CHAPITRE 5 LA CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE

Plan du chapitre
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Gnralits Les diffrents lments du systme chromatographique Grandeurs thoriques de la GC La colonne capillaire Lappareillage chromatographique Analyse qualitative Analyse quantitative La drivatisation

1. Gnralits
Technique analytique permettant la sparation, lidentification et la quantification des constituants dun mlange. En chromatographie en phase gazeuse (GC): Vaporisation et injection de lchantillon au sommet de la colonne Elution assure par un flux de gaz inerte = phase mobile Pas dinteraction entre les molcules danalyte et la phase mobile, seule fonction de la phase mobile : transporter lanalyte dans la colonne.

Mcanismes de base de la sparation

Chromato gaz/liquide mcanisme de partage

o base sur le partage de lanalyte entre une phase gazeuse mobile et une phase stationnaire liquide immobilise sur la surface dun support inerte o largement employe dans de nombreux domaines

Chromato gaz/solide

mcanisme dadsorption

phase stationnaire solide sur laquelle la rtention des analytes rsulte dune adsorption physique applications limites cause de la trop forte rtention des molcules polaires et de la prsence de tranes importantes dans les pics dlution technique limite la sparation de quelques espces gazeuses de faible masse molaire telles que les constituants de lair :
 monoxyde de carbone  oxydes dazote

2. Les diffrents lments du systme chromatographique

3. Les grandeurs thoriques de la GC

Principe de la sparation Migration diffrentes vitesses des constituants dans un systme sparateur constitu dune phase stationnaire (liquide ou solide) et dune phase mobile (gaz)

Le principe de sparation

Le solut se partage entre les deux phases suivant la valeur du coefficient de partage K K dcrit lquilibre thermodynamique du solut (en terme de concentration) entre la phase stationnaire (PS) et la phase mobile (PM).

CS K! CM
K est fonction de la nature de la phase stationnaire de la temprature de la colonne de la quantit de solut

La rtention en chromatographie : pourquoi ? Prsence dinteractions entre le compos et la PS Principaux paramtres :

Nature du solut Nature de la PS Temprature de la colonne Quantit de PS Vitesse linaire de la PM Longueur de la colonne

Paramtres de rtention La rtention dtermine le temps de passage du solut dans le systme Diffrents paramtres de rtention :
Temps de rtention brut (tR) : temps de rtention moyen pris au sommet du pic Temps mort (t0 ou tM) : temps de rtention dun solut nayant aucune interaction avec la phase stationnaire Temps de rtention rduit (tR) : temps total dquilibre statique lors des changes avec la PS

tR = tR t0

Le facteur de rtention ou facteur de capacit k

Dtermine le temps de sjour du solut dans la PS par rapport au temps de sjour du solut dans la PM k dcrit lquilibre dynamique du solut entre PS et PM k est fonction :  de la nature du solut  de la nature de la PS  de la temprature de la colonne  du volume de phase stationnaire  du volume gazeux de la colonne

(tR  t 0 ) tR' ! k = paramtre de base : k ! t0 t0

Note : le facteur de capacit est parfois appel k

Paramtres de rtention

Relation entre les paramtres de rtention et le coefficient de partage

temps de sjour du solut dans la PS k! temps de sjour du solut dans la PM moles de solut dans la PS k! moles de solut dans la PM t R ' CS VS VS k! ! !K t 0 CM VM VM
VS = volume de PS VM = volume de PM

VR = volume de rtention = volume de PM ncessaire pour luer un solut de la colonne

VR ! t R . u v

(uv ! dbit de PM)

t R  t 0 VR  VM ! k! t0 VM

VS t R ! t 0  k t 0 ! t 0   k ! t 0 1  K 1 VM
En multipliant lquation par uv,

VS t R .u v ! t 0 .u v 1  K ] VM VM
VR ! VM  KVS

La slectivit ou le facteur de sparation E E = k2 / k1

dcrit la position relative de chacun des analytes entre eux est la capacit du systme chromatographique distinguer chimiquement des analytes diffrents E est toujours 1 (si E = 1, les analytes co-luent) E est fonction : de la nature de la PS de la temprature de la colonne des soluts dsigns

Le facteur de sparation E

k 2 tR2  t 0 K 2 ! E! ! k 1 t R1  t 0 K 1

Lefficacit chromatographique
caractrise par le nombre de plateaux thoriques ce nombre caractrise la dispersion de lensemble des molcules du solut autour de son temps de rtention brut

N = 16 (tR / [)2 = 5.55 (tR / [1/2)2 H=L/N

H = hauteur dun plateau thorique L = longueur colonne

Paramtres de lefficacit :
 gomtrie de la colonne (diamtre interne ou diamtre des particules, longueur et quantit de phase)  contributions extra-colonnes (injecteur, dtecteur, connexions et oprateur)  temprature  nature de lanalyte

La thorie des plateaux : Sur chaque plateau thorique :  lquilibre est instantan (rpartition en fractions)  le coefficient de partage est appliqu La dtection des fractions est reprsente par un pic sur le chromatogramme

Analogie colonne chromatographique / colonne de distillation

La rsolution Rs
La rsolution dtermine le degr de sparation de 2 soluts conscutifs. La valeur seuil usuelle est de 1.5

2 (t R2  t R1 ) 1.1 (t R2  t R1 ) Rs ! ! 1 2 1/2 1  1/2 2

Equation fondamentale de la rsolution Elle dcrit les paramtres affectant la sparation:

Rsolution rduite par perte defficacit (N) ou de slectivit (E). Elle est aussi directement lie au facteur de rtention ou de capacit (k)

Utilit de lquation de VAN DEEMTER

Le modle dynamique de lquation de Van Deemter dcrit la dispersion du solut en fonction de la vitesse linaire moyenne de la phase mobile

H = A + B/u + Cu

A = paramtre de remplissage inexistant en colonne capillaire efficacit de ce type de colonne B = paramtre de diffusion longitudinale en PM C = paramtre de rsistance au transfert de masse

Il existe un dbit optimal pour chaque colonne dont dpend une efficacit optimale
Equation de Golay : quation comparable rserve aux colonnes capillaires (CL et CG = paramtres de rsistance au transfert de masse en phase stationnaire et phase mobile respectivement)

H = B/u + CLu + CGu

4. La colonne capillaire
4.1. Gnralits Les diffrents types de colonne GC
Colonne remplie interne 2 mm (4mm) Colonne mgabore 0.53 mm (0.8 mm) Colonne capillaire 0.1 mm (0.35 mm) 0.15 mm (0.35 mm) 0.4 mm (0.35 mm) 0.32 mm (0.5 mm) Longueur Matriaux 2 15 m Inox Pyrex 10 100 m Silice fondue Inox 10 60 m Silice fondue Inox

( externe)

Principaux avantages des colonnes capillaires VS colonnes remplies :

H minimale des plateaux plus faible Vitesse linaire moyenne optimale plus importante Plage dutilisation plus importante

La colonne capillaire comporte lintrieur : - soit une phase stationnaire liquide greffe chimiquement sur la paroi interne du tube (mcanisme de partage) -soit un adsorbant solide dpos ou greff sur la paroi interne du tube (mcanisme dadsorption)

Diamtres internes conventionnels :

0.15 mm 0.25 mm 0.32 mm 0.53 mm

Epaisseur de phase stationnaire:

Phase liquide paisseur comprise entre 0.12 m et 5 m Phase solide paisseur comprise entre 5 m et 50 m

Le tube capillaire
Matriau du tube Silice fondue Acier inoxydable Qualits ncessaires du tube Pas deffet catalytique Pas de site dadsorption tat de surface plat Solidit et souplesse

Principales caractristiques de la colonne capillaire : Trs grande efficacit pouvoir de sparation important Vitesse danalyse plus leve

Efficacit dautant plus importante que :

 diamtre interne faible  paisseur de PS la plus faible possible  longueur de colonne leve

MAIS limitation par la perte de charge maximale ne pas dpasser (Pcolonne < 5 bars) ET perte de charge si - diamtre interne - longueur colonne

CONSEQUENCE : colonne dautant plus longue que le diamtre interne est important

Vitesse danalyse dautant plus grande que

- le rapport de phase F est important

volume de gaz vecteur dans la colonne ! volume de phase stationnai re dans la colonne Les rapports de phase pour une colonne capillaire sont 2 20 fois suprieurs ceux dune colonne remplie vitesse danalyse plus importante malgr une trs grande longueur de colonne
- le diamtre interne est faible

La vitesse du gaz est inversement proportionnelle au diamtre interne

4.2. La phase stationnaire

Il sagit dun solide ou dun liquide non volatil dans une certaine plage thermique. La phase stationnaire participe la rtention du solut la slectivit lefficacit de la colonne

Diffrents types de phases stationnaires :

PS liquide  WCOT = wall coated open tubular  Film liquide greff ou imprgn sur la paroi interne du tube PS solide  PLOT = porous layer open tubular  Couche poreuse dpose ou greffe sur la paroi interne du tube

Critres de slection de la phase stationnaire

 tre stable dans la plage thermique dutilisation  Permettre une bonne diffusion des composs gazeux  Pas de raction chimique avec les analytes  tre slective vis--vis du mlange vis-

La polarit de la phase stationnaire

 Caractrise par lensemble des interactions mises en

jeu entre les molcules du solut et de la phase stationnaire  Plus les interactions sont importantes, plus la rtention est importante

Les polarits relatives

Composs trs polaires
 Acides et bases  Halognures dacides  Di- et tri-amines Di- tri-

Composs moyennement polaires

 Nitriles  Esters  Aldhydes - Ctones

Composs peu polaires

 Ethers  Halognes  Aromatiques

Composs apolaires
 Alcanes  Alcnes

4.3. Choix et optimisation de la phase stationnaire Objectifs de loptimisation

Capacit dchantillon

Temps danalyse

Rsolution

Optimisation des paramtres de sparation :

La rtention : rgle des semblables : mme composition chimique que les soluts La slectivit : choix dune PS exploitant les diffrences physico-chimiques entre les soluts du mlange

Slection de lpaisseur de phase stationnaire

paisseur variable suivant le type de phase Choix de la quantit de phase  Suivant la volatilit des composs  Suivant la rtention dsire  Suivant la capacit dchantillon ncessaire Lefficacit de la colonne est limite par laugmentation de lpaisseur de phase (Hmin ) Le temps danalyse augmente proportionnellement avec lpaisseur de phase

5. Lappareillage chromatographique

5.1. Le gaz vecteur

Puret : qualit minimale chromatographique (99,995%) Principales impurets : Oxygne Eau Composs organiques

Purification des gaz chromatographiques

Gaz vecteur
Filtre humidit Filtre oxygne

Gaz dalimentation des dtecteurs

Filtre charbon actif

Temprature et viscosit du gaz

 La viscosit du gaz augmente avec la

temprature  Ce phnomne limite le pouvoir de sparation des colonnes capillaires en rgulation de pression

Relation pression-dbit 2 faons de rguler le gaz vecteur :

 Rgulation de dbit : dbit constant la pression augmente avec laugmentation de la viscosit et donc avec la temprature  Rgulation de pression : pression constante le dbit diminue avec laugmentation de la viscosit et donc avec la temprature
 Consquence : augmentation des temps danalyse avec une colonne capillaire  Diminution de lefficacit de la colonne capillaire

5.2. Les injecteurs

introduction de lchantillon dans le chromatographe mise en phase gazeuse des chantillons non gazeux dans les conditions ambiantes avant leur introduction dans la colonne

Volume dinjection variable suivant : le diamtre interne de la colonne linjecteur employ

Comment injecter? Echantillons gazeux Vanne gaz Seringue gaz + injecteur classique Technique Head Space Echantillons liquides Seringue liquide + injecteur classique Vanne liquide Echantillons solides Solubilisation puis injection liquide Technique Head Space

Efficacit de la colonne exige que : lchantillon occupe le volume adquat Introduction trop lente dchantillons volumineux : largissement des pics diminution de la rsolution Mthode la plus courante : utilisation dune microseringue injection de lchantillon liquide ou gazeux travers un septum dans une chambre dinjection situe en tte de la colonne La qualit des sparations dpend de cette phase de lanalyse.

septum = membrane dinjection base de silicone

Diffrents types selon les conditions danalyse :  Temprature de linjecteur  Utilisation dun injecteur automatique  Sensibilit de la dtection En cas de dgradation du septum :  Mauvaise reproductibilit  Diminution de la sensibilit  Augmentation des temps de rtention  Dformation des pics

a) Les injecteurs vaporisation directe

Tube mtallique doubl dun chemisage en verre (insert), balay par le gaz vecteur et chauff la t dbullition moyenne des composs chromatographier. Laiguille de la microseringue traverse lextrmit de linjecteur obture par le septum. Lautre extrmit est raccorde la colonne galement chauffe. La totalit de lchantillon introduit dans le flux de gaz vecteur, immdiatement vaporis, part dans la colonne en quelques secondes. pour les colonnes remplies et les colonnes capillaires Wide Bore si dbit de gaz vecteur 8 ml/min.

Schma dun injecteur vaporisation directe

b) Les injecteurs split/splitless

Pour les colonnes capillaires, faible capacit dchantillon, les plus petits volumes quil est possible de prlever avec une microseringue (0,1 l) peuvent parfois saturer la colonne. On utilise alors des injecteurs pouvant fonctionner suivant deux modes, avec ou sans division (encore appels split/splitless).

Schma gnral dun injecteur split/splitless

Principe de fonctionnement de linjecteur : Introduction trs rapide de lchantillon Vaporisation et mixage avec le gaz vecteur Division du gaz entre dbit de colonne et dbit de fuite Une fraction de lchantillon pntre dans la colonne La grande majorit de lchantillon est vacue Caractristiques principales :
Temprature injecteur leve Volume dinjection limit au l

Schma et fonctionnement dun injecteur en mode split

Rapport de division (split ratio) :

dbit colonne dbit colonne  dbit de fuite

Fonction : du volume dinjection du volume de la colonne de la concentration de lchantillon
interne (mm) Limite infrieure Limite suprieure 0.15 1 : 100 0.25 1 : 50 0.32 1 : 20 1 : 100 0.53 1:5 1 : 20

1 : 1000 1 : 200

Dbit de fuite : 20-800 ml/min

Avantages :  Adapt une trs large gamme de concentrations  Utilisation de toutes les colonnes capillaires Inconvnients :
 Inadapt aux chantillons trs dilus  Inadapt aux composs thermolabiles  Inadapt aux composs faiblement volatils  Injecteur vaporisant le plus discriminant : la discrimination affecte  les composs les plus volatils si le volume dinjection est trop important  les composs les moins volatils qui ont des difficults se vaporiser en totalit

Discrimination de lchantillon

Les analytes de faible volatilit (pt b ) se recondensent en partie sur laiguille de la seringue dinjection (relativement froide) ne pntrent pas dans linjecteur

Les analytes plus volatils pntrent prfrentiellement dans la colonne

Schma et fonctionnement dun injecteur en mode splittless

Injection du contenu de la seringue en laissant la vanne de fuite ferme durant 0,5 1,5 minute les composs vaporiss avec le solvant se concentrent dans les tous premiers dcimtres de la colonne.

Principe de fonctionnement de linjecteur :

 Introduction lente de lchantillon  Vaporisation et mixage avec le gaz vecteur  Transfert de lchantillon gazeux et pigeage en tte de colonne  Dmarrage obligatoire dune programmation de temprature colonne

Caractristiques principales :
 Volume dinjection limit 3 5 l

Avantages :  Adapt aux chantillons trs dilus  Plus ou moins adapt aux composs thermolabiles Inconvnients :
 Inadapt aux chantillons trs sales  Discrimination de lchantillon (rduite en version programmable)

Louverture de la vanne de split : Permet la division aprs un certain temps de splitless (30 90 sec) purge du solvant et de lchantillon rsiduel encore prsents dans linjecteur Supprime les tranes du solvant et des soluts

c) Les injecteurs temprature programmable

Ces injecteurs encore appels PTV (Programmed Temperature Vaporizer), sont de conception analogue linjecteur split/splitless. Cependant, la t de la chambre dinjection peut tre programme, de 20 plus de 300C, en quelques dizaines de secondes. Permet lanalyse de composs thermolabiles Permet lanalyse de mlanges de composs points dbullition trs diffrents

Ce type dinjecteur conjugue les avantages de linjection en mode split ou splitless ceux de linjection froid dans la colonne. Avantages : -absence de discrimination -utilisation de seringues classiques -limination du solvant ou des composs de bas point dbullition -plus grand volume dinjection

Principaux modes dinjection de linjecteur PTV : injection froid en mode split injection froid en mode splitless injection avec limination du solvant

Injection froid en mode split Introduction de lchantillon dans la chambre de vaporisation froide Ouverture immdiate de la vanne de fuite Chauffage de linjecteur Comme lchantillon nest pas directement vaporis, le solvant et les diffrents composs pntrent dans la colonne dans lordre de leur point dbullition. De ce fait, il ny a aucun moment surcharge de la colonne.

Injection froid en mode splitless Utilise pour lanalyse de traces Fermeture de la vanne de fuite pendant linjection Chauffage de la chambre dinjection transfert de lchantillon dans la colonne maintenue froide

Injection avec limination de solvant Introduction de lchantillon dans linjecteur froid Ouverture de la vanne de fuite (dbit de fuite lev , jusqu 1000 ml/min pour liminer tout le solvant) Chauffage de linjecteur et fermeture de la vanne de fuite transfert des composs lourds dans la colonne Il est possible dinjecter jusqu 50 l en une seule injection. Cette technique permet dliminer ltape de concentration prliminaire ventuelle avant linjection.

Schma de linjecteur PTV

d) Linjecteur On Column
Ce procd (COC, Cold On Column) consiste injecter lchantillon directement lintrieur de la colonne capillaire ( on column ), sa vaporisation se faisant aprs dpt. Ce procd utile pour les composs fragiles est rput ne pas provoquer de discrimination entre les composs dont les volatilits sont diffrentes.

Principes de fonctionnement : Pntration de laiguille jusque dans la colonne se situant dans le four Dpt de lchantillon sous forme liquide Dmarrage obligatoire dune programmation de temprature de la colonne Caractristiques principales : Volume dinjection limit 5 l Adapt aux chantillons trs dilus Adapt aux composs thermolabiles Inadapt aux chantillons trs sales

Schma dun injecteur On Column classique

e) La technique HeadSpace

Lusage de cette technique est de plus en plus rpandu pour linjection de substances trs volatiles. Elle consiste chauffer vers 60 80C les solutions conditionnes dans des petits flacons scells (1 3 ml) et prlever laide dune aiguille la vapeur surnageante. La technique HeadSpace (HS) est intressante pour lanalyse de composs prsents dans une matrice non volatile.

La quantit de compos dans la vapeur surnageante est en relation avec sa concentration dans la matrice. Lutilisation de ce mode dinjection implique que ltalonnage soit ralis dans des conditions identiques cest--dire avec un milieu de mme nature pas toujours possible avec les matrices biologiques

5.3. Les dtecteurs

Principe de fonctionnement dun dtecteur en GC : Le dtecteur gnre un signal en fonction des variations de la composition du gaz vecteur sortant de la colonne

Caractristiques du dtecteur idal : 1. Une sensibilit approprie (de 10-8 10-15 g danalyte) 2. Une bonne stabilit et bonne reproductibilit 3. Une rponse linaire sur plusieurs puissances de 10 4. Un domaine de t de fonctionnement compris entre la t ambiante et ~400C 5. Un temps de rponse rapide 6. Une grande fiabilit et facilit demploi 7. Une rponse uniforme tous les analytes ou, au contraire, slective limite une ou plusieurs classes danalytes 8. La prservation de lintgrit de lchantillon

Dtecteurs sensibles au dbit massique rpondent la quantit danalyte dans leffluent de la colonne tout instant indpendamment du volume de gaz vecteur. La hauteur du pic peut varier avec le volume de gaz vecteur mais la surface du pic reste constante. FID, NPD, FPD Dtecteurs sensibles la concentration rpondent la concentration de lanalyte dans leffluent de la colonne. La surface du pic peut varier avec le dbit de gaz vecteur mais la hauteur du pic reste constante. TCD, ECD

Domaine de linarit de quelques dtecteurs communs

a) Dtecteur ionisation de flamme (FID)

Largement utilis, le dtecteur FID est semi-universel. Dans un brleur, leffluent de la colonne est mlang avec de lhydrogne et de lair, et ce mlange est enflamm lectriquement. La plupart des composs organiques sont pyrolyss la t dune flamme air/H2 en produisant des ions et des lectrons capables de conduire llectricit travers la flamme. A cet effet, on applique une diffrence de potentiel de quelques centaines de V entre lorifice du brleur et une lectrode collectrice dispose au sommet de la flamme.

Le courant rsultant (~10-12 A) est mesur et amplifi par un lectromtre. Le nombre dions produits est approximativement proportionnel celui des atomes de carbone mthylniques prsents dans la flamme. Le dtecteur FID rpond au nombre datomes de carbone forms par unit de temps. Les groupements fonctionnels carbonyle, alcool, halogne et amine produisent moins dions dans la flamme, voire aucun. Par ailleurs, le dtecteur est insensible aux gaz incombustibles tels que H2O, CO2, SO2 et NOx.

Le dtecteur FID est ainsi un dtecteur dutilisation gnrale pour lanalyse de la plupart des chantillons organiques, y compris ceux qui sont contamins par de leau et des oxydes dazote et de soufre. Avantages du FID : -sensibilit leve -domaine de rponse linaire tendu (~107) -minimum de bruit -robuste et demploi ais Inconvnient du FID : destruction de lchantillon

Schma du dtecteur FID

Fonctionnement du dtecteur FID

Exemples danalyses GC-FID

b) Dtecteur conductivit thermique (TCD)

Appel aussi catharomtre, il fut lun des premiers dtecteurs employs. Toujours largement utilis, il est bas sur la mesure des variations de conductivit thermique des mlanges gazeux en fonction de leur composition.

Ce dtecteur est un bloc de mtal chauff constitu de deux cavits contenant chacune un filament de mtal haut coefficient de rsistance thermique (Tungstne ou Rhnium). Ces deux filaments sont chauffs et connects aux bras dun pont de Wheatstone. Le gaz vecteur pur traverse la cellule de rfrence alors que leffluent de la colonne traverse la cellule analytique. Tant que le flux gazeux est identique sur les deux filaments, la conductivit thermique est gale et les deux filaments perdent leur chaleur la mme vitesse. Le pont de Wheatstone est quilibr et le signal vaut 0.

Si un analyte lue dans le gaz vecteur, la conductivit thermique dans la cellule analytique change, les vitesses de perte de chaleur des deux filaments sont diffrentes et un courant doit tre appliqu pour rquilibrer le pont de Wheatstone. Ce courant est enregistr et correspond au signal. Lamplitude de ce courant est proportionnelle la concentration de lanalyte dans leffluent.

Schma du dtecteur TCD

Les conductivits thermiques de lhydrogne et de lhlium sont de 6 10 fois plus leves que celles de la plupart des composs organiques. Ds lors, la prsence de molcules organiques, mme en petite quantit, entrane une diminution relativement importante de la conductivit thermique de leffluent ; il en rsulte une lvation substantielle de la t du dtecteur. Les conductivits de la plupart des autres gaz vecteurs sont trs proches de celles des constituants organiques; cest pourquoi lutilisation dun dtecteur TCD impose que le gaz vecteur soit de lhydrogne ou de lhlium.

Avantages du dtecteur TCD : -Simplicit -Large domaine de linarit (~105) -Rponse gnrale tant aux composs organiques quinorganiques -Non destructif Inconvnient du dtecteur TCD : -Sensibilit relativement faible (~10-8 g analyte/ml gaz vecteur)

c) Dtecteur capture dlectrons (ECD)

Dtecteur slectif trs sensible aux drivs halocarbons, largement utilis dans lanalyse environnementale (analyse des pesticides chlors)

Principe: Le dtecteur ECD mesure la conductivit lectrique de leffluent gazeux aprs exposition des radiations ionisantes. La source radioactive est le nickel 63 qui met des particules Flectrons de basse nergie . Elles ionisent les molcules du gaz vecteur (souvent de lazote) en produisant des lectrons de haute nergie. Ceux-ci, en absence de molcules organiques, entretiennent un courant constant entre les deux lectrodes. En prsence de molcules organiques lectroactives, ce courant diminue de manire importante suite la capture dlectrons La rponse nest pas linaire sauf lorsque la tension du dtecteur est pulse.

Rponse du dtecteur ECD slective : trs sensible aux molcules contenant des groupements fonctionnels lectrongatifs (halognes, peroxydes, quinones et groupements nitrs). insensible aux groupements alcools, amines et aux hydrocarbures. Caractristiques : naltre pas significativement lchantillon contrairement au dtecteur FID. linarit de la rponse approximative.

Schma du dtecteur ECD

Applications (GC-ECD)

d) Dtecteur thermoionique (NPD)

Spcifique aux composs azots et/ou phosphors Limit de dtection P : 5 x 10-14 g/sec N : 10-13 g/sec Linarit P : 104 N : 105 Applications : pesticides, mdicaments

Principe: Design semblable au FID Combustion dans un plasma air/H2 des composs organiques Formation prfrentielle dans lenvironnement dune bille de sel alcalin (rubidium) dions cyano et phosphors (la bille est chauffe par un courant lectrique) La densit lectronique augmente crant une lvation de lintensit du courant Amplification du courant

Paramtres oprationnels : Temprature du plasma

Rglage des dbits de gaz (air et H2) Dbit H2 influence la slectivit du dtecteur

Temprature de la bille alcaline

Influence la sensibilit du dtecteur

Si on le compare au dtecteur FID, le dtecteur NPD est environ 500 fois plus sensible pour les composs contenant du phosphore et 50 fois plus pour ceux contenant de lazote.

Schma du dtecteur NPD

Applications (GC-NPD)

e) Dtecteur photomtrie de flamme (FPD)

Spcifique aux composs soufrs et/ou phosphors Limit de dtection P : 10-12 g/sec S : 10-10 g/sec Linarit P : 105 S : 103 Applications : ptrochimie, environnement

Principe: Combustion des composs organiques dans une flamme air/H2 Excitation des composs soufrs et/ou phosphors qui produisent des espces mettant de la lumire : sous forme S2 394nm et sous forme HPO 526 nm Un filtre monochromatique ne laisse passer quune seule longueur donde Un photomultiplicateur mesure la quantit de lumire et gnre un signal

Schma du dtecteur FPD

f) Dtecteur photoionisation (PID)

Leffluent est irradi par un intense rayonnement ultraviolet dont lnergie qui varie de 8,3 11,7 eV (P = 149 106 nm) provoque lionisation des molcules. Les ions rsultants sont attirs par une lectrode, mesurs et un signal est gnr. Dtecteur assez slectif, non destructif.

Schma du dtecteur PID

g) Couplage GC/MS
Le dbit de sortie des colonnes capillaires est en gnral suffisamment faible pour alimenter directement la chambre dionisation du spectromtre de masse. Les spectromtres de masse utiliss sont, pour la plupart, des spectromtres quadriple ou secteur magntique; ils sont quips daccessoires qui permettent leur interfaage avec le chromatographe.

Appareillage Les oprations de formation et de sparation des ions sont effectues dans une enceinte o est maintenu un vide extrmement pouss. Le vide augmente le libre parcours moyen des ions, de manire leur permettre de franchir la distance sparant la source du collecteur dions sans subir ni collision, ni raction ions-molcules. En couplage GC/MS, lionisation est obtenue soit par impact lectronique (EI) soit par ionisation chimique (CI).

Problmes poss lors du couplage GC-MS - Les effluents chromatographiques sortent pression atmosphrique alors que le spectromtre de masse fonctionne une pression < 1,33 10-6 mbar Utilisation de colonnes capillaires fonctionnant avec des dbits de gaz vecteur trs faibles ne ncessitant pas llimination de ce gaz vecteur Utilisation de sparateurs molculaires pour les colonnes remplies Evacuation de latmosphre de la source et de lanalyseur par un dispositif de pompage

- Choix du gaz vecteur impos : lger et pouvant facilement tre limin (He, H2) - Phases stationnaires particulirement stables mme des t leves - Harmonisation du temps dmergence du pic chromatographique avec lenregistrement des spectres de masse capacit informatique importante!

h) Couplage GC/FTIR
Comme en GC/MS, linterfaage est critique. Lluat arrive dans une cellule coulement o il est irradi par un faisceau lumineux provenant dune source IR classique. Le rayonnement rsultant est dispers et les radiations arrivent sur un dtecteur.

6. Analyse qualitative
Comment identifier les diffrents constituants dun mlange?
Utilisation du temps de rtention Utilisation de lajout Couplage avec un spectromtre de masse ou IR Utilisation des indices de rtention

6.1. Identification par le temps de rtention

Injection dun compos standard et comparaison des temps de rtention Facteurs affectant le temps de rtention : Couple analyte/phase stationnaire Temprature colonne Longueur colonne Quantit de phase stationnaire Dbit de gaz vecteur Vitesse dinjection

6.2. Identification par lajout

Injection du mlange analyser Ajout dune quantit connue dun des composs et injection Comparaison des surfaces avant et aprs lajout

6.3. Couplage GC-MS ou GC-IR

Analyse des spectres de masse ou des spectres IR et comparaison des spectres obtenus avec des banques de donnes.

6.4. Identification par les indices de rtention

a) Introduction Identification des pics en chromatographie tape critique Si on ne dispose pas de techniques couples (GC-MS, GC-IR) grandeurs de rtention relatives Nombreux facteurs affectant les temps de rtention

Diffrentes mthodes : elles expriment toutes les valeurs de rtention par rapport des substances de rfrence permet de saffranchir exprimentales des caractristiques

Pour une temprature et une phase stationnaire donnes, on obtient alors des rsultats satisfaisants dans le laboratoire de rfrence.

b) Les indices de Kovats Objectifs : - Caractriser tout compos par un paramtre plus gnral que son temps de rtention dans des conditions donnes. - Contrler priodiquement les performances des colonnes - Classer entre elles les phases stationnaires disponibles pour faciliter le choix de la bonne colonne, afin de rsoudre tout problme particulier de sparation.

1) Droite de Kovats injection dun mlange constitu de quelques composs appartenant une srie homologue de n-alcanes sur une colonne maintenue en rgime isotherme les logarithmes des temps de rtention rduits tR(n) croissent linairement avec le nombre n datomes de carbone des n-alcanes correspondants : log (tR(n) t0) = log tR(n) = a.n + b tR(n) = temps de rtention de lalcane ayant n atomes de carbone a et b = coefficients numriques

Dro te de

o ats

log t' (n)

0

10

15

20

25

nombre d'atomes de

(n)

La pente de la droite obtenue dpend de la colonne dans sa globalit et des conditions de rglage du chromatographe.

2) Indice de rtention de Kovats dun compos Sans changer les rglages de lappareil, injection dun compos X

But : trouver le nombre nX de C quivalents de X Deux mthodes : - la mthode graphique droite de Kovats - la mthode base sur les temps de rtention rduits des deux n-alcanes ( n et n+1 C) qui encadrent X

log t'R( x )  log t'R( n ) Ix ! 100 n  log t'R( n1)  log t'R( n )

Les indices de rtention ne dpendent que de la phase stationnaire et non des conditions de rglage de lappareil. Pratiquement, co-injection du compos X avec le mlange des n-alcanes. Si on dispose de plusieurs indices de rtention dun mme compos, obtenus avec des phases diffrentes meilleure caractrisation.

Excellente reproductibilit mthode plus fiable que la connaissance des seuls temps de rtention (pas de valeur absolue) Il existe quelques tables des indices de rtention sur les phases les plus courantes (squalane, apiezon, SE 30, Carbowax,). Chromatogramme de Kovats juger les performances de la colonne Actuellement, indices de rtention dtrns par les techniques couples plus sres et plus gnrales demploi en tant que mthodes didentification des composs mais matriel plus complexe et plus coteux.

3) Limitations Mthode des indices de Kovats : -pas transposable directement aux analyses en mode de programmation de temprature -valable pour un mode danalyse isotherme -n-alcanes peu solubles dans de nombreuses phases polaires -logarithme donnes perte de sensibilit dans lutilisation des

La droite de rfrence exprime plutt linsolubilit que la polarit des composs lus

b) LRI : linear retention indices Sparation correcte de mlanges complexes programmation de temprature Mais : non linarit du log tR en fonction du nombre de C des n-alcanes trouver de nouveaux indices en mode de programmation de temprature LRI = transposition des indices de Kovats aux sparations GC avec programmation de temprature Plus la t de la colonne augmente, plus la pression de vapeur du solut augmente et plus le tR diminue

Utilisation des temps de rtention totaux (plus de log)

t R( x )  t R( n ) LRIx ! 100 n  t R( n1)  t R( n )

ou des tempratures de rtention (t de la colonne au moment de llution du compos)

TR( x )  TR( n ) LRIx ! 100 n  TR( n1)  TR( n )

Alternatives aux n-alcanes comme sries de rfrence En pratique, toute srie dhomologues prsentant une relation linaire entre la rtention et le nombre datomes de C peut tre utilise. Ex : 2-alcanones, alkyl ethers, FAMEs, hydrocarbures polyaromatiques, Selon le dtecteur utilis, la srie de rfrence peut diffrer : ECD : srie homologue dalcanes halogns FPD : srie homologue de dialkylsulfures NPD : srie homologue de trialkylamines

d) La double indexation chromatographique Mthode rfrences solubles dans des colonnes polaires: esters mthyliques dacides gras (FAME) de C5 C20 deux gradients de temprature suffisamment diffrents modifications dlution utilisation directe de la temprature de sortie comme paramtre exprimental pas de lissage logarithmique plus grande sensibilit

Formule utilise :

TR( )  TR(n ) LRIx ! 100 n  TR( n1)  TR( )

n = nombre datomes de C du FAME prcdent le pic dont on calcule lindice Tx = t de sortie du compos Tn = t de sortie du FAME prcdant le compos Tn+1 = t de sortie du FAME suivant le compos

Utilisation de cette formule valable dans certaines conditions : -il faut utiliser des esters mthyliques conscutifs -il ne faut pas extrapoler ni intrapoler des esters manquants -les esters mthyliques doivent se trouver dans le mlange -le dbit du gaz vecteur et la variation de la temprature de la colonne doivent tre les plus reproductibles possibles

Analyse chromatographique dun mlange complexe de substances : -plus aise en utilisant une seule colonne deux tempratures diffrentes plutt que deux colonnes diffrentes (problmes de reconnaissance des substances moindres) -lordre dlution reste semblable et la surface relative des pics aide lidentification

7. Analyse quantitative
Prcautions dusage : Rinages de la seringue entre chaque analyse Rinages Utilisation de solvants et de solutions talons de grande puret Travailler dans le domaine de linarit du dtecteur Utiliser une technique dinjection approprie pour une bonne reproductibilit Toutes les mthodes de quantification en chromatographie sont des mthodes comparatives et non absolues.

Principe et relation de base : Pour calculer la concentration massique dun compos responsable dun pic sur un chromatogramme, il faut runir deux conditions : Disposer du compos ltat de rfrence pour dterminer la sensibilit du dtecteur son gard Disposer dun moyen pour avoir les hauteurs ou les aires des diffrents pics dlution: Mesure de la hauteur du pic Fiable avec un systme danalyse constant (TCD) Produit de la hauteur par la largeur mi-hauteur Fiable avec un pic gaussien Utilisation dun systme informatis

7.1. Le coefficient de rponse

On admet quil existe pour chaque pic du chromatogramme une relation linaire entre son aire et la quantit du compos correspondant dans lchantillon inject : mi = Si / CRi mi = masse du compos i inject dans la colonne CRi = coefficient de rponse absolu du compos i Si = aire du pic dlution du compos i La quantification consiste mesurer la surface du pic du compos inconnu et dterminer son coefficient de rponse

Dtermination du coefficient de rponse

Surface A

Surface es ics

Surface B
CRB

CRA

Quantit

CR = Surface / Quantit CRB > CRA

7.2. Ltalonnage externe

Comparaison de la rponse dune solution de rfrence la rponse dune solution inconnue de mme nature Le systme danalyse doit rester constant pendant toutes les analyses

?r ?xA!

f r nc A . S x Sr f r nc

7.3. Ltalonnage interne

Meilleure mthode pour obtenir des rsultats prcis et fiables Base sur les coefficients de rponse relatifs de chaque compos doser vis--vis dun standard Permet de saffranchir de limprcision concernant les volumes injects.

Principe : Ajout la solution dtalonnage et la solution analyser dun standard interne en concentration connue et identique Le standard interne doit se comporter comme les composs analyser (mmes proprits physicochimiques, de rtention,) Comparaison de la surface de chaque pic celle du standard interne

Choix du standard interne : Doit tre pur et ne pas se trouver initialement dans lchantillon Structure proche du compos analyser Ne doit pas interfrer avec les autres composs du mlange tR proche du (des) compos(s) doser Doit tre stable dans les conditions analytiques Doit tre inerte vis--vis de lchantillon Son pic dlution doit tre bien rsolu Sa concentration doit tre proche ou suprieure celle des autres soluts pour tre dans la zone de linarit du dtecteur

Mthode :
1) Pour chaque solut doser, on ralise une droite

d'talonnage en mesurant la surface des pics du compos X et du standard interne pour diffrentes concentrations relatives (concentration en standard interne identique et concentration en compos X croissante dans les solutions dtalonnage).
2) Le standard interne est ensuite ajout

lchantillon doser en concentration identique celle de la solution dtalonnage et le mlange est inject
3) La concentration en compos X doser est

dtermine via lquation de la droite dtalonnage

Droite dtalonnage avec standard interne Sx/SSt

Sx / CRx = [x] SSt / CRSt = [St] CRx/CRSt

S x .CR St ?xA! ?St A SSt . CR x

[x]/[St]

7.4. La normalisation interne

Calcul de la quantit relative de chacun des constituants par rapport la quantit totale du mlange Mesure relative donc indpendante de la justesse du volume inject Ncessit de connatre parfaitement le mlange et dluer tous ses composs

S x / CR x % x ! 100 Si / CRi

8. La drivatisation
Mthode utilise lors de la prparation de certains chantillons afin de les rendre analysables en chromatographie gazeuse

Des chantilons destins lanalyse GC sont rgulirement drivatiss afin de rendre des composs trs polaires suffisamment volatiles pour que leur lution puisse se faire des tempratures raisonnables sans dcomposition thermique ou rarrangement molculaire. Exemples: acides organiques, amides, composs polyhydroxyls, acides amins, etc. Mthodes de drivatisation : estrification, silylation ou actylation,...

Exercice : calcul dindices de rtention

Poppi et al., Fuel, 2009, 88, 418-423 Analyse GC-FID de divers types dessence Programmation du four : T initiale : 35C avec une priode isotherme de 15 min Pente de 1C/min de 35C 60C, puis de 2 C/min de 60C 200C.

Rfrences n-Butane n-Pentane n-Hexane n-Heptane n-Octane n-Nonane Composs Toluene o-Xylene

tR (min) LRI 6.452 8.132 12.514 22.867 38.979 62.941 400 500 600 700 800 900
Tempr t re (C)
2 18 14 12 8 6 4 2 1 min 1 2 3 4 6 7 8 9 1 11 12 1C/min 3 C 1 6 C C 2C/min 16

Pro r mm tion e t

fo r

tR (min) LRI ? ? ? 30.700 55.595

2-Me-pentane 10.692

emps (min tes)

2-mthylpentane : lue entre pentane et hexane tR dans la zone isotherme calcul selon Kovats
IK = 100 x [5 + (log10.692-log8.132)/(log12.514-log8.132)] = 563.495

Remarque : impossible dutiliser les tempratures dlution car mode isotherme!!! Essai de calcul selon LRI (tR)
LRI = 100 x [5 + (10.692-8.132)/(12.514-8.132)] = 558.421

Tolune et o-xylne : tR dans la zone dlvation de temprature calcul selon LRI (tempratures dlution ou temps de rtention) Tolune : lue entre heptane et octane (1re pente) T lution tolune = 35 + (30.7-15)x1 = 50.7C T lution C7 = 35 + (22.867-15)x1 = 42.867C T lution C8 = 35 + (38.979-15)x1 = 58.979C
LRI = 100 x [7 + (50.7-42.867)/(58.979-42.867)] = 748.616 (T) LRI = 100 x [7 + (30.7-22.867)/(38.979-22.867)] = 748.616 (tR)

O-xylne : lue entre octane et nonane (2nde pente) T lution o-xylne = 60 + (55.595-40)x2 = 91.190C T lution C8 = 35 + (38.979-15)x1 = 58.979C T lution C9 = 60 + (62.941-40)x2 = 105.882C
LRI = 100 x [8 + (91.190-58.979)/(105.882-58.979)] = 868.676 (T) LRI = 100 x [8 + (55.595-38.979)/(62.941-38.979)] = 869.343 (tR)