CINETICA DE REACCIONES

EN ENZIMAS LIBRES E
INMOVILIZADAS
M. Sc. Guillermo Linares Lujn
Reacciones Catalticas
Catalizador: Sustancia que afecta la
velocidad de reaccin sin alterar el
equilibrio y sin experimentar ningn cambio
Enzimas
Complejos Enzimticos
rganos de Clulas
Clulas Enteras (viables y no viables)
El Rendimiento de las Reacciones
Catalticas se caracteriza por variables
como:
Velocidad de Reaccin
Rendimiento de Producto a partir de Sustrato
Otras.
Analisis Ingenieril: 2 tipos de Reacciones
Reacciones Homogneas:
Utilizan los principios de Teora de
Reacciones
Reacciones Heterogneas:
Principios de Transferencia de masa.
Principios de Teora de Reacciones.
Reacciones Homogneas
Cuando la Temperatura y todas las
Concentraciones del sistema son uniformes.
Fermentaciones industriales
Reacciones Enzimticas en recipientes
mezclados.
1. Teora Bsica de las
Reacciones
a. Termodinmica de la Reaccin
b. Cintica de la Reaccin
1. Teoria Basica de las
Reacciones
a. Termodinamica de las Reacciones

A + b B c C + d D


Sustancias qumicas
coeficientes estequiometricos
Equilibrio: No existe fuerza impulsora para
producir cambio. Lmite de capacidad de
transformacin qumica.
Constante de Equilibrio:
Concentraciones de
Equilibrio
Adems, k depende de la temperatura:
RT
G
LnK
o
rx
A
=
AG
o
rx
: Es la variacin de la Energa libre Standard por mol
de A reaccionado. Condiciones Standard: 1atm.25C

o
B
o
A
o
D
o
C
o
rx
bG G dG cG G + = A
Para reacciones exotermicas, k disminuye conforme
aumenta la temperatura y para reacciones endotrmicas k
aumenta conforme aumenta la temperatura
Si AG es negativo (-), exotrmica, y de gran
magnitud, entonces k es muy grande.

Entonces se favorece mas a los productos que a
los reactantes, esta Reaccin se considera
Irreversible.

La mayoria de las Reacciones enzimticas y
celulares son consideradas irreversibles.

Entonces la reaccin se detiene cuando la
[Reactantes] = 0
Por lo tanto:
La termodinamica de equilibrio tiene una
aplicacin limitada a las Reacciones
enzimticas y Celulares.
b. Cintica de la Reaccin

1. Rendimiento de la Reaccin:
Cantidad de producto formado o acumulado
por cantidad de reactante suministrado o
consumido
2 5 2 6 12 6
2 2 2 6 12 6
CO 2 OH H C 2 O H C
O H 6 CO 6 O 6 O H C
+
+ +
consumido te tan reac
de moles o masa
presente producto
de moles o masa
aparente iento dim n Re
consumido te tan reac
de moles o masa
formado producto
de moles o masa
Teorico iento dim n Re
=
=
2. Velocidad de la Reaccin.
A + b B c C + d D
Velocidad de cambio de masa del sistema:


msica Velocidad
C G
msico caudal
o
__
i
__
R R M M
dt
dM
+ =
Para el Compuesto A :
AC
Ao
__
Ai
__
A
R M M
dt
dM
=
Para un sistema cerrado:
0 M M
Ao
__
Ai
__
= =
dt
dM
R
A
A
=
R
A
: Velocidad de
reaccin con respecto a A
Por analoga
dt
dM
R
B
B
=
dt
dM
R
C
C
=
dt
dM
R
D
D
=

d oductivida Pr
produccin de Velocidad
Formas de Expresar la Velocidad:
- Velocidad Total:


- Velocidad Volumtrica:
|
.
|

\
|
=
s
mol
,
s
kg
dt
dM
R
A
A
|
.
|

\
|
=

= =
s . m
kg
dt
dC
r
dt
dM
V
1
V
R
r
3
A
A
A A
A
- Velocidad Especfica:
1
A
A
A
A
A
s
s . enz kg
kg

s . cel kg
kg
: r
dt
dM
E
1
r
dt
dM
X
1
r

|
.
|

\
|
|
.
|

\
|

=
Cinetica de la Reaccin
Relacin existente entre la velocidad de
reaccin y las condiciones que afectan dicha
velocidad como son: la concentracin de
reactantes y la temperatura.
Se describen por expresiones cinticas.
a A + b B c C + d D
La reaccin es de orden a con respecto al
componente A y de orden b con respecto al
componente B.
El orden global de la reaccin es (a+b)
b
B
a
A A
C . C . k r =
Constante de velocidad o coeficiente de velocidad de
reaccin, independiente de la concentracin de
reaccionantes pero dependiente de otros factores como
la temperatura.
Efecto de la temperatura sobre la
velocidad de reaccin
Ecuacin de Arrhenius:
RT
Ea
e . A k

=
Donde:
k : constante de velocidad
A: Constante de Arrhenius, factor de frecuencia o
factor preexponencial.
Ea: Energa de Activacin
R: Constante de los gases ideales
T: Temperatura Absoluta
Logaritmando la ecuacin de Arrhenius:
RT
Ea
LnA Lnk =
Cuando Ea es positivo y grande indica un rpido aumento
de la velocidad de reaccin con la temperatura
Calculo de la velocidad de
Reaccin
En sistemas cerrados
con una mezcla de
reaccin a volumen
constante.


Tiempo
(minutos)
Concentracin de
oxigeno (C
A
, ppm)
0
1
2
3
4
5
6
8
10
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25
dt
dC
r
A
A
=
Pendiente de una curva
suavizada dibujada a
travs de los datos
Un mtodo obvio para determinar la
velocidad de reaccin consiste en trazar
tangentes a la curva a diferente tiempos y
calcular sus pendientes. Sin embargo este
trabajo es muy dificil, altamente subjetivo y
los resultados dependen del modo en que se
han suavizado los datos.
Sin embargo existen otros mtodos:
1. Mtodo del rea equivalente a la
velocidad media
Tiempo
(minutos)
Concentracin
de oxigeno
(C
A
, ppm)

AC
A


At

AC
A
/ At

dC
A
/ dt
0
1
2
3
4
5
6
8
10
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25

-0.45
-0.33
-0.26
-0.20
-0.15
-0.12
-0.16
-0.08

1
1
1
1
1
1
2
2

-0.45
-0.33
-0.26
-0.20
-0.15
-0.12
-0.08
-0.04
-0.59
-0.38
-0.29
-0.23
-0.18
-0.14
-0.11
-0.06
-0.02
Inconveniente:
Dificultad de
aplicacin si los datos
presentan dispersin
2. Mtodo de la pendiente en el
punto medio
Tiempo
(min)
Concentracin
de oxigeno
(C
A
, ppm)

c





dC
A
/ dt
0
1
2
3
4
5
6
8
10
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25
1
1
1
1
1
1
1
2
2
--
-0.78
-0.59
-0.46
-0.35
-0.27
-0.28
-0.24
--
--
-0.39
-0.30
-0.23
-0.18
-0.14
-0.09
-0.06
--
( ) ( ) | |
c c +

t
A
t
A
C C
DATOS EXPERIMENTALES
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
2 4 6 8
t
C
A
A
A
t
Cinetica de Reaccin para
Sistemas Biolgicos
Pueden ser de orden cero, de primer orden o
una combinacin de ellas denominada
cintica de Michaelis Menten.

1. Cintica de Orden Cero
La velocidad de Reaccin es independiente
de la concentracin de reactante.
r
A
= K
0
(kmol/m
3
.s)
r
A
: Es la velocidad volumtrica con respecto a A
K
0
: Constante de velocidad de orden cero.
Esta velocidad depende de la cantidad de
catalizador presente
k
0
= k
0
.e k
0
= k
0
.X
k
0
,k
0
: Constante de velocidad especfica
para enzimas y celulas.
t . k C C
t . k C C
dt . k dC
dt . r dC
dt
dC
r
0 0 A A
0 0 A A
t
0
0
C
C
A
A A
A
A
A
0 A
=
=
=
= =
} }
} }
2. Cintica de Primer Orden:
t . k LnC LnC
dt . k
C
dC
dt . C . k dC
dt . r dC
dt
dC
r
C . k r
1 0 A A
t
0
1
C
C
A
A
A 1 A
A A
A
A
A 1 A
A
0 A
=
=
=
=

=
=
} }
3. Cintica de Michaelis Menten
A m
A max
A
C k
C . V
r
+
=
r
A
: Velocidad volumetrica de reaccin
C
A
: Concentracin de Reactante A
V
max
: Velocidad Mxima a una concentracin infinita de A
k
m
: Constante de Michaelis Menten para el reactivo A
Adaptando los simbolos convencionales:
S K
S . V
V
m
max
+
=
Para una reaccin enzimtica:
P E ES S E
2 1 1
K K ; K
+ +

V
max
= K
2
.ea donde: ea : concentrac. Enzima activa
A elevadas concentraciones de Sustrato,
V=V
max
.
S
S . V
V
max
=
La velocidad es independiente de la concentracin
de Sustrato
En este intervalo de concentracin la reaccin es de
orden cero.
A bajas concentraciones de sustrato;
S<<<<km
S .
K
V
V
m
max
=
Donde V
max
/k
m
: es un coeficiente de velocidad de
primer orden para la reaccin.
Efectos de las condiciones de
Operacin sobre la velocidad de
Reaccin enzimtica

Determinacin de las constantes
cinticas enzimticas a partir de datos
obtenidos en un reactor discontinuo
Obtener datos de velocidad de reaccin V en
funcin de la concentracin de sustrato S
Generalmente solo se utilizan datos de velocidades
iniciales. Es decir deben realizarse varios
experimentos discontinuos con diferentes
concentraciones de sustrato.
Son preferibles los datos iniciales por que las
condiciones experimentales, S, E se conocen con
mayor precisin al comienzo de la reaccin.

Representacin de Michaelis
Menten
Generalmente pobre
Representacin de Lineweaver -
Burk
Dobles Recprocas
max max
m
V
1
S
1
.
V
k
V
1
+ =
Utiliza un proceso de linealizacin que distorsiona
el error experimental en V, por que los errores se
ven aumentados a concentraciones bajas de sustrato
Suposiciones del modelo
de Minimos Cuadrados
Representacin de Lineweaver - Burk
y = 3204.8x + 92.901
R
2
= 0.9941
0
100
200
300
400
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
1/S
1
/
V
Representacin de Eadie - Hofstee
Se multiplica a la ecuacin:
|
|
.
|

\
|
m
max
k
V
V
Por:
max max
m
V
1
S
1
.
V
k
V
1
+ =
Se ordena y se obtiene:
m m
max
k
V
k
V
S
V
=
Distorsiona los errores existentes en los datos originales
Representacion de Eadie Hofstee
y = -0.0464x + 0.0005
R
2
= 0.9108
0
0.00005
0.0001
0.00015
0.0002
0.00025
0.0003
0.00035
0.0004
0.00000 0.00200 0.00400 0.00600 0.00800 0.01000
V
V
/
S
Representacin de Langmuir
Multipicando la ecuacin:
max max
m
V
1
S
1
.
V
k
V
1
+ =
Por S
max max
m
V
S
V
k
V
S
+ =
Minimiza la distorsin de los errores experimentales, por lo
que se recomienda su utilizacin para el clculo de las
constantes
Representacin de Langmuir para enzimas libres
y = 87.782x + 2034.9
R
2
= 0.9706
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
0 10 20 30 40 50 60
S
S
/
V
S
49
36.8
24.5
12.3
S/V
6107
5571
4254
2961
Vmax = 0.011 g/l.s
Km = 23.18 g/l
Representacin Lineal Directa
Se representa V en el eje Vertical y S en el
eje horizontal negativo para cada
observacin (V,S).
Relativamente insensible a lecturas errneas
individuales.
Recomendada para enzimas cuyo
comportamiento obedece a una cintica de
Michaelis Menten.
Cintica de Desactivacin
Enzimtica
Factores que afectan la estabilidad:
Temperatura, pH, fuerza inica, fuerzas
mecnicas, sustancias extraas, detergentes,
metales pesados.
Contribuyen a la disminucin de la enzima
activa.
ea ei
La velocidad de desactivacin es de primer
orden:
rd = kd. ea

Donde:
rd: Velocidad volumtrica de desactivacin
kd: Constante de velocidad de desactivacin
Donde:
e
ao
: es la concentracin de enzima activa en un tiempo 0
Como Vmax depende de la cantidad de enzima, conforme
disminuye la ea disminuye Vmax.
) t . k exp( . e e
e . k r
dt
de
d 0 a a
a d d
a
=
= =

t . k
0 max max
t . k
0 a 2 max a 2 max
d
d
e . V V
e . e k V e k V

=
= =
La estabilidad de las enzimas se expresa
generalmente en trminos de vida media o
periodo de semidesactivacin
th: Vida media: tiempo necesario para que
se pierda la mitad de la actividad enzimtica
como resultado de la desactivacin
th . k
0 a
0 a
t . k
0 a a
0 a
a
d
d
e . e
2
e
e . e e : Si
2
e
e th

=
=
=
d
d
d
k
2 ln
th
th . k 2 ln
th . k
2
1
ln
=
=
=
La velocidad de desactivacin enzimtica depende fuertemente
de la temperatura.
RT
Ed
d
e . A k

=
Ed: Energa de activacin para la desactivacin de la enzima
DATOS EXPERIMENTALES
Reacciones Heterogneas
Se producen en importantes gradientes de
concentracin y Temperatura.
Reactante deben ser transportados al lugar de la
reaccin. Transferencia de Masa.
Para Biocatalizadores Slidos debe conocerse la
concentracin de sustrato existente en cada punto
del interior del slido a fin de calcular la velocidad
local de conversin.
Esto no puede medirse, pero si puede calcularse
por la teora de Difusin Reaccin.
Inmovilizacin:
. Polmeros de gel: poroso, relativamente
blandos.
- Slidos porosos: Cermica, vidrio poroso, etc.
Se les conoce como PORTADORES.

Ventajas de Biocatalizadores inmovilizados
- Operacin en Continuo.
- Utiliza el mismo material catalitico.
- Mayor Estabilidad.
- Mayor vida media.
Gradientes de Concentracin y Velocidades
de Reaccin en Catalizadores Slidos
Velocidades de Reaccin
Verdadera y Observada
Velocidad Verdadera o Intrinseca: Velocidad local
que depende de la posicin.
- Sigue los principios de Rx homogneas
- Dificiles de medir.
Velocidad Observada: Velocidad global de reaccin
para el catalizador entero.
- Veloc. Enz. Inm. < Veloc. Enz. Libre
- Las ecuaciones cinticas incluyen parmetros
de transferencia de masa.
Interaccin entre transferencia de
Masa y Reaccin
Si una reaccin es lenta; la tranferencia de masa
no es limitante. Debido a que se suministra de
manera rpida la cantidad de sustrato que
demanda la reaccin.
- La velocidad observada esta
determinada por el proceso de Reaccin
mas que por la transferencia de masa
Si la reaccin tiende a ser muy rpida, entonces la
transferencia de masa ser demasiado lenta.
- La velocidad observada reflejara la
velocidad de transferencia de masa.
A estas reacciones se les denomina
Reacciones Limitadas por la transferencia
de masa (difusin)

Tambin se puede diferenciar la influencia
relativa de la transferencia de materia
externa e interna.
Limitaciones Difusionales
Antes de que tenga lugar la reaccin, el sustrato
debe difundirse hasta la enzima inmovilizada.
En una catalisis heterognea llevada a cabo
mediante enzimas inmovilizadas la velocidad de
reaccin esta determinada por: pH, Temperatura y
Sustrato; Ademas de Velocidad de transporte de
protones, sustrato, calor a travs de la matriz de
soporte a las celulas o enzimas inmovilizadas.

Existen interacciones estricas con la
matriz.
Se ha demostrado que mientras mayor sea el
peso molecular del sustrato ser inferior la
actividad de las enzimas inmovilizadas.
La cintica intrnseca de una enzima es
aquella que sigue la enzima libre soluble
La cintica inherente y efectiva es la de un
catalizador inmovilizado en ausencia o en
presencia de factores modificantes.
Principales factores:
Efectos conformacionales.
Efectos Estricos
Efectos microambientales
El comportanmiento cintico de las celulas
enteras inmovilizadas se complica, por la
presencia de una barrera adicional de
difusin. Membrana y Pared Celular.
Determinacin de las
Limitaciones Difusionales
Las limitaciones difusionales pueden
dividirse en internas y externas, y estn
cuantificadas por una serie nmeros
Adimensionales que nos dan una idea sobre
cual de ellas es la limitante en el proceso.

Numero de Peclet (Pe)
Indica la relacin entre el transporte de las
molculas por flujo y por difusin.



Donde: v=velocidad del flujo;
S=concentracin; D=difusividad efectiva

dr
dS
D ) J ( : difusin de Velocidad La
S . v ) J ( fluido del flujo El
D
B
=
=
Entonces dimensionalmente el nmero de
Peclet es :




Donde
Re=Numero de Reynolds;
Sc=Numero de Schmitd
Sc . Re
D
r . v
dr
ds
. D
S . v
J
J
Pe
e
e
D
B
= = = =
Si Peclet (Pe) es mayor que 1.0 predomina
el flujo de sustrato a nivel de fase lquida. Y
cuando Peclet (Pe) es menor que 1.0
predomina la difusin. Por lo tanto cuanto
mayor sea el nmero de Peclet, mayor ser
la proporcin de molculas de sustrato que
se transportan en la fase lquida, esto
implica una limitacin del transporte al
nivel del slido poroso o partcula
biocataltica.
Numero de Reynolds
Relacin de las fuerzas de Inercia o
cinticas y las fuerzas viscosas de la
corriente fluida.
L
p L p
v . . d
Re
. di ) di . N (
Re

=
Reynolds de paleta, en
tanque agitado
Reynolds para lecho
fluidizado.
Numero de Schmidt (Sc)
Relacin entre el componente cortante de la
difusividad y la difusividad de transferencia
de masa.

=
. D
Sc
S
Ds: Difusividad molecular del componente A en el
lquido
Limitaciones Difusionales
Externas
Se deben a que la velocidad de difusin del
sustrato esta restringida por la delgada
pelcula del fluido mal mezclado que rodea
cada partcula del soporte. (capa de Nernst-
Plank)
Estos efectos se observan en las velocidades
de reaccin y pueden determinarse por
varios mtodos
Km y Vmax representan los parmetros efectivos
de la cintica de hidrlisis y km* y Vmax* son los
parmetros inherentes a la cintica de hidrlisis
con catalizador inmovilizado.
a
m
es la Superficie efectiva de reaccin.
K
L
: coeficiente de transferencia de masa en la fase
lquida.
r
3
r
3
4
r 4
V
S
a
V
k
V
k
a
1
K
3
2
x
x
m
max
m
*
max
*
m
m
L
=
t
t
= =
|
|
.
|

\
|

=
Nmero de Sherwood (Sh)
Representa la relacin entre las velocidades
de transferencia de materia global y por
difusin a travs de la capa lmite
o
=
=
dp
Sh
) Sc . (Re 6 . 4 Sh
33 . 0
Donde: o es el espesor de la capa limitante y dp es el
diametro de la partcula biocataltica
Donde:
D
S
:Difusividad del sustrato en el lquido.
o =
o
=
. K D
D
K
L S
S
L
Limitaciones Difusionales
Internas
Son debidas al pequeo tamao
(tortuosidad) de los poros del soporte,
impidiendo el flujo del fluido dentro de los
poros de las partculas en condiciones de
operacin normal, produciendose una
reduccin del coeficiente de difusin con
respecto al obtenido en solucin libre:
Donde: Ds es el coeficiente de difusin en
solucin libre; De el coeficiente de difusin
efectivo dentro de las partculas del soporte;
la porosidad de las partculas y t el factor
de tortuosidad, que representa la longitud
que deben atravesar las molculas que se
difunden entre dos puntos de una partcula.
t

=
S
e
D
D
Factor de Efectividad (q)
Es la relacin entre la velocidad de reaccin
observada u aparente de la celula
inmovilizada y la velocidad de una cantidad
equivalente de celula libre.
En general es menor que la unidad.
max
*
max
V
V
libre celula . reac . max . Veloc
da inmoviliza celula . reac . max . Veloc
= = q
Numero de Biot (Bi)
Indicador para encontrar el predominio de
restricciones difusionales. Si este valor es
elevado, no se considera las limitaciones
difusionales externas.
o
=
. D
r . D
Bi
s
e
Modulo de Thiele Generalizado
(|)
Tambin mide las limitaciones difusionales
que dependen de los parmetros cinticos
inherente (Vmax* y Km*) y del Coeficiente
de Difusividad efectiva (De)
De . k
V
3
r
*
m
*
max
= |
Modulo de Thiele Observable
(u)
( )
AS
m
2 2
C
K
1
ln 1 1 2
= |
(

|
|
.
|

\
|
| +
|
| + | + q | = u
Criterios de Weisz
Si u < 0.3; q ~ 1 y las limitaciones debidas
a la transferencia interna de materia son
despreciables.
Si u > 3; q es sustancialmente < 1 y las
limitaciones debidas a la transferencia
interna de materia son importante.
En el intervalo intermedio: 0.3< u < 3 es
necesario realizar un analisis mas detallado.
Clculo de la Difusividad
Efectiva De , Mtodo de Crank
(
(
(
(
(

o + o +
|
|
.
|

\
|

o +
+
o +
o
=

=1 n
2
n
2
2
2
n e
Lo
l
q 9 9
r
t q D
exp ) 1 ( 6
1
1
C
C
Donde:
C
L
: concentracin de sacarosa en la superficie de
la partcula en funcin del tiempo
C
Lo
: concentracin inicial de sacarosa en la
solucin
q
n
: es la raz positiva diferente de cero de la
ecuacin trascendental
r: radio de la perla o pellet
n: nmero de partculas esfricas
V: volumen de la solucin
o: relacin de volumen de solucin y volumen de
esferas biocatalticas
2
n
n
n
q 3
q 3
q tan
o +
=
|
.
|

\
|
t
= o
3
r
3
4
n
V
Determinacion de De
Para celulas inmovilizadas en perlas de
alginato:
V= 100 ml
n = 1000 perlas
dp = 3.3 mm
2
n
n
n
q
3
q tan
q
3
|
|
.
|

\
|
= o
( )
(
(
(
(
(

|
|
|
|
|
.
|

\
|
o + o +
|
|
.
|

\
|

+ +
o + o +
|
|
.
|

\
|

+
o + o +
|
|
.
|

\
|

o + +
o +
o
=
2
n
2
2
2
n e
2
2
2
2
2
2 e
2
1
2
2
2
1 e
Lo
L
q 9 9
r
t q D
exp
. . . .
q 9 9
r
t q D
exp
q 9 9
r
t q D
exp
1 6 1
1
C
C
( )
(
(
(
(
(

|
|
|
|
|
.
|

\
|
o + o +
|
|
.
|

\
|

o + +
o +
o
=
2
1
2
2
2
1 e
Lo
L
q 9 9
r
t q D
exp
1 6 1
1
C
C
A
B
C
Y logaritmando:
t
r
q
D
C
AB
ln ) A C ln(
2
2
1
e L

|
.
|

\
|
=
GRACIAS