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✓ Objetivos
✓ Metodología
✓ Resultados
✓ Muestra de cálculos
✓ Análisis de resultados
✓ Conclusiones
✓ Bibliografía
Objetivos
Generales
● Conocer el manejo de un cromatógrafo de HPLC
● Evaluar la influencia de los parámetros cromatográficos sobre la separación y la
cuantificación de una mezcla de acetaminofén-cafeína
Específicos
● Aplicar el método del estándar externo para cuantificar la mezcla acetaminofén y
cafeína mediante HPLC
● Evaluar la influencia de la separación de la mezcla acetaminofén-cafeína empleando
una elución isocrática
Metodología
Inyectar en el
cromatógrafo
Pesar X mg Tomar 2
Pesar y y Filtrar por mL del
Llevar a
pulverizar dos disolverlos membran filtrado y
MUESTRA PROBLEMA balón de 25
tabletas de con la a de 0,45 llevar a 10
mL y aforar
dolex forte solución de µm mL con
solventes fase móvil
Metodología
Equipo empleado Agilent Infinity ®
Inyector Loop
Detector 275 nm y 245 nm
Columna 2,1 mm x 10 cm Fase estacionaria L7 de 3,5 µm
Temperatura 45 ± 1°C
Flujo 0,5 mL/min
Volumen de inyección de las soluciones 5 µL
Volumen Inyeccion Solucion Problema 5 µL
Agua, metanol, ácido acético glacial
Elución Isocrática
(79,2:19,8:1).
Tipo de cromatografía Fase reversa
Separación Reparto
Alícuota Concentración
estándar Volumen acetaminofén/
Solución
acetaminofén/ final (mL) cafeína
cafeína (mL) (mg/mL/mg/mL)
Tabla# 2. Composición
1 0,5/0,25 10 0,025/0,0025 soluciones para la
2 1,0/0,5 10 0,05/0,005 curva de calibración
3 2,0/1,0 10 0,1/0,01
4 3,0/1,5 10 0,15/0,015
5 4,0/2,0 10 0,2/0,02
Resultados
Figura # 1:
cromatograma
para el primer
punto de la
curva de
calibración
Resultados
Figura # 2:
cromatogram
a para el
segundo
punto de la
curva de
calibración
Resultados
Figura # 3:
cromatograma
para el tercer
punto de la curva
de calibración
Resultados
Figura # 4:
cromatograma
para el cuarto
punto de la
curva de
calibración
Resultados
Figura # 5:
cromatograma
para el quinto
punto de la
curva de
calibración
Resultados
Figura # 6:
cromatogram
a para la
muestra
problema de
Dolex Forte
Resultados
Puntos en la curva Concentración Concentración Altura del pico Altura del pico área del pico área del pico
de calibración acetaminofén cafeína acetaminofén Cafeína acetaminofén cafeína
cafeína
275 0,0139 99,24 65 152,68 Tabla # 6:
Resultados de la
245 0,0137 97,96 65 150,70 concentracion de
% en cafeina y
Concentración obtenida mg
mg obtenidos acetaminofen para
ABC mg/mL esperados muestra
la muestra
acetaminofe 275 0,0729 521,62 500 104,32 problema a 275 y
n 245 nm
245 0,0731 523.13 500 104,62
cafeína
275 0,0139 99,90 65 153,69
245 0,0134 95,57 65 147,04
Resultados
Punto en la curva Tiempo de Tiempo Altura del Ancho Tiempo Factor de Número Altura de platos Resolución
de calibración retención muerto pico de base de capacidad de platos teóricos
(min) (min) (mAU) (min) retención teóricos (mm)
corregido
(min)
Promedio 0,855 0,645 1053,66 0,0608 0,211 0,3271 3171,57 0,0316 9,4353
Desviación 0,0075 0,0004 579,27 0,00073 0,0015 0,0024 71,70 0,00072 0,0775
estándar
Promedio 1,465 0,645 14,9747 0,0687 0,821 1,272 7288,19 0,0137 9,4353
Desviación 0,00075 0,0004 6,7429 0,0010 0,00103 0,0022 217,69 0,00041 0,07756
estándar 2
Sistema de idoneidad :
Tanto para las dos longitudes de onda como para ambos analitos se obtuvo valores de factor de capacidad
dentro del rango establecido por la USP (1-15), por lo que puede inferirse que la retención de los
componentes en la fase estacionaria es la indicada, además gracias a que se encontró una resolución que
presenta valores mayores a 2 puede deducirse que la eficiencia de la columna es del 100%, obteniendo
como resultado una buena separación de los componentes de la muestra, lo que indica que se empleó una
temperatura adecuada, así mismo se observa que el número de platos visto como el número de equilibrios
teóricos del soluto en la FE y la FM, es mayor a 2000 siendo una buena cifra de acuerdo con el mínimo
ideal, lo que indica que no solo se tenía una fase estacionaria adecuada sino también, una buena
velocidad de flujo. Los valores obtenidos para el factor de capacidad k’ (todos mayores a 1) se encuentran
dentro del rango descrito por la USP, además, aun sin ser tan altos, el resto de parámetros no se ven
afectados, por lo que no se considera necesario aumentar este por medio de temperatura u otro método.
Análisis de resultados
Cafeína
Acetaminofen
Al ser cromatografía en fase reversa obtenemos un tiempo de retención mayor para la
molécula menos polar (cafeína), razón por la cual el primer pico es atribuido al
acetaminofén, quien interactúa menos con la fase estacionaria y es arrastrado más
fácilmente por la fase móvil (polar); además se realizó una evaluación a 275 y 245 nm,
para el acetaminofén obtenemos un valor adecuado a 245, por lo que presenta una
meseta en la cual puede darse linealidad de la Ley de Lambert Beer: