Estudo de Caso - Ditiocarbamatos em Mam o - Ros Ngela Abakerli - Embrapa

DITIOCARBAMATO EM MAMÃO
Simpósio Brasileiro sobre Resíduos de

Agrotóxicos em Alimentos
Agência Nacional de Vigilância Sanitária

Abril 2006
Conselho Nacional de Desenvolvimento

Científico e Tecnológico
PARCERIAS
CENTRO PLURIDISCIPLINAR DE PESQUISAS BIOLÓGICAS QUÍMICAS E
AGRÍCOLAS (CPQBA) – UNICAMP
EMBRAPA MANDIOCA E FRUTICULTURA
EMBRAPA MEIO AMBIENTE
EMPRESA BAIANA DE DESENVOLVIMENTO AGRÍCOLA (EBDA)
INSTITUTO ADOLFO LUTZ
INSTITUTO CAPIXABA DE PESQUISA E EXTENSÃO RURAL (INCAPER)
UNIVERSIDADE DE BRASÍLIA
LABORATORIO THONSOM DEPARTAMENTO DE QUÍMICA – UNICAMP
MINISTÉRIO DA AGRICULTURA, PECUÁRIA E ABASTECMENTO (MAPA)

25%da produção mundial
1.5 milhões de ton./ano (FAO, 2002)
Nordeste e Sudeste são as principais regiões
da produção nacional
Espírito Santo - 420.500 ton/ano
Bahia – 860.000 ton/ano
Rechaço de frutos no mercado internacional
Diferenças nos Limites Máximos de Resíduos (MRLs )

Brasil 3,0 mg kg-1
Estados Unidos 10,0 mg kg-1
União Européia 0,05 mg kg-1

A produção de mamão requer o uso constante de fungicidas e
mancozebe é o mais importante

ANÁLISE DE RESÍDUOS DE
DITIOCARBAMATOS
Faz uso de métodos indiretos baseados na quantifcação de

CS2 gerado numa hidrólise ácida
NH2
H + 2 CS 2
ácido
S
N NH2
C _
S
_ M ++
C S
N S
S básico
H
H N N H + CS 2

ANÁLISE DE RESÍDUOS DE
DITIOCARBAMATOS
Problema é a formação fitogênica de CS2 na

cultura analisada
Algumas espécies podem alcançar os LMR

SISTEMA GLICOSINOLATO/MIROSINASE NAS
PLANTAS
Glicosinolatos são compostos derivados de uma oxima contendo enxofre
Nas plantas são acompanhados por uma enzima hidrolítica, mirosinase.
Acredita-se que detêm herbívoros e patógenos.
Característicos de todas as Brassicaceae: mas ocorrem em outras famílias

(Akaniaceae, Bataceae, Brassicaceae, Bretschneideraceae, Capparaceae, Caricaceae, Gyrostemonaceae,
Koeberliniaceae, Limnanthaceae, Moringaceae, Pentadiplandraceae, Resedaceae, Salvadoraceae,
Tovariaceae, and Tropaeolaceae).
Fonte: Rodman, J.E. et al. American Journal of Botany 85 (7) : 997–1006. 1998.

FORMAÇÃO DE NITRILA E ISOTIOCIANATO A PARTIR DE
GLICOSINOLATOS
_
OSO3
Danos aos tecidos da planta ativam a enzima

S N
glicose C
H 2O
R
mirosinase que hidrolisa o glicosinolato
Mirosinase
D-glicose
_ SH
S
R
_
+ H+ R
_ Um intermediário instável perde sulfato e
N OSO3 N OSO3
sofre rearranjo não enzimático para ITC, TC
ou Nitrila
pH 7 baixo pH
_2 _
SO4 HSO4
S
R C N + S Nitrila é favorecida a baixo pH e em meio
NITRILA
R neutro é favorecida a formação de
:N:
isotiocianato
Rearranjo de Lossen
Esses produtos de degradação dos glucosinolatos funcionam como

R N C S aleloquímicos na proteção das plantas.
ISOTIOCIANATO

DECOMPOSIÇÃO DE ISOTIOCIANATOS
+
H2O/H +
R NH 3 + COS
R N C S +
H2S/H
R +
NH 3 + CS2
COS + H2O H 2S + CO2
Pecháček, R. et al. J. Agric. Food Chem. 45, 4584-4588, 1997

AREAS DE EXPERIMENTAÇÃO EM CAMPO

EXPERIMENTOS DE CAMPO
Mudas obtidas a partir de sementes sem qualquer
tratamento com agroquímicos sulfurados

Aspecto da cultura , Junho 2003, Teixeira de Freitas
Sunrise Solo e Golden

Cultivar Golden, Janeiro 2003, Barreiras, BA

Áreas de reflorestamento e pastagem vizinhas a
parcela do mamão, Linhares, ES
• A • B
• C • D

ANÁLISE
Três métodos analíticos foram utilizados:
espectrofotométrico, headspace, partição
isooctano
Unidades de frutos inteiros

Cortados e homogeneizados
Fração dos frutos

polpa, casca e sementes

CONCENTRAÇÃO MÉDIA DE CS2 EM AMOSTRAS DE
MAMÃO CONTROLE (mg kg-1)
Cultivar Local Isooctano Headspace Espectro
fotométrico
Barreiras 0,03+0,03 - 0,50+0,66
Linhares 0,03+0,02 0,21+0,25 0,79+0,31
Golden Cruz das 0,21+0,15 - -
Almas
Teixeira 0,02+0,02 0,06+0,03 -
de Freitas
Barreiras 0,01+0,02 - 0,24+0,25
Tainung
Cruz das 0,02+0,01 - -

Almas
Sunrise solo
Teixeira 0,02±0,01 0,03+0,02 -
de Freitas
n = 3 a 18

PROBABILIDADE DE SE OBSERVAR CONCENTRAÇÕES
DE CS2 ACIMA DE 0.05 mg kg-1
Assumindo uma distribuição normal, essas
probabilidades seriam:
35 % para o método do isooctano
61 % para o método de headspace
88 % para o método espectrofotométrico
Pela distribuição da probabilidade empírica acumulada

seriam:
12 % para o método do isooctano,
55 % para o método de headspace
94 % para o método espectrofotométrico

% %
Figure 1 - Isooctane method Figure 2 - Headspace method
100 100
90 90
80 80
70 70
60 accum_norm 60 accum_norm
50 accum_freq 50 accum_freq
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
0,00 0,15 0,30 0,45 0,60 0,75 0,90 1,05 1,20 1,35 1,50 0,00 0,15 0,30 0,45 0,60 0,75 0,90 1,05 1,20 1,35 1,50
-1 -1
CS2 (mg kg ) CS2 (mg kg )
12 % método isooctano 55 % método headspace

%
Figure 3 - Spectrophotometric method
100
90
80 De 16 amostras analisadas
70
60 accum_norm somente uma <0.05 mg kg-1

50 accum_freq
40
30
20
10
0
0,00 0,15 0,30 0,45 0,60 0,75 0,90 1,05 1,20 1,35 1,50
-1
CS 2 (mg kg )
94 % método espectrofotométrico
CROMATOGRAMAS DE EXTRATOS EM ISOOCTANO DE
SEMENTES (A) E CASCA (B) DE MAMÃO MONITORANDO O ION
Overlaid Chromatogram Plots Overlaid Chromatogram Plots
Sample: am_02a DE MASSA 76

File: c:\... \regina\consultorias\am_02a 06-11-03 16;49;30 1.sms
Scan Range: 1 - 997 Time Range: 0.00 - 15.98 min.

Operator: JLPJ
Date: 06/11/03 16:49
File: c:\... \regina\consultorias\am_01b 07-11-03 09;03;29 1.sms
Sample: am_01b
Scan Range: 1 - 995 Time Range: 0.00 - 15.97 min.
Operator: JLPJ
Date: 07/11/03 09:03
kCounts RIC all am_02a 06-11-03 16;49;30 1.sms kCounts RIC all am_01b 07-11-03 09;03;29 1.sms
40
30
30
20
20
10
10
0 0
kCounts Ion: 76 all am_02a 06-11-03 16;49;30 1.sms Counts Ion: 76 all am_01b 07-11-03 09;03;29 1.sms
CS2
2.5 CS2
750
2.0
1.5
500
A B
1.0
250
0.5
0.0 0
2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0
minutes minutes
Segment 1 Seg 2 Segment 3 4 Segment 5 Segment 1 Seg 2 Segment 3 4 Segment 5
Scans 157 314 472 626 780 935 Scans 156 311 467 621 775 933

COMPOSTOS SULFURADOS IDENTIFICADOS NAS
FRAÇÕES DE MAMÃO CONTROLE DA CULTIVAR
GOLDEN
Compostos Tempo de retenção* (min)
Sementes 1 Sementes 2 Casca 1 Casca 2
sulfeto de carbonila 1.27 1.26 - 1.26
dimetil sulfeto 3.15 3.12-3.16 3.06 3.06-3.13
dissulfeto de carbono 3.60 3.57 3.51 3.57
2-metiltiofeno 9.33-9.34 9.33 - 9.27
3-metiltiofeno 9.35-9.37 9.35 - -
2-etiltiofeno 11.72 - - 11.83
3-etiltiofeno 11.85 11.88 11.69-11.85 11.78-11.81
benzonitrila** 15.35 15.39 15.45 15.34
benzilisotiocianato 19.99 19.87 20.93 -
benziltiocianato 27.87 27.87 27.94 27.83

RESÍDUOS DE DITIOCARBAMATO EM MAMÃO
EXPRESSOS EM CS2 (mg kg-1), APÓS APLICAÇÕES
DE MANZATE®
Cultivar 0 DAT 3 DAT 7 DAT 14 DAT
Homog. picado homog. picado homog. picado homog. picado
2.3+0.8 1.7+0.5 2.2+1.3 1.4+0.6 1.9+0.7 1.0+0.4 1.4+0.4 1.1+0.4

4.7+1.1 3.7+1.3 2.0+0.9 1.7+1.2 3.8+1.3 3.4+3.4 2.0+0.4 4.4+5.5
Golden
2.7+0.8 1.8+0.5 1.3+0.3 1.0+0.6 0.8+0.3 0.6+0.1 0.5+0.2 0.5+0.1
3.5+0.9 4.6+1.3 3.0+0.5 3.6+1.5 2.4+0.8 2.8+1.4 1.7+0.8 2.0+1.1
Tainung 1.0+0.6 0.9+0.7 1.8+0,1 0.9+0.4 1.5+0.3 1.6+1.5 1.0+0,2 2.3+3.3
Sunrise 5.1+2.0 4.9+1.0 2.8+1.1 3.5+1.1 2.8+0.6 2.9+0.6 1.6+0.6 1.3+0.5

DISCRIMINAÇÃO ENTRE CS2 ENDÓGENO E RESÍDUOS
VERDADEIROS DE DITIOCARBAMATO
Estabelecida uma função de classificação que melhor
discriminasse entre as amostras que receberam e que não
receberam tratamento com o fungicida.
A função de classificação foi obtida pelo uso conjunto das

distribuições da probabilidade empírica acumulada das
amostras tratadas e não tratadas com ditiocarbamato.
A qualidade dessa função de classificação foi avaliada

através de uma matriz de erro e com a estatística
(“KHAT”).

Mamão tratado com ditiocarbamato

buscar um valor de corte, acima do qual estaria a maioria dos resultados
Mamão controle
buscar um valor de corte, acima do qual estaria a minoria dos resultados
Para encontrar o melhor valor de corte, ambas as

restrições devem ser atendidas simultaneamente.

Do nosso conjunto de dados o valor da concentração de

CS2 que atende essas restrições está entre 0.34 e 0.39 mg
kg-1 de CS2.
Nós adotamos o valor central de 0.365 mg kg-1
^
k = 0,98873

EFEITO DO TRATAMENTO COM AGROQUÍMICOS SULFURADOS NA
CONCENTRAÇÃO DE CS2 - MAMÃO GOLDEN E SUNRISE SOLO
CS2 levels in papaya cultivar Golden CS2 levels in papaya cultivar Sunrise solo
0,8
A 0 ,8
B
-1
-1
0,7 0 ,7
CS2 concentration mg kg
CS2 concentration mg kg
0,6 0 ,6
0,5 0 ,5
0,4 0 ,4
0 ,3
0,3
0 ,2
0,2
0 ,1
0,1
0
0
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
Days after treatm ent Days after treatm ent
sulf ocal treatment soil fertilization control sulfocal treatment soil fertilization control

Inclusão de dados do tratamento do mamão com

sulfocal
^
k = 0.8944
O valor de corte é razoavelmente adequado, porém

haverá um numero de falso positivo

CONCLUSÃO
Carica papaya L.
• gera CS2 a partir de compostos endógenos
• considerado o método de partição em

isooctano, para valores <0.36 mg kg-1 as
concentrações de CS2 podem ser confundidas
como sendo resíduos de ditiocarbamatos.


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Algumas espécies podem alcançar os LMR

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Acredita-se que detêm herbívoros e patógenos.

Característicos de todas as Brassicaceae: mas ocorrem em outras famílias

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Danos aos tecidos da planta ativam a enzima

Esses produtos de degradação dos glucosinolatos funcionam como

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COS + H2O H 2S + CO2

Pecháček, R. et al. J. Agric. Food Chem. 45, 4584-4588, 1997

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Unidades de frutos inteiros

Fração dos frutos

Conselho Nacional de Desenvolvimento

Cruz das 0,02+0,01 - -

Conselho Nacional de Desenvolvimento

Pela distribuição da probabilidade empírica acumulada

Conselho Nacional de Desenvolvimento

12 % método isooctano 55 % método headspace

60 accum_norm somente uma <0.05 mg kg-1

Sample: am_02a DE MASSA 76

Scan Range: 1 - 997 Time Range: 0.00 - 15.98 min.

Conselho Nacional de Desenvolvimento

3-etiltiofeno 11.85 11.88 11.69-11.85 11.78-11.81

benzonitrila** 15.35 15.39 15.45 15.34

benzilisotiocianato 19.99 19.87 20.93 -

benziltiocianato 27.87 27.87 27.94 27.83

Conselho Nacional de Desenvolvimento

2.3+0.8 1.7+0.5 2.2+1.3 1.4+0.6 1.9+0.7 1.0+0.4 1.4+0.4 1.1+0.4

Tainung 1.0+0.6 0.9+0.7 1.8+0,1 0.9+0.4 1.5+0.3 1.6+1.5 1.0+0,2 2.3+3.3

Sunrise 5.1+2.0 4.9+1.0 2.8+1.1 3.5+1.1 2.8+0.6 2.9+0.6 1.6+0.6 1.3+0.5

Conselho Nacional de Desenvolvimento

A função de classificação foi obtida pelo uso conjunto das

A qualidade dessa função de classificação foi avaliada

Conselho Nacional de Desenvolvimento

Mamão tratado com ditiocarbamato