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Clasificacin basada en: determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas. Los sustratos se incorporan al medio de cultivo, con un indicador, presencia de productos metablicos. Las enterobacterias exhiben las siguientes caractersticas: Metabolizan la glucosa mediante fermentacin Carecen de actividad de citrocomo oxidasa Reducen los nitratos a nitritos

Citocromo: hemoproteina que contiene hierro.

Se encuentra en los organismos aerobios o anaerobios facultativos

y y

Utiliza ciertos reactivos colorantes La tcnica indirecta: se lleva a cabo en discos impregnados con reactivos secos, en la parte que se halla el reactivo se extiende una asada de la colonia sospechosa. Las bacterias citocroso oxidasa desarrollan en segundos un intenso color azul en el sitio de inoculacin

Las pruebas bioqumicas consisten en distintos test qumicos aplicados a medios biolgicos, los cuales, conocida su reaccin, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.

TSI LIA CIT F.A MIO MALONATO UREA

Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa para la identificacin de enterobacterias en base a la fermentacin de glucosa y lactosa y a la produccin de acido sulfhdrico y CO2.

La lactosa , sacarosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. Que acidifican el medio y vira a color amarillo. El tiosulfato de sodio, para la produccin de acido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el acido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH

Pico alcalino/fondo acido K/A (pico rojo / fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. Pico acido/fondo acido A/A (pico amarillo / fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa. Pico alcalino/fondo alcalino K/K (pico rojo / fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azucares. La presencia de burbujas, o ruptura de medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. CO2 El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce acido sulfhdrico.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismo, especialmente Salmonella spp basado en la descarboxilacion/ desaminacion de la lisina y en la produccin de acido sulfhdrico. Este medio pone de manifiesto: - Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina.

La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas descarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de acido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menos a 5.2 y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por descarboxilacion de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.

DESCARBOXILACION DE LA LISINA Prueba positiva: Pico de flauta violeta / fondo violeta K/K Prueba negativa: Pico de flauta violeta / fondo amarillo K/A

DESAMINACION DE LA LISINA Pico rojizo / fondo amarillo. R/A Esto sucede con cepas del genero Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella spp.

PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio ( especialmente en limite de l pico y fondo)

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias. Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno.

El azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los m.o. capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El desdoblamiento del citrato produce piruvato que al ser utilizado como fuente de carbono produce carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permesa.

POSI IVO: crecimiento y color azul en le pico de flauta, alcalinidad. NEGATIVO: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Determina la capacidad e la bacteria para desaminar el aminocido fenilalanina en cido fenilpirvico por accin de la enzima Fenilalanina desaminasa, esto va a producir una acidificacin del medio.

La acidificacin del medio se va a poner de manifiesto mediante la aplicacin de 0,2 - 0,3 mL de Cloruro frrico al 10 %, si hay en el medio c. fenilpirvico aparece una coloracin verde-azulada. Resultado (+) color verde plido e intenso en el pico de flauta y en el liquido de condensacin. Resultado (-) sin cambio de color permanece amarillo debido al color del reactivo del FeCl3

Su objetivo es determinar la capacidad de un m.o. de utilizar el malonato de sodio Como unica fuente de carbono con la resultante alcalinidad.

Medio usado para la identificacin de enterobacterias en base a su movilidad, actividad de ornitina descarboxilasa y produccin de indol.

Adems, la tripteina aporta grandes cantidades de triptfano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. La dextroza es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina descarboxilasa El purpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color purpura y en medio acido es amarillo. Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina descarboxilasa e indol.

Pone de manifiesto la presencia de la enzima Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta presente degradar el triptfano y liberar al medio Indol, para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se formar un anillo rojo en la superficie, sino este ser amarillo. Para esto sembramos en caldo con triptfano.

La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin.

Se realiza una siembra en picadura, y tras incubar 24 h. observamos si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

La reaccin positiva a la ornitina esta dada por un color purpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin acida y originando que el indicador del pH purpura de bromocresol vire al amarillo Por descarboxilacion, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color purpura.

MOVILIDAD Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.

ORNITINA DESCARBOXILASA: Resultado positivo: color purpura Resultado negativo: color amarillo.
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A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio

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PRUEBA DEL INDOL La prueba del indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina

Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro amarillento.

Medio utilizado para la identificacin de m.o. en base a la actividad ureasica. Es particularmente til para diferenciar Proteus spp. De otros miembros de la familia Enterobacteriaceae. Pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en dos molculas de amoniaco.

y y

Presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad buffer. Las sales de fosfato constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa. Estos metabolitos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol del naranja a rosa. Su uso se recomienda para diferenciar Proteus spp. De otros gneros.

NEGATIVO: Se torna amarillo o naranja cuando es negativo POSITIVO: Rosa cuando es positivo.