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Nichos de células madre

hematopoyéticas adultas
MR1 Jota Walter Orellana Cuellar
Objetivo del Review.-

Se enfoca en la localización, composición


celular y regulación de las HSC adultas,
particularmente en la médula ósea.

Ser de utilidad para clínicos interesados en


trasplante de médula ósea.
Definición.-

Son microambientes tisulares locales que mantienen a las


células madre y regulan sus funciones produciendo
factores que actúan directamente sobre ellas.
Localización de las HSC en la médula
ósea adulta

 El problema fundamental para identificar las HSC por


citometría de flujo fue el requerimiento de varios anticuerpos
y fluorócromos, ergo, protocolos complejos para detectar
HSC.

 El descubrimiento de la familia de marcadores de moléculas


de activación de la señalización de linfocitos (SLAM) hizo
posible purificar HSC (como células CD150+CD48+CD41-).
Localización de las HSC en la médula
ósea adulta

El análisis de la localización de estas células en las


secciones tisulares mostraron que la mayoría de las HSC
residen adyacentes a los vasos sanguíneos sinusoidales
(nichos perivasculares) en la médula ósea y bazo.

Otros estudios que utilizaron marcadores de HSC


alternativos confirmaron que la mayoría de las HSC se
localizan de esta manera.
Localización de las HSC en la médula
ósea adulta

Nuevos marcadores genéticos, incluyendo Ctnnal1 (que


codifica α-catulina) y Hoxb5 (que codifica homeobox
b5) han simplificado la identificación de los HSC y
refinado nuestro entendimiento de su localización.

Así, se estudian ratones modificados genéticamente


(Knock-in): Ctnnal1-GFP(+KIT+) y Hoxb5-mCherry knock-in
mice.
Localización de las HSC en la médula
ósea adulta

 Reconstrucción 3D de médula ósea con microscopía


confocal y Ctnnal1-GFP / KIT: 80% de los HSC perisinusoidal,
10% periarteriolar y 10% adyacente a zonas de transición, sólo
un pequeño porcentaje está localizado en el periostio.

 Hoxb5-mCherry knock-in mice y otros diferentes marcadores


muestran que las HSC residen perivascularmente,
principalmente alrededor de los sinusoides.
ósea y sus relaciones con las HSCs
La vascularización en la médula

a. Fémur de rata biseccionado.


c. Distinción de los vasos
sanguíneos en la MO.
d. Esquema de vascularización de
la MO.
ósea y sus relaciones con las HSCs
La vascularización en la médula

Distribución de las HSC α-catulina+ (KIT+), de amarillo. Los sinusoide se


muestran de morado, las arteriolas de verde y el endostio de azul.
Ablación celular para identificar células del
nicho

 Poblaciones específicas de células (de ratones) expresan


mediante bioingeniería timidina kinasa del HVH, o receptor
de toxina diftérica; luego, son extirpados mediante
administración de ganciclovir o toxina diftérica.

 Estos estudios extirpan varias poblaciones de células


estromales de la MO, incluyendo osteoblastos, células CAR,
LEPR+, Nes-CreER, Ng2-CrER, megacariocitos, macrófagos.
Ablación celular para identificar células del
nicho

En cada caso, las HSC entraron a ciclo celular y/o se


depletan después de la ablación de la población
indicada.

Sin embargo, para nuestro conocimiento, ningún tipo


celular ha sido alguna vez extirpado de la MO sin inducir
la activación o depleción de las HSC.
Ablación celular para identificar células del
nicho

No está claro si estas observaciones reflejan efectos


directos de las células extirpadas sobre las HSC.

Tal vez la ablación de cualquier tipo celular en la MO


induce una respuesta de injuria que activa o depleta las
HSC en una manera independiente del nicho.
Ablación celular para identificar células del
nicho

 En cuanto a la ablación de osteoblastos, ésta induce


agudamente la depleción de progenitores linfoides
tempranos. Un promotor de colágeno es usado para
conducir la expresión de timidina kinasa, tal que con el
tratamiento con ganciclovir se depletan los osteoblastos.

 Ello sugiere que aquellos progenitores dependen de estos


para su mantenimiento, no así las HSC, que no sufren cambios
en semanas, sólo cuando la MO se vuelve pancitopénica.
Ablación celular para identificar células del
nicho

Puede haber una interferencia generalizada en la MO


por el cual muchas células regulan indirectamente otras
células.

Esto es más pronunciado cuando las células vasculares


son extirpadas, de acuerdo a la disrupción del flujo
sanguíneo en la MO.
Factores de crecimiento para el
mantenimiento de las HSC

Un enfoque alternativo para identificar las células del


nicho es identificar las células que sintetizan los factores
que promueven el mantenimiento de HSC.

Unos pocos factores son conocidos por ser no-celular-


autonómicamente requeridas para el mantenimiento de
las HSC, incluyendo el SCF, CXC-quimiocina ligando 12
(CXCL12) y trombopoyetina.
Factores de crecimiento para el
mantenimiento de las HSC

SCF.- se une al receptor KIT, que es expresado por las


HSC. Es importante para el mantenimiento de los mismos.

CXCL12.- promueve el mantenimiento y retención en la


MO de las HSC mediante la activación de la señalización
a través del CXC-quimiocina receptor 4 (CXCL12-CXCR4).
Ésta también regula el injerto y proliferación de las HSC
luego de ser trasplantadas.
Factores de crecimiento para el
mantenimiento de las HSC

Trombopoyetina.- activa la señalización por la proteína


mieloproliferativa de leucemia (MPL) en las HSC. Es
requerida para el mantenimiento, así como para la
producción de megacariocitos.

Otros factores.- factores de crecimiento luego de una


injuria como la angiogenina, proteína 3 angiopoyetina-
like, FGF1-2, IL-6, Notch 2 y pleiotrofina.
Factores de crecimiento para el
mantenimiento de las HSC

 Factores de rango largo (tabla 3). Muchas veces como


respuesta fisiológica a cambios.
 Características metabólicas y físicas de los nichos: hipoxia
(microambientes perisinusoidales son los que tienen menor
tensión de oxígeno en la MO), las HSC son más sensibles a
la depleción de valina que otros aa.
 Podrán ser estas características la explicación de por qué
no se puede cultivar ex vivo las HSC.
Identificando las células que hacen factores de nichos

CXCL12: expresado por las células estromales


perivasculares (células CAR) y células endoteliales que
están asociados con sinusoides. Menos expresado en
osteoblastos.

SCF: las mismas células CAR, pero menos expresado en


células endoteliales.
Identificando las células que hacen factores de nichos

 90-95% de las células que expresan altos niveles de Scf-GFP p


Cxcl12-DsRed son células LEPR+ (overlap completo con células
CAR, o parecen ser las mismas).

 Células Nes-GFP+, Nes-CreER+, Ng2-CreER+, Nes-GFPlowLEPR+, Nes-


GFPhiNes-CreER+…
La expresión de factores de Células Madre en la médula ósea
Deleción condicional de los factores de nichos

 Las células del nicho pueden ser funcionalmente identificados por


deleción condicional factores conocidos de poblaciones celulares
candidatas y luego evaluar los efectos del mantenimiento de las
HSC.

 Deleción condicional de Scf (y también Cxcl12): El nicho de HSC


en la MO depende del SCF que es producido por células
endoteliales y células LEPR+ estromales, no así de las células Nes-
Cre+, Nes-CreER+, Ng2-CreER+, megacariocitos u osteoblastos.
Un esquema de un nicho de
HSC en la médula ósea
Sinusoides arteriolares vs sinusoidales

 El 10% de las HSC está más cercanamente asociado con arteriolas


más que con sinusoides.
 Ambos microambientes difieren en la tensión de oxígeno,
permeabilidad vascular (fenestras) y en la capacidad de las
células hematopoyéticas de migrar a través de la pared vascular.
 Es propuesto que las HSC asociadas con arteriolas son más
quiescentes que aquellas asociadas con sinusoides.
 Células CD150+CD48- negativos periarteriolar, y un 36% +
perisinusoidal.
Células madre esqueléticas y los nichos HSC

 Las células madres esqueléticas (SSC) forman colonias de


fibroblastos en cultivos (CFU-Fs) y puede diferenciarse en varias
linajes (osteoblastos, adipocitos y condrocitos).

 Las SSC pueden regular la formación de los nichos de HSC durante


el desarrollo, y están entre las células que secretan factores de
nicho en la MO adulta.
Regulación de nichos por otras células

 Megacariocitos
 Células nerviosas
 Monocitos y macrófagos.
Cambios en la vascularización
de la médula ósea según edad
El nicho extramedular

 Principalmente en el bazo y el hígado, pero puede ocurrir en casi cualquier tejido.


Enfermedades en las que el trasplante de
HSC es potencialmente curativo

Falla de médula ósea: Anemia de Fanconi.


Cánceres hematopoyéticas: Leucemia mieloide aguda.
Desórdenes hematopoyéticos benignos: Anemia de
células falciformes, inmunodeficiencia combinada
severa.
Conclusiones

 Los avances de imagenología y las herramientas genéticas han incrementado


rápidamente nuestro entendimiento de los nichos de HSC en los últimos 5 años, aunque
aún hay varias preguntas para ser respondidas.
 Las HSC que están y no en división son mantenidos en nichos perivasculares.
 Ellos están principalmente asociados con vasos sanguíneos sinusoidales en la médula
ósea adulta y bazo, pero un subconjunto de HSC están más estrechamente asociado
con arteriolas.
 Los microambientes perisinusoidales y perivasculares difieren en términos de la
capacidad de los HSC de intravasar en la circulación y en términos de su exposición a los
componente plasmáticos de la sangre.
Conclusiones

 Las células endoteliales y células estromales perivasculares LEPR+/CAR son la fuente principal
de factores (tal como CXCL12 y SCF) que son conocidos por ser requeridos para el
mantenimiento de HSC en médula ósea roja adulta normal.
 Sin embargo, muchos otros tipos celulares de la médula ósea – megacariocitos, monocitos y
macrófagos, neuronas (específicamente fibras nerviosas) y células de Schwann – directamente
o no regulan la función de HSC o del nicho a través de otros mecanismos.
 La composición estromal y vascular de la médula ósea cambia durante el envejecimiento.
 La hematopoyesis extramedular en el bazo depende de un nicho perivascular que es
asociado con sinusoides en la pulpa roja, en el cual las células endoteliales y células
estromales TCF21+ son la principal fuente de CXCL12 y SCF.
 Este nicho es necesariamente para la recuperación de hematopoyesis siguiente al estrés,
como pérdida de sangre.