscado.

Y Siendo C= Cx + Cs

Concentración del patrón adicionado

Concentración del problema

Yx = Señal debida al problema

Cs Y
Ys = Señal debida al patrón
Cx
5.3 MÉTODO DEL ESTÁNDAR INTERNO

OBJETIVO: -minimizar fluctuaciones instrumentales

-establecer referencias con fines cualitativos y cuantitativos.

•Se utiliza un estándar o patrón interno (I) diferente al empleado en la

calibración convencional. El patrón interno es una cantidad conocida de un
compuesto o elemento, no presente en la matriz de la muestra, que se
adiciona tanto a los estándares como a la muestra problema

PROCEDIMIENTO

Supongamos una muestra que contiene el analito X que queremos

determinar, el procedimiento consiste en preparar:

1.- Mezclas conocidas del patrón interno (I) y de los patrones del analito/os a
determinar (X) para construir una curva patrón.

2.- Cuando una cantidad conocida de patrón se agrega a una muestra

problema, la curva de calibrado puede utilizarse para hallar la concentración
del problema.
3.-Las fluctuaciones en la señal afectan por igual al analito y al patrón pero
no a la relación.

Señal debida X
Señal debida I Y I

Concentración X
Concentración I

Características del patrón interno

-compatibilidad (p.e. solubilidad) con la muestra y el patrón
-características químicas y fisico-químicas similares al analito
-respuesta discriminada respecto del analito