Clb5­6/CDC28 in S phase

Cdc28

For G1 Clb5­6 For G2/M

For S
Phosphorylate Cln1/Cln2 Clb1­4 expression 
Regulate replication  Other events for G2/M
SCF binding initiation at origins

Degradation of Cln1/Cln2

Turn­off G1 events
   
 G1

S
   
 Segregation of Sister­chromatids

G1 Replication Mitosis

   
Sister Chromatid Separation does 
not Depend on the Mitotic Spindle

   
 Cohesin: 
SMC1
SMC3
SCC1
SCC3
Etc.

   
 Cohesion is established during 
replication

   
 Dissociation of Cohesin in Prophase

Polo kinase phosphorylates cohesins and 
  dissociate them in chromosome arms. 
 
 Centromere (CEN1) of fission yeast 
requires chromatin silencing

  SWI6=heterochromatin protein 1; rad21=SCC1
 
 Methylation and Acetylation of 
Histones­­­the histone code

methylation

acetylatio
n
   
   
 RNAi Machinery is Required for 
Chromosome Separation

   
RNAi machinery is required for SCC1/Cohesin 
and HP1/Swi6 binding to centromeres
centromere

Histone methylation
Heterochromatin centromere

  HP1/Swi6   Cohesin binding
 Mitotic cyclins
(cyclin A and cyclin B­­­yeast Clb1­4)

Prevent replication 
origin licensing Activate APC/C  Chromosome packaging
Nuclear membrane
Breakdown,
Etc.
Inhibit S­phase Chromosome 
and re­replication segregation

   
Anaphase­Promoting Complex/Cyclosome 
ubiquitin E3 ligase (APC/C) complex: 
a major regulator of mitosis
APC protein complex contains:

CDC27, APC11, APC4, APC13, CDC26, CDC20 (or CDH1),
AMA1, CDC23, MND2/APC15, CDC16, APC9, APC10, APC2, 
APC1, and APC5.
 
Cyclin B/CDC2 PO4
APC APC
PO4

Inactive Active
   
 Cleavage of SCC1 at centromere
by Separin in mitosis

centromere

Separin=Esp1
   
Securin=Pds1
 Condesin:

SMC2
SMC4
CAP­D2
CAP­G
CAP­H, etc.

form chromosome 
loops for high order 
    structure in mitosis
Cyclin A Suppresses the Origin­dependent 
Chromosome Reduplication
CDC6 CDT1 CDC6 CDT1
ORC MCMs ORC MCMs

Origin  CDKs replication Origin

mitosis Cyclin A

   
 Loss of Cyclin A but not Cyclin B 
Induces Polyploid Nuclei
A D

Control

B E

Cyclin A KO

C F

Cyclin B KO

1 day 2 days

   
 KO KO

8N polyploid cells
   
 Spindle Checkpoint in Mitosis

Taxol, Nocodazole, Colchicine
   
  (cohesin cleavage)
 
   
 Mitotic cyclins are destroyed 
by APC/C ubiquitin E3 ligase

APC/C binding

G2 Pro­Meta Meta Ana

CycB Cyc B
CycB CycB
   
 The Mitotic­Exit Network (MEN)

  Nuclear   Nucleolus
 CDC14 in mitotic­exit

   
Growth factor 
Signaling
In mammals

 
Cell Cycle Regulation/Differentiation
 
 The Mammalian Cell Cycle
Cyclin B/CDC2

Cyclin D/CDK4/6

Cyclin A/CDK2

  Cyclin E/CDK2
 
 Cell cycle in mammalian cells
Mammalian has multiple cyclin­dependent kinases (CDKs):

CDC2/CDK1: only for G2/M

CDK2: G1/S and G2

CDK4 and CDK6: G1

CDK3:  may be similar to CDK2 but the level is very low

CDK5:  central role in neuron/nerve system
Isolated by complementing yeast cdc2/cdc28 mutants, PCR, 
or antibody cross­reactivity of yeast CDC2.
   
 Mammalian cyclins
Cyclin A:  S­phase and G2/M

Cyclin B: mitosis

Cyclin E:  G1/S transition

Cyclin D: G1

Cyclin D and cyclin E are called G1 cyclins:
­complement yeast G1 cyclin (Cln1­3) deficient mutants 
­critical for mammalian G1 progression and G1/S transition
   
 Cell cycle and cancer 
Cyclin D: 
­15% of breast cancer has cyclin D1 gene amplification
­Translocated in lymphomas and parathyroid cancers
­Over­expressed in 50­75% breast cancers, as well as in other 
cancers

Cyclin E: 
­elevated level is observed in a variety of carcinomas including 
breast, ovary, endometrium, stomach, colon, and acute lymphocytic 
leukemias. 

   
 CELL CYCLE CONTROL BY CDKS AND CDK INHIBITORS

Cyclin B/CDC2 M

G2 G1 p16 p15 TGFβ

Cyclin D/CDK4 & 6
Cyclin A/CDK2 S

Cyclin E/CDK2 p27 growth control

p21

p53 DNA damage

   
Mammalian CDK inhibitors­the Ink4 family
CDK4 inhibitor/Ink4 family: 

p16Ink4a, p15Ink4b, p18Ink4c, and p19Ink4d:

­binds only to CDK4 or CDK6
­inhibits cyclin D/CDK4/6 activity

The p16Ink4A gene is located on chromosome 9p21, its 
loss is associated with familial melanomas and 
pancreatic carcinomas

 
Isolated as CDK4 interaction proteins
 
 Mammalian CDK inhibitors:
the p21/p27 family
The p21Cip1, p27Kip1, and p57Kip2:

­binds to the binary complexes of G1 cyclins:
cyclin D/CDK4/6, cyclin E/CDK2

­also binds to cyclin A/CDK2 and cyclin B/CDC2

­isolated as CDK binding proteins

   
 Retinoblastoma susceptibility 
gene product (Rb, Rb105)

­located on chromosome 13q14
­Loss of heterozygosity causes retinoblastomas in 
children 

tumor

­Rb107, Rb130, and Rb105 form the Rb family.

­bind to E2F transcription factors and suppress E2F activity
   
 P53: the most mutated tumor 
suppressor in human cancers
­More 50% human cancers have p53 
mutation

­Regulates the expression of p21 CDK 
inhibitor for cell cycle arrest

­Regulate pro­apoptosis proteins (Bax, 
etc.) to induce apoptosis.
   
 Cyclin E
Pol alpha
PCNA
    Etc.
 CDK inhibitors and cancer
­Loss of p16Ink4a/p19ARF at 9p21 in familial melanomas and 
many other cancers

­Loss of p53 and Rb in human cancers

­Loss of p27 is associated with malignant human cancers and serves 
as best prognostic marker for breast and other cancers

­p21 and p16 are associated with cellular senescence or cell aging

   
 Regulation of replication origin firing 
by cell cycle regulators
CDC6 CDT1
G1 ORC MCMs

Pre­replication Origin 

Cyclin E and cyclin A
S

   
 Regulation of cyclin expression
in the cell cycle

   
 G1 cell cycle regulation
Nutrients, Growth factors, 
Cell attachment, etc.
Cyclin D Expression:

Cyclin A
G1 G1/S S G2/M

PO4
p27Kip1
p27Kip1 CDK2
Cyclin E
CDK2
inactive active
    Cyclin E
 How cells sense the cell mass and external 
signals to degrade p27 in late G1? 

Cyc D Cyc E Cyc E

CDK4 CDK2 CDK2 S phase
p27 p27
p27
Growth factors
SKP2
Cell attachment p27 degradation

Mitotic regulation in G1 (APC/C­CDH1)

G0 G1 Late G1
   
      
 Elevation of SKP2 is Associated 
with Many Human Cancers
­SKP2 as the most clinically significant 
marker for human prostate cancers (not p53, 
Rb, cyclin D)

­elevation associated with premalignant and 
malignant prostate cancers (60­80%)

­associated with PSA,  Gleason score, and 
p27 down­regulation
   
 Regulation of p27Kip1, p21Cip1, and 
cyclin E by SCF ubiquitin E3 ligases

CUL1 CUL1
SKP1 SCF SKP2
SKP1 SCFFBW7/hCDC4
FB SKP2
            FB FBW7
           
PO4 PO4
p27 Cyclin E
PO4 Notch, Myc, etc.
p21
FB: F­box
  More than 40 F­box proteins exist
 
 p16Ink4a and p19ARF are both tumor suppressors and 
are located on overlapping sequences on 9p21

ARF:
Alternative Reading Frame

   
   
 Cell Cycle Regulation
APC/C­CDC20/CDH1

Cyclin B/CDC2

DNA damage

DNA damage
Replication MDM2
Cyclin A/CDK2 Cyclin D/CDK4/6

p27 and p21 p53
Cyclin E/CDK2
SCF­SKP2 E3 Ligase
  Growth factors and cell 
 
attachment
 DNA damage response in mammals

p21

   
 Why mitosis does not occur in S phase cells?

ATR/CHK1

CDC25C

G2/M 
   
 DNA damage response in the cell cycle

PO4
C Cdc25A
SCFβ­TRCP
Cdc25A

G2 arrest
CDK2
G1 arrest
G1 arrest
   
 The G2 checkpoint

   
 Genome stability and cancer

­polyploidy and aneuploidy

­chromosomal deletion, gene amplification, translocation

­increased mutational rate

Defects in the cell cycle checkpoints

   
 Mitosis versus Meiosis

   
 (SCC1)

+ Polo

 + Polo

(Rec8)

   
  asymmetric cell division and cell fate
 
 Asymmetric cell division 
and cell fate determination
CCCH Proteins

CCCH Proteins

Differential 
proteolysis of 
CCCH finger 
proteins by cullin 2
in germ and 
somatic cells
To keep the germ 
cell fate in C. elegans

   
 Future direction:

How to cure human diseases 
such as cancer and proliferation­ 
or age­related diseases?

­Mechanisms
­Disease genes
­Therapeutic strategies
   
 Regulation of Rb proteins in G1